地塞米松诱导小鼠胸腺细胞线粒体去极化与凋亡进程研究

目的研究地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡进程中线粒体去极化作用特点。方法无菌获取Balb/c小鼠胸腺细胞,设对照组和DEX组;在5 h时点,利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;利用DiOC6(3)/PI双染流式细胞术检测细胞线粒体去极化与死亡;利用DiOC6(3)/Annexin V-PE双染流式细胞术检测凋亡过程中的去极化现象。结果在1×10-6mol/L DEX诱导下,小鼠胸腺细胞在5 h凋亡百分率为(36.20±5.11)%,对照组为(4.10±0.98)%,差异显著(P<0.01);DEX组坏死百分率为(4.07±0.24)%,对照组为(1.25±0.25)%,差异显著(P<0.01)。DEX组线粒体去极化增强仍存活的细胞所占百分率为(46.77±6.21)%,显著高于对照组的(12.80±4.55)%(P<0.01)。DEX组线粒体去极化增强且已启动凋亡的细胞为(35.34±4.19)%,显著高于对照组的(7.21±0.61)%(P<0.01)。DEX组线粒体去极化作用增强未凋亡的细胞为(13.68±1.27)%,显著高于对照组的(6.85±0.92)%(P<0.01)。结论DEX诱导小鼠胸腺细胞发生典型细胞凋亡和线粒体去极化增强,在该进程中,线粒体去极化增强发生在细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻之前。     

原子力显微镜在生命科学中的应用

早在八十年代初期 ,人们已能使用扫描隧道显微镜 (ｓｃａｎｎｉｎｇｔｕｎｎｅｌｉｎｇｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ,ＳＴＭ)获得原子分辨率的物体表面地形图[1] 。从那时起 ,人们便期待ＳＴＭ能够成为ＤＮＡ测序和获得原子分辨率的蛋白质表面图像工具。虽然以上的这些梦想尚未成为现实 ,然而由此却发展了一系列的扫描探针显微镜(ｓｃａｎｎｉｎｇｐｒｏｂｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ,ＳＰＭ )。其中原子力显微镜 (ａｔｏｍｉｃｆｏｒｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ,ＡＦＭ ) [2 ] 的应用更是逐渐从最初的物理学、材料科学与工程领域拓宽到生命科学领域 ,…     

三七提取物对小鼠淋巴细胞活化、增殖和腹腔巨噬细胞产生NO的影响

目的 分析三七提取物（SE）对小鼠淋巴细胞体外活化、增殖以及对巨噬细胞产生NO的影响，探讨其免疫抑制作用的机制。方法 以多克隆刺激剂刀豆蛋白A（ConA）刺激淋巴细胞活化和增殖，利用荧光标记的单克隆抗体双染技术和流式细胞术检测SE对小鼠CD3^＋T细胞CD69表达的影响；通过CFSE染色流式细胞术检测SE对淋巴细胞增殖的影响；用脂多糖（LPS）或淋巴细胞培养上清液（lymphocytes culture supernate，LCS）体外诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO，采用Griess试剂盒检测NO的水平。结果 在ConA刺激6h后小鼠T细胞活化率为59．79％，50、100μg／ml的SE可显著降低其活化率，分别为46．50％和37．73％（P〈0．01）。在培养72h后，不同浓度SE能明显抑制ConA诱导T细胞的增殖。SE在12．5～100μg／ml的浓度范围内对淋巴细胞培养上清和LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO的释放具有抑制作用（P〈0．01）。结论 三七提取物对小鼠淋巴细胞的活化、增殖有明显抑制作用，并能抑制巨噬细胞产生NO（P〈0．01）。     

人外周血CD8+T细胞CD28、CD56及CD57表达水平的老年性改变

目的:通过对健康老年人与青年人外周血CD8⁺T细胞CD28、CD56及CD57表达水平的比较性研究,探讨免疫衰老的细胞学机制。方法:采用三色免疫荧光标记流式细胞术分析青年组(20-35岁)与老年组(60-75岁)外周血CD8⁺CD28⁺、CD8⁺CD56⁺及CD8⁺CD57⁺T细胞水平。结果:老年组外周血CD8⁺CD28⁺T细胞明显低于青年组,阳性百分率分别为34.07±5.29和49.84±7.43(P＜0.05);而老年组CD8⁺CD56⁺T细胞及CD8⁺CD57⁺T细胞均明显高于青年组,前者阳性百分率分别为6.60±2.40和2.10±0.35,后者阳性百分率分别为41.82±6.01和22.89±2.80(P＜0.05)。结论:老年人CD8⁺T细胞CD28、CD56及CD57的表达率均随年龄增长有明显改变;CD28表达下降可能是引起免疫系统功能降低的重要原因,而CD56、CD57表达水平的增加则可能是机体对细胞免疫功能下降的一种代偿性适应。     

放线菌酮对小鼠T细胞活化影响的血清免疫药理评价

目的:利用淋巴细胞的早期活化标记物CD69的表达,探讨CHX对T淋巴细胞体外活化的影响。方法:分离小鼠淋巴结细胞,分别与放线菌酮(CHX)、CHX血清预孵1h,加入多克隆刺激剂继续培养,总计培养24h后收获细胞,进行双色免疫荧光标记,以流式细胞术对T细胞的CD69分子表达情况进行分析。结果:在CHX(终浓度10μmol/L)、CHX血清作用下,ConA活化的T细胞CD69表达百分率依次为(12.33±4.75)%、(20.39±6.32)%,与相应对照[分别为(64.67±3.00)%、(64.35±10.13)%]比较均有显著差异(P＜0.01);相应的,药物作用下PDB活化的T细胞CD69表达的百分率依次为(13.07±11.05)%、(6.10±4.91)%,与相应对照[分别为(84.79±6.87)%、(79.68±4.17)%]比较均有显著差异(P＜0.01)。结论:CHX(10μmol/L)、5%的CHX血清对ConA、PDB活化的T淋巴细胞均显示了强烈的抑制效应,证明T细胞活化过程中CD69的表达存在蛋白质的从头合成,对"CD69表达中CD69分子可能储存于细胞浆及其表达的发生并不需要蛋白质的从头合成"这一观点提出质疑。     

自发性流产小鼠模型主动脉旁淋巴结CD45+CD86+细胞亚群分析

目的：检测主动脉旁淋巴结(PLN)CD45+CD86+细胞，用于间接分析小鼠母-胎界面局部免疫状况。 方法： CBA/J×DBA/2、未孕CBA/J雌鼠和CBA/J×BALB/c小鼠分别作为自发性流产模型（A组）、未孕对照（N组）和生育力正常对照（F组）。采用流式细胞术检测CD45+CD86+细胞在CD45+细胞中的百分率（简称CD45+CD86+百分率）和这些细胞的绝对数，其中单个核细胞从孕5.5、9.5和13.5 d小鼠PLN和孕13.5 d胎盘分离获得。为鉴定CD86+细胞所属类型，采用CD3、CD19和DX5分别作为T细胞、B细胞和NK细胞特异性标志物进行流式细胞检测。 结果： A组胚胎吸收率和绝对数(29.3%, 1.8±1.0)均显著高于F组(4.8%, 0.3±0.5, P<0.01)。相应地，A组孕13.5 d PLN CD45+CD86+细胞百分率和绝对数也均显著高于F组(分别为27.5%±14.0% vs 12.3%±7.1%和1 362±687 vs 615±353, P<0.01)。未孕CBA/J雌鼠PLN CD45+CD86+百分率为7.5%，与孕5.5 d A组小鼠相近(10.6%)，至孕9.5 d时显著升高至23.9%(与未孕鼠相比，P<0.01；与孕5.5 d小鼠相比，P<0.05)，并保持高水平直至13.5 d(27.5%)。相反，在CBA/J×BALB/c小鼠孕期未观察到这种趋势。 结论： CBA/J×DBA/2小鼠流产开始发生于孕9.5 d，此时CD45+CD86+细胞数增多，提示这些细胞与胚胎吸收相关。从PLN中分离淋巴细胞进行表型分析，有助于间接评价母-胎界面局部免疫状况。     

脐血和外周血单个核细胞培养上清影响HIV-1感染的体外实验研究

目的：体外研究脐血和外周血单个核细胞（CBMC和PBMC）培养上清对HIV-1感染的影响，为发现抗HIV-1的可溶性因子奠定基础。 方法： PHA刺激CBMC和PBMC后5 h和12 h收集上清，加入荧光标记的HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞培养体系中，2 h后在倒置荧光显微镜下观察其对细胞融合的影响；用Luminex 100TM分析仪检测收集上清中细胞因子含量。 结果： PHA刺激CBMC和PBMC后5 h和12 h的上清均可抑制HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞融合，同一时间收集的PBMC和CBMC上清对HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞融合的抑制作用无差异，但5 h上清的抑制作用强于12 h的上清；CBMC 5 h上清中促炎症细胞因子比PBMC 5 h上清为低，而CCR5配体MIP-1α和RANTES则比PBMC 5 h上清高，差异显著（P＜0.05）。 结论： 通过脐血和外周血单个核细胞可以制备有效抗HIV感染的可溶性因子，可能为艾滋病治疗药物提供新的来源。     

地塞米松影响小鼠胸腺细胞c-Myc表达以及凋亡研究

目的: 研究在地塞米松(DEX)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡过程中c-Myc信号变化特点及其与下游caspase-3变化的相关性,以进一步探讨c-Myc在小鼠胸腺细胞凋亡过程中的作用机制。方法:以终浓度1 μmol/L地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡,通过Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术测定30 min、3 h、6 h和9 h凋亡和坏死细胞比率,在6 h时点电镜观察细胞形态,利用SDS-PAGE及Western blot检测0 min、30 min、1 h和3 h细胞内c-Myc和caspase-3信号变化特点。结果:在1μmol/L DEX诱导下,小鼠胸腺细胞在30 min、3 h、6 h和9 h凋亡比率分别为(5.70±0.46)%、(35.79±1.13)%、(50.61±2.15)%和(35.52±1.66)%,对照组分别为(5.97±0.25)%、(10.20±0.71)%、(12.10±0.66)%和(15.45±0.51)%,组间差异显著(P＜0.01)。相应DEX组坏死比率分别为(4.58±0.51)%、(4.66±0.67)%、(25.36±1.64)%和(46.99±2.67)%,对照组分别为(4.38±0.39)%、(4.19±0.73)%、(9.63±1.25)%和(13.38±0.72)%,组间差异显著(P＜0.01);电镜观察结果显示DEX处理6 h见较多典型凋亡细胞。对照组在0 min即可检测到c-Myc的明显表达,30 min略见增多,1 h和3 h呈微弱的下降趋势;DEX组c-Myc在0 min表达强于对照组,30 min最强,而在1 h和3 h显著减弱;对照组caspase-3随培养时间延长而逐渐增多,而DEX组caspase-3在0 min表达增多,30 min最多,而在1 h和3 h显著减少。结论:本研究结果提示DEX诱导的小鼠胸腺细胞凋亡呈现c-Myc介导的细胞凋亡模式,而且在该过程中c-Myc和caspase-3信号存在着反馈抑制调节的可能性。     

HIV-1 Vpr蛋白对C8166细胞毒性研究

目的 利用腺病毒系统研究HIV-1 Vpr蛋白在T细胞来源的C8166细胞内的高表达以及细胞内该蛋白对T细胞毒性.方法 将表达目的 蛋白Vpr的重组腺病毒rAd-vpr和空白载体病毒rAd-vector分别感染对数生长期的C8166细胞,流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布、凋亡和坏死.用Hoechst-PI荧光染色观察细胞的凋亡和坏死,JC-1荧光染色测定线粒体膜电势.结果 Annexin V-PI染色及Hoechst-PI染色一致显示HIV-1 Vpr能显著诱导C8166细胞凋亡和坏死;PI细胞周期结果表明HIV-1 Vpr能阻滞C8166细胞于G2期;JC-1荧光染色法测定HIV-1 Vpr致C8166线粒体膜电势下降.结论 细胞内HIV-1 Vpr介导的T细胞毒性包括线粒体功能障碍、细胞周期的G2期阻滞和细胞的死亡.     

白藜芦醇对小鼠T细胞活化、增殖及细胞因子分泌的影响

目的：研究白藜芦醇（RSV）对小鼠T淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响，为阐明其免疫抑制作用提供实验依据。方法：无菌分离小鼠淋巴结细胞．加入不同浓度的RSV预先孵育1h，用多克隆刺激剂佛波醇酯和离子霉素刺激T细胞活化增殖。采用^3H—TdR掺入法检测RSV对T细胞增殖的影响；用RT-PCR检测IL-2及IFN-γ mRNA的表达；用胞内细胞因子染色法分析IL-2和IFN-γ的分泌。结果：RSV能抑制T细胞增殖，也能在mRNA水平及蛋向水平上抑制IL-2及IFN-γ的分泌。结论：RSV对T细胞的免疫抑制作用，可能与其抑制T细胞的活化、增殖和细胞因子的分泌有关。