CBS的讨论课在胚胎学教学中的实践与探讨

科学技术发展迅猛 ,高等教育面临着新的机遇与挑战 ,新时期对人才培养的要求高 ,传统教育不利于人才培养 ,不适应形势发展所需 ,教育必须改革势在必行。医学教育改革在国内外掀起了高潮 ,我校结合国情、校情设计了以病例为引导(CBS)的讨论课 ,CBS在人体胚胎学课程中有了初步尝试 ,收到良好效果 ,我们实施的主要步骤是 :1、收集筛选病案 ;2、编写学生手册和教师手册 ;3、加强课前准备 :学生准备和教师准备 ;4、收集分析反馈意见 :学生反映与教师反映。存在问题 :学生方面与教师方面的。师生们均反映 CBS讨论课是一种很好的学习模式。如何调动学生学习的主动性、积极性 ,在 CBS讨论课中发挥学生的主动作用 ,这是搞好教改的基础和根本保证。如何提高教师的业务水平 ,发挥教师的主导作用这是搞好教改的关键     

HPLC法测定盐酸艾司洛尔注射液含量的改进

摘 要 目的：改进盐酸艾司洛尔注射液含量测定的HPLC方法。方法: 采用HPLC法,色谱柱为Welch Xltimate C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为乙腈 甲醇 磷酸盐缓冲液（15∶20∶65）,检测波长为222 nm,流速为1.0 ml·min^-1,柱温为30℃,进样体积为20 μl。结果:盐酸艾司洛尔的浓度范围在12.26～196.16 μg·mL^-1时,峰面积与浓度呈良好的线性关系（r=1.000 0）;平均回收率为101.2%（RSD=0.7%,n=9）。结论:建立的盐酸艾司洛尔注射液HPLC简便、快速、准确、专属性强,比现行标准更能反应药物含量的真实水平,更适用于盐酸艾司洛尔注射液的含量测定。     

神经干细胞移植对脑挫伤大鼠神经功能恢复神经元存活和轴突再生的影响

目的 观察神经干细胞(NSCs)移植对脑挫伤大鼠神经功能恢复影响,并探讨其机制.方法 24只SD大鼠以投币法分为3组:假手术组、手术组和NSCs移植组.采用自由落体致大鼠皮质运动区脑损伤模型,将培养纯化并鉴定的NSCs于术后当天移植入损伤位点周围;术后0d、3d、7d、14d行神经功能缺失(NSS)评分,观察动物运动和平衡功能缺损与恢复情况;14d时取脑组织用免疫荧光技术检测hochest标记的移植NSCs在体内存活、迁移;用神经元核蛋白(NeuN)、生长相关蛋白(GAP-43)抗体检测并计数宿主神经元存活和局部轴突再生.结果 与假手术组比较,脑外伤组大鼠脑挫伤后即出现不同程度抽搐,瘫痪,平衡功能缺失.神经功能缺损评分较假手术组明显升高,并随时间推移有所降低.而NSC移植组的NSS评分至第7天后与单纯手术组比较有明显减少[(4.38±0.74)分,(5.50±1.07)分,P＜0.01].Ho-chest标记的移植NSCs能在宿主脑组织存活,并向四周迁移.免疫组化染色显示宿主NeuN阳性神经元[(51.46±3.303)个,(42.83±5.401)个,P＜0.01]和GAP-43阳性纤维数量[(13.3±1.7)个,(8.7±1.1)个,P＜0.01]在NSC移植组明显增多.结论 NSCs移植能在挫伤脑组织存活、迁移,并促进宿主神经元存活、局部轴突再生和改善脑挫伤大鼠神经功能.     

大鼠脊髓横断损伤后CNTF mRNA的表达变化

目的 观察睫状神经营养因子(CNTF)mRNA在脊髓全横断大鼠损伤后的表达变化,探讨CNTF在脊髓损伤修复中的作用.方法 40只SD大鼠,随机分为假手术组和脊髓损伤组(SCI组),后者根据取材时间又分为术后1 d、3 d、7 d和14 d组.SCI组动物选择在T10节段全横断脊髓,假手术组除不横断脊髓外其余步骤与SCI组相同.动物处死前进行BBB评分评估后肢运动功能的变化.取手术部位头端和尾端0.5 cm脊髓,采用RT-PCR技术检测CNTF mRNA在各组脊髓中的表达变化.结果 行为学评分随着损伤时间的推移呈小幅度增加,但后肢无运动功能恢复;术后1 d组和3 d组横断点尾端脊髓中CNTF mRNA的表达与假手术组相比上调(P<0.05).而7 d组和14 d组的表达量又逐渐恢复正常,与假手术组比较差异无统计学意义.结论 脊髓损伤早期CNTF的表达变化可能与脊髓损伤修复有关.     

结合基因本体论和计算机模式识别技术筛选应答神经损伤的重要效应基因

目的利用基因本体论(gene ontology,GO)方法结合计算机模式识别技术从基因芯片的海量数据中筛选出应答神经损伤的重要基因,并选择一种可能的关键基因Cd44对生物信息学结果进行验证。方法利用MATLAB软件对基因芯片数据(GSE26350)进行数据挖掘和GO分析,利用不同功能模块的基因在主成分得分图上的位置分布,从得出的核心基因分子谱中选择Cd44。干扰Cd44与其配体硫酸软骨素C(chondroitin sulfate C,CSC)的正常结合,观察其对神经突起延伸的影响。结果 GO分析结果显示,主成分得分图上红色*标记的第1类基因在分子功能方面主要与信号传递、受体活动和蛋白结合等相关。Cd44是此类基因6个外围效应蛋白基因之一,其功能多样。向培养的神经元培养基中添加不同试剂干扰CSC与Cd44的正常结合可不同程度缓解CSC对神经突起延伸的抑制作用。结论本实验初步证明CSC与筛选出的神经元表面分子Cd44的结合可抑制神经突起的延伸,这说明利用GO分析基因芯片可筛选出特定生理过程中的重要分子。     

成年大鼠嗅鞘细胞的原代培养与鉴定

目的 探索一种简便、经济实用的获得成年大鼠嗅鞘细胞的方法.方法 无菌条件下取2.5月龄的SD大鼠嗅球最外二层,经分散后将细胞种植于含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基中.采用差速贴壁和阿糖胞苷抑制相结合的方法培养.定期进行形态学观察并摄片.在培养第14 d行胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和神经生长因子受体(NGFRp75)的免疫细胞化学染色鉴定,并计算嗅鞘细胞的纯度.结果 培养的嗅鞘细胞呈双极、多突起形、扁圆形三种,其中扁圆形较少,嗅鞘细胞的纯度在90%以上.结论 差速贴壁和阿糖胞苷化学抑制相结合进行成年大鼠嗅鞘细胞原代培养是一种简便经济实用的方法,可获得高纯度的嗅鞘细胞.     

避免 Goigi 银染标本表层产生铬银沉淀的一个方法

Golgi 镀银染色法自从问世以来一直是研究神经组织形态学的重要手段.经典的 Golgi 染色法是先将神经组织用重铬酸钾进行铬化处理,然后浸染硝酸银[1].     

针刺对备用背根节神经元CNTF和PDGF表达的影响

目的探讨部分去背根后针刺对备用背根节神经元睫状神经营养因子(CNTF)及血小板源性生长因子(PDGF)表达的影响。方法制备猫双侧备用背根模型(切除双侧L1～L5、L7～S2背根节,保留L6背根节为备用背根节)。针刺位于右侧备用根支配区的两组穴位。针刺7d及14d后取备用背根节用CNTF抗血清(1∶500)及PDGF抗血清(1∶200)行免疫组织化学ABC法染色。分别记数各组阳性总、大及中小神经元的数量。结果正常组左右L6背根节的细胞数无差异,CNTF、PDGF阳性神经元数在7d、14d时与正常组比较无差异。针刺侧CNTF阳性总、大及中小神经元数在针刺7d时均显著多于非针刺侧(P<0.05),而针刺14d时,只有阳性大神经元数多于非针刺侧(P<0.05)。PDGF阳性总及大神经元数针刺7d时多于非针刺侧(P<0.05),针刺14d时,阳性总及中小神经元多于非针刺侧(P<0.05)。结论针刺可促进去背根后备用背根节CNTF、PDGF的表达,这种促进作用显效的时间因不同因子和不同种类的背根节神经元而异。