Skp2及Thr187磷酸化p27kip1蛋白在非霍奇金淋巴瘤中的表达及相关性分析

研究发现,p27kip1为细胞周期重要调控蛋白,其水平及功能异常参与了非霍奇金淋巴瘤(NHL)的发生发展.S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)能够特异性识别第187位苏氨酸(Thr187)磷酸化的p27kip1,并介导其多聚泛素化及降解,这一过程的异常直接影响细胞内p27kip1蛋白的绝对含量,并可能与NHL的发病机制有关[1-2].我们检测了与p27kip1降解相关的Skp2及Thr187磷酸化p27kip1蛋白在NHL中的表达,以探讨二者的表达异常与NHL发生发展的关系.     

p27^kipl及相关分子Skp2在U937细胞增殖过程中的表达变化及相互关系

p27^kipl为CIP／KIP家族的主要成员，对细胞周期起负调节作用。由于p27^kipl的蛋白水平主要受到S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase—associated protein 2，Skp2）介导的细胞周期依赖性、底物特异性的泛素-蛋白酶体途径调节，因此p27^kipl降解水平的调节对其正常生物学功能的发挥至关重要。Skp2为人类F-box蛋白家族成员，介导p27^kipl的多聚泛素化及随后的蛋白水解。研究发现Skp2在人类多种肿瘤中都有表达，并且与肿瘤组织的分化程度及预后相关。我们旨在对Skp2参与介导的p27^kipl的泛素-蛋白酶体途径降解与p27^kipl的稳定性之间的关系进行探讨，运用目前比较公认的血清饥饿合并释放方法同步化处理U937细胞，结合Western blot、免疫荧光双标记及激光共聚焦技术检测在不同生长状态下p27^kipl、Skp2及其他细胞周期相关分子在U937细胞内的表达和定位情况。     

Cyclin D3正、反义表达质粒在淋巴瘤细胞系Raji中的转染与鉴定

目的 :构建人类cyclinD3正义和反义真核表达质粒 ,分别转染到淋巴瘤细胞系Raji细胞中 ,为探讨cyclinD3基因对淋巴瘤细胞生物学行为的影响提供研究基础。方法 :以Raji细胞总RNA为模板 ,通过RT -PCR获取cyclinD3全长cDNA ,克隆入 pGEM -T载体 ,再亚克隆到真核表达载体pcDNA3 .1中 ,构成含cyclinD3的表达质粒 pcD NA3 -cyclinD3。再运用DNA重组技术将cyclinD3基因反向克隆到pcDNA3 .1中 ,构建成cyclinD3反义表达质粒pcDNA3 -ascyclinD3。用脂质体介导的基因转染方法 ,将cyclinD3正、反义表达质粒和空质粒分别导入Raji细胞 ,经G418筛选建立稳定转染细胞株 ,用WesternBlot方法鉴定cyclinD3基因的表达。结果 :酶切鉴定和测序分析证实 ,实验成功构建了cyclinD3正、反义表达质粒。与转染cyclinD3正义表达质粒和空质粒的细胞相比 ,转染cyclinD3反义表达质粒的Raji细胞中cyclinD3表达水平下降。 结论 :正、反义cyclinD3在淋巴瘤细胞中的转染和表达 ,为进一步研究cyclinD3在淋巴瘤细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡中的作用奠定了基础     

布地奈德联合特布他林及异丙托溴铵雾化吸入治疗急性发作期中度儿童哮喘临床研究

目的探讨布地奈德联合特布他林及异丙托溴铵雾化吸入治疗急性发作期中度儿童哮喘的临床疗效及对患儿骨桥蛋白(OPN)、对氧磷酶1(PON1)水平的影响。方法选取医院2017年1月至2019年1月收治的急性发作期中度哮喘患儿148例,按随机数字表法分为观察组和对照组,各74例。两组患儿均予常规治疗,并予吸入用布地奈德混悬液、硫酸特布他林雾化吸入用溶液雾化吸入;观察组患儿加用吸入用异丙托溴铵溶液雾化吸入;两组均根据体质量(以20 kg为界)用药,用药频次均为每6 h 1次,连续7 d。结果观察组总有效率为94.59%,显著高于对照组的75.68%(P<0.05);观察组患儿治疗后的白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、OPN水平均显著低于对照组,PON1水平显著高于对照组(P<0.05),气喘、咳嗽、哮鸣音消失时间及住院时间均显著短于对照组(P<0.05);观察组与对照组不良反应发生率相当(10.81%比6.76%,χ^2=0.759,P>0.05)。结论布地奈德联合特布他林及异丙托溴铵雾化吸入治疗急性发作期中度儿童哮喘,能降低患儿血清炎性因子和OPN水平,升高PON1水平,缩短临床症状缓解时间及住院时间。     

β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ在大鼠脑损伤后的表达分析

目的：探讨脑损伤后β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ（β-1,4-galactosyltransferase-Ⅰ,β-1,4-GalT-Ⅰ）及其催化合成的β-1,4-半乳糖苷键（β-1,4-galactosylated carbohydrate,Galβ1-4GlcNAc）糖链与炎症的相关性.方法：运用免疫印迹法检测β-1,4-GalT-Ⅰ及Galβ1-4GlcNAc糖链在大鼠术后大脑皮质中的表达情况;采用免疫荧光双标,观察β-1,4-GalT-Ⅰ及Galβ1-4GlcNAc糖链在大脑皮质中的细胞定位.结果：大鼠脑损伤后,大脑皮质中β-1,4-GalT-Ⅰ及Galβ1-4GlcNAc糖链的表达水平呈现时间依赖关系,脑损伤后β-1,4-GalT-Ⅰ表达逐渐增加并持续在较高的水平,Galβ1-4GlcNAc糖链表达呈动态变化过程,在炎症早期上调达到高峰后有所降低.β-1,4-GalT-Ⅰ及其催化合成的Galβ1-4GlcNAc糖链主要定位于大脑皮质的活化的小胶质细胞中.结论：β-1,4-GalT-Ⅰ及其催化合成的Galβ1-4GlcNAc糖链在正常大脑皮质中仅有少量表达,脑损伤后两者表达均明显增高;术后高表达的β-1,4-GalT-Ⅰ主要定位于小胶质细胞,这提示该分子可能参与炎症介导的小胶质细胞的生物学行为的改变.     

鬼臼乙叉甙对星形胶质细胞瘤表达β1,4-半乳糖基转移酶的影响

目的研究鬼臼乙叉甙(Etoposlde，又称VP16)影响人星形胶质细胞瘤SHG-44细胞周期过程中，与N-糖链合成有关的β1，4-半乳糖基转移酶Ⅰ、Ⅱ、V(β-1，4-galactosyltransferaseⅠ、Ⅱ、Ⅴ，β—1，4-GalT—Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ)表达变化。方法首先应用流式细胞仪技术分析VP16处理SHG-44细胞过程中细胞增殖情况的变化，再采用Northern Blot方法分析处理过程中的SHG-44细胞中β—1，4-GaT—Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ的表达变化。结果流式细胞仪检测表明，细胞培养基加入120μmol／LVP161～6h后能引起SHG-44细胞的S期阻滞。Northern Blot显示，VP16作用1～6h过程中，β-1，4-GalT—Ⅰ、Ⅴ表达无显著变化。而β—1，4-GalT-Ⅱ表达在此过程中则有升高趋势。结论VP16能够引起星形胶质细胞瘤细胞SHG-44细胞周期改变过程中，β—1，4-GalT—Ⅰ、Ⅴ的表达无变化，而β—1，4-GalT-Ⅱ的表达明显升高。提示VP16引起肿瘤细胞周期改变，可能通过影响β-1，4-GalT-Ⅱ的表达，引起有关蛋白质的糖基修饰而实现的。     

人类细胞周期蛋白D3反义表达质粒的构建

目的：构建人类细胞周期蛋白D3(cyclin D3)反义表达质粒，为今后利用反义核酸阻断技术研究cyclin D3基因的功能提供基础。方法：运用DNA重组技术将人cyclin D3基因反向克隆到真核表达载体pcDNA3．1中，构建成cyclin D3反义表达质粒pcDNA3--ascyclinD 3。结果：通过酶切鉴定及测序分析证实，实验成功构建了人cyclin D3反义表达质粒。结论：cyclin D3反义表达质粒pcDNA3--ascyclin D3的成功构建，为进一步研究cyclin D3的生物学功能及其在肿瘤发生、发展、诊疗和预后中的作用奠定了基础。     

高尿酸血症与冠心病的相关性研究

目的探讨高尿酸血症与冠心病的相关性。方法选择冠心病患者180例，分为急性冠脉综合征组及稳定型心绞痛组，另设对照组150例。分别测定血清尿酸、血糖以及血压、体重指数（BMI）、血脂水平。结果冠心病患者尤其是急性冠脉综合征患者血清尿酸水平与对照组相比，有统计学显著意义（P〈0．01），相关分析提示血清尿酸水平与冠心病显著相关。结论高尿酸血症是冠心病尤其是急性冠脉综合征的危险因素之一。     

循证护理对小儿难治性肺炎患儿生活质量改善的效果评价

难治性肺炎一般是指大环内酯类抗生素治疗1周及以上,并且患者的症状、体征及辅助检查显示病情仍在加重[1].患儿中发病率较高,严重影响患儿的生存质量,也极大地影响其生长发育.除外治疗对患儿的影响,护理对于改善患儿的综合生存质量也有着积极的作用.本文就循证护理模式对小儿难治性肺炎患儿生存质量的影响进行观察,现报道如下.     

p27kip1和Skp2在大鼠坐骨神经切断后脊髓中的表达

目的 观察坐骨神经切断后大鼠脊髓中p27^kip1和Skp2的表达变化。方法 将成年SD大鼠随机分为正常对照组和实验组。对实验组实行坐骨神经切断术。用Western blot和免疫组织化学技术检测脊髓中p27^kip1和Skp2的表达变化。结果 Western blot结果表明坐骨神经切断后脊髓中p27^kip1表达持续下降，Skp2表达上调。免疫组织化学结合免疫荧光双标技术显示，在正常组和实验组，p27^kip1和Skp2在脊髓神经元和胶质细胞均有表达。在腹角神经元，损伤后p27^kip1 免疫染色减弱，Skp2增强。坐骨神经损伤前后脊髓腹角p27^kip1和Skp2阳性细胞数目改变呈负相关（r=-0．6892，P〈0．01）。结论 坐骨神经损伤可影响脊髓中p27^kip1和Skp2的表达水平及亚细胞定位，两者改变呈负相关。