EB病毒gp85 N端片段的原核表达与初步鉴定

目的：构建EB病毒的原核表达载体，并在大肠杆菌中进行表达；分析非搪基化的EB病毒包膜搪蛋白gps5N端截短片段的抗原性。方法：采用基因工程技术，以EB病毒B95—8细胞培养上清为模板，PCR扩增EB病毒的BXLF2基因N端片断。PCR产物经HindⅢ和xho Ⅰ双酶切，并插入原核表达载体pGEX-5T，构建pGEXST-85N重组表达质粒。在大肠杆菌BL21中诱导表达gp85N蛋白。纯化表达的蛋白进行蛋白免疫印迹鉴定，并免疫BALB/C小鼠。结果：序列分析表明。插入片段的序列与GenBank登录的参考序列完全—致。重组表达的蛋白的分子量约为45kD,与预期大小相符。可溶性重组蛋白纯化后免疫雕LuyC小鼠，经ELISA检测获得了高效价的多克隆抗体，且gp85单抗可识别所表达的gp85N抗原。Western blot结果显示，该抗原可与小鼠免疫血清起特异反应。结论：表达并纯化的EB病毒的截短gp85N重组蛋白具有良好的抗原性，为下一步分析所产生抗体的生物学特性提供条件。     

人血浆蛋白S成熟肽基因在大肠杆菌中的融合表达

目的 构建人血浆蛋白S的原核表达载体并诱导其表达。方法 自行设计引物，采用PCR法，以现有人血浆蛋白S真核表达载体为模板，扩增人血浆蛋白S成熟肽的编码序列。PCR产物经EcoRI和BamHI双酶切后，克隆至GST融合表达载体pGEX-2T中，在E．coli BL21中诱导GST-人血浆蛋白S融合蛋白的表达。结果 对重组质粒的序列分析表明，插入片段的序列与Gen Bank登录的人血浆蛋白S基因编码序列完全一致。10％SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳显示，在IPTG的诱导下，BL21重组菌高效表达分子量约为96kD的产物．并可通过GST亲和层析柱纯化。结论 人血浆蛋白S编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-2T，并在E．coli BL21中获得表达。     

抗磷脂抗体靶抗原-β2糖蛋白Ⅰ的原核表达和鉴定

目的 构建β2糖蛋白Ⅰ(β2—GNI)的原核表达载体并诱导其表达。方法利用PCR技术从β2—GPI昆虫表达载体中扩增出编码β2—GNI目的DNA片段，将其插入GST融合表达载体pGEX—2T多克隆位点，以IPTG诱导GST融合β2—GNI的表达。结果 凝胶电泳显示昆虫表达载体的PCR扩增产物的分子量大小与目的片段大小相符。对重组质粒(pGEX—2T—β2—GNI)分析表明，插入片段的序列与发表的β2—GNI基因编码序列一致。在IPTG的诱导下，BL21重组菌高效表达出一个分子量约为64kDa产物，与预期相符。结论 β2—GNI编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX—2T。     

5种纤维蛋白原测定方法的比较

对我国裳睡的纤维蛋白原测定方法－－亚硫酸钠盐析法、热浊度法、免疫浊度法地和ＰＴ－ｄｃｒ法与ＮＣＣＬＳ推荐的克劳斯法进行了比较。研究表明盐析法、热浊度法等物理化学方法与克劳斯法结果存在较大差异，免疫浊度法差异也较大，ＰＴ－ｄｅｒ法与克劳斯法差异较小，建议我国临床实验室应尽快采用准确、快速和简便的克劳斯法。     

福州地区8872例宫颈液基细胞学检查分析

目的了解福州地区妇女宫颈病变状况,达到对宫颈癌的预防和早期诊断。方法采用泰普液基细胞学（TCT）检查分析2011年1～5月到我院体检中心做过妇科TCT项目体检的8872名女性。结果 8 872名女性TCT检查中,其中ASC-US：106例,占1.2%;ASC-H：11例占0.12%;AGC：5例,占0.06%;LSIL：31例,占0.35%;HSIL：6例,占0.07%。结论液基细胞学检查提高了细胞学诊断的准确性,达到早期诊断以及早期治疗的目的 。     

抗Hp IgG抗体和胃蛋白酶原联合检测在早期胃癌筛查中的应用进展

胃癌是世界第四大常见肿瘤,东亚(日本、中国)、东欧、中美洲和南美洲是胃癌的高发区[1].胃癌的发生与胃部细菌感染密切相关,其中幽门螺杆菌(Hp)最为常见[2-3].较长的病史为胃癌癌前病变的检测和及时有效的干预提供了机会[4].因此,早期发现胃癌是提高胃癌生存率、降低死亡率的关键.     

GST融合的人血浆蛋白S成熟肽的原核表达

目的：构建人蛋白S(protein S，PS)的原核表达载体并诱导其表达。方法：自行设计引物，通过PCR技术，以人PS真核表达载体为模板扩增PS成熟肽编码序列，PCR产物经EcoR1／BamHI双酶切后，将其克隆至GST融合表达载体pGEX—2T中，在E．coli BL21中诱导GST—PS融合蛋白的表达。结果：聚丙烯酰胺凝胶电泳(10％SDS—PAEG)显示。在IPTG的诱导下，BL21重组菌高效表达出一个分子量约为96kD产物，与预期大小相符，该产物可通过GST亲和层析柱纯化。对重组质粒的序列分析表明，插入片段的序列与Genebank登录的人PS基因编码序列完全一致。结论：人PS编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-2T，并在E．coli BL21中获得表达，为进一步研究奠定了基础。     

基层用药快速检验之浅见

基层用药质量监督是当前基层药监部门的主要职能,基层用药的快速检验是切实发挥好这一职能的有效技术手段.现结合工作谈几点拙见.     

福建地区先天性甲状腺功能减退症患儿的基因突变谱分析

目的探讨福建地区先天性甲状腺功能减退症(CH)患儿相关致病基因的突变特点。方法回顾性分析2019年1月至2020年9月116例在福建省妇幼保健院临床确诊的无血缘关系的CH患儿的临床资料, 其中女50例, 男66例, 确诊时平均年龄为(20±10)d。采用靶向外显子组测序技术检测患儿29个甲状腺素合成或甲状腺发育相关基因的突变频率、类型及分布特点。结果在116例CH患儿中, 105例共检出351个潜在致病基因突变, 检出率为90.5%(105/116);其中, 突变频率最高的基因为DUOX2(66.4%, 77/116), 其次为TG(23.3%, 27/116)、DUOXA1(23.3%, 27/116)和TPO(12.1%, 14/116), 均与甲状腺激素合成有关。而这105例患儿中, 70例携带双等位基因突变, 除3例为甲状腺发育不良相关基因(2例TSHR和1例GLIS3)外, 其余的也均与甲状腺激素合成有关, 携带率最高的基因为DUOX2(68.8%, 59/70), 其次是TG(8.6%, 6/70)、TPO(4.3%, 3/70)、DUOXA2(1.4%, 1/70)和DU...     

纤维蛋白原的生物化学及检测方法进展

纤维蛋白与消耗性凝血病,心血管疾病,糖尿及恶性肿瘤等密切相关;Ｆｉｂ的遗传变异所致的出血或血栓性疾病及反复自发流产也屡见报道,Ｆｉｂ测定在临床上越来越受到重视。本文就纤维蛋白原的生物化学特性,遗传性缺陷及检测方法进展作一简要综述。