抗原诱发的γ-干扰素测定

据世界卫生组织推测,世界1/3的人口已经感染了结核菌^[1],这给全球结核病的控制造成了很大的阻碍。目前,发病率低的国家结核病控制的一个重要措施是有目的地筛检出潜在性结核感染者（LT-BI）并进行预防性治疗。在高负担国家如我国仍不得不把主要精力放在活动性结核病的诊断和治疗上,潜在性结核感染的筛查仅限于高危人群如儿童,开放性结核的密切接触者以及人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者等。近5年来潜在性结核感染的诊断成了国际上的一个研究热点并有了突破性的进展。现将研究情况及目前的认识作以总结。     

结核患者Th1/Th2细胞因子和前炎性因子研究

目的研究结核患者细胞因子变化规律和调控机制,以帮助临床鉴别诊断.方法对54例结核患者、18例肺癌患者和12例健康人血清、肺泡灌洗液、胸水及脑脊液等多种标本的各种细胞因子进行检测.结果结核患者血清白介素（IL）-12、IL-18等Th1细胞因子及IL-10、IL-4等Th2细胞因子水平均较高.各种细胞因子在脑脊液中含量均较低;干扰素γ（IFN-γ）在胸水渗出液中含量很高.前炎性因子IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在结核患者中水平较高.IL-10与TNF-α的比值在结核和肿瘤患者之间有显著差异.结论细胞因子检测有助于结核病和肺癌患者的鉴别诊断.     

特异性核酸内切酶检测结核分枝杆菌的乙胺丁醇耐药基因突变

目的 探讨Surveyor酶法在结核分枝杆菌耐药基因突变中的应用.方法 采用Surveyor酶法检测结核分枝杆菌临床分离株60株,其中已经测序证实有embB基因突变的乙胺丁醇耐药株45株,无基因突变的敏感株15株.经聚合酶链反应扩增,杂交形成异源双链,Surveyor酶切,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳判断其有无突变存在.结果 15株敏感株均无embB基因突变,45株耐药株均存在embB基因突变热点306位密码子的点突变,其中33株为ATG→GTG,3株为ATG→ATT,5株为ATG→ATA,2株为ATG→ATC,2株为ATG→CTG.经Surveyor酶法测定,45株embB基因突变株均呈现2条带形,15株敏感株均显示1条带形.结论 Surveyor酶法与测序法的结果完全相符.采用Surveyor酶法进行异源双链分析,具有简便、稳定、低耗、灵敏性和特异性高的特点.     

高效液相色谱法测定复合制剂中异烟肼和利福平含量

抗结核药物的复合制剂有其突出的优点。其含量的测定繁杂费时，需要逐个药物分别测定。本文报告一种可以同时测定异烟肼和利福平两种药物的高效液相色谱法。本法用Ｓｐｈｅｒｉｓｏｒｂ　Ｃ８（４．６×２５０ｍｍ，５μｍ，ＩＤ）色谱柱，以甲醇：０．０５ＭＮａＡｃ／ＨＡＣ缓冲液（ｐＨ６．９０）＝６５：３５（Ｖ：Ｖ）为流动相，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，紫外检测器检测（＝２５４ｎｍ）。结果：异烟肼和利福平的保留时间分别为３．０１１ｍｉｎ和６．７９ｍｉｎ，在１．０～２０．０μｇ／ｍｌ浓度范围内线性关系分别为：Ｙ＝２０１７．４０Ｘ－３３９．９５，ｒ＝０．９９９７；Ｙ＝２１００．７０Ｘ＋１２５．７６，ｒ＝０．９９９５，日内变异分别为 １．８３％、２．０８％；日间差异分别为 １．８９％、２．１７％。回收率分别为 ９９．７２％、９８．２７％。本法快速，可同时测定两种药物。     

抗原诱发的γ-干扰素测定

据世界卫生组织推测,世界1/3的人口已经感染了结核菌,这给全球结核病的控制造成了很大的阻碍.目前,发病率低的国家结核病控制的一个重要措施是有目的地筛检出潜在性结核感染者（LT-BI）并进行预防性治疗.在高负担国家如我国仍不得不把主要精力放在活动性结核病的诊断和治疗上,潜在性结核感染的筛查仅限于高危人群如儿童,开放性结核的密切接触者以及人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者等.近5年来潜在性结核感染的诊断成了国际上的一个研究热点并有了突破性的进展.现将研究情况及目前的认识作以总结.     

人参,黄芪,枸杞子对老年大鼠心肌β受体的影响

用放射配基结合分析法测定心肌β受体，观察老年大鼠心肌β受体的变化及中药人参、黄芪、枸杞子的影响。结果表明，心肌β受体最大结合容量（Bmax）在3、8、15月龄组间无显著差异，26月龄组显著降低。人参、黄芪、枸杞子对15月龄大鼠心肌β受体Bmax无明显影响，人参和枸杞子可显著提高26月龄大鼠心肌β受体Bmax，黄芪虽可使26月龄大鼠心肌β受体Bmax有所升高，但无显著性差异。表明衰老大鼠心肌β受体密度降低，中药可使之显著升高。提示对心肌β受体数目的调节是这些中药发挥抗衰老作用的分子基础之一。     

人参,黄芪,枸杞子对老年大鼠一些内分泌激素的调节作用

用放射免疫分析法观察大鼠老化过程中一些内分泌激素的改变及几种中药的调节作用。结果表明，大鼠血浆Ｔ３、Ｔ４皮质含量随增龄而降低，人参、黄芪、枸杞子可以使之提高。结论：对内分泌系统的调节是中药抗衰老作用一个方面。     

抗原诱发的γ干扰素测定在结核诊断中的应用

Objective To evaluate the value of early secreted antigen terget 6000(ESAT-6)-induced interferon-gamma(IFN-γ)response in vitro in diagnosis of tuberculosis and mycobacterium tuberculosis infections.Methods ESAT-6 was added into peripheral whole blood to induce IFN-γ,and concentration of IFN-γ was detected by ELISA.Comparing with saline control,the percentage of increase was regarded as the value of ESAT-6 induced IFN-γ response.ESAT-6-induced IFN-γ response was analysed in the following four aspects:to compare with the people intimate contact to tuberculosis(60 cases),the sputum culture confirmed active tuberculosis patients(46 eases)and healthy people(55 cases);to compare with children(68 cases),adolescents(52 cases)and elder people(45 cases)by follow up;dynamically observe 20 tuberculosis patients during long-time treatment;to compare HIV(+)and TB(+)people(78 cases)with HIV(+)and TB(-)people(60 cases).Results Between people intimate contacts to tuberculosis and active tuberculosis patients,ESAT-6 response has high sensitivity;ESAT-6 response in children and adolescents was completely consistent with the following clinical diagnosis and prognosis;ESAT-6 response decreased during treatment duration in 65%tuberculosis patients;in HIV(+)and TB(+)cases,the sensitivity of tuberculosis diagnosis by ESAT-6 response was 87.2%.Conclusion In vitro IFN-γ response induced by ESAT-6 is helpful in diagnosis of tuberculosis,especially for children and adolescents.And it is also available for differential diagnosis of HIV(+)patients with tuberculosis.     

变性高效液相色谱法检测结核分枝杆菌gyrA基因突变

目的 分析我国结核分枝杆菌氟喹诺酮类耐药基因gyrA突变的特点并探讨变性高效液相色谱法(DHPLC)的应用价值.方法 以结核分枝杆菌临床分离株109株(常规药敏试验显示87株氧氟沙星耐药,22株敏感)为对象,测定氧氟沙星最小抑菌浓度(MIC),同时进行gyrA基因氟喹诺酮类耐药决定区域(QRDR)DNA测序及DHPLC分析.结果 发现我国耐氧氟沙星结核分枝杆菌近来出现两个新的特点:一是gyrA QRDR双位点突变率高(87株耐药株中56.3%携有双位点突变);二是出现了以往认为的仅存在于其他细菌而在结核分枝杆菌中从未报道过的Ala74Ser突变(49株双位点突变耐药株中有20.4%携有该突变).gyrA基因突变类型与MIC之间并无密切关系.DHPLC测定中除常规的M.tb H37Rv以外还引入了M.tb Erdman做为参照菌株,成功地摆脱了95位AGC:ACC自然多态性的影响.与测序法相比较,DHPLC法的敏感度与特异度均达100%.结论 我国结核分枝杆菌氟喹诺酮类耐药已很严重,gyrA基因QRDR双位点突变率高为其特点.本研究建立的结核分枝杆菌gyrA基因突变的DHPLC分析法简便快速,稳定灵敏,在大面积大样本耐药监测以及临床快速药敏检测中有应用价值.