微量元素锶改善大鼠非酒精性脂肪肝的机制研究

目的探讨微量元素锶改善大鼠非酒精性脂肪肝的机制。方法 50只SD大鼠随机分为对照组、模型组、18 mg/L锶组、36 mg/L锶组和辛伐他汀组。对照组进食普通饲料,其余4组进食高脂饲料,第6周起给予18 mg/L和36 mg/L锶组浓度分别为18 mg/L和36 mg/L含锶饮用水,第11周起进行灌胃,18 mg/L和36 mg/L锶组分别灌浓度为18 mg/L和36 mg/L含锶水3 m L/kg体重,辛伐他汀组灌辛伐他汀10 mg/kg体重,对照组与模型组灌生理盐水3 m L/kg体重。第14周末处死大鼠,检测血清TG、TC、LDL-C和肝组织TG、TC含量,并行肝组织油红O染色观察脂肪变性情况,免疫组化检测肝组织GRP78、SREBP2、HMGCR和LDLr蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组的血清TC、LDL-C和肝TC、TG均升高(P0.05),与模型组比较,36 mg/L锶组血清TC、LDL-C和肝TC、TG均降低(P0.05)。油红O染色显示模型组肝组织含大量的红染脂质颗粒,18 mg/L锶组、36 mg/L锶组及辛伐他汀组红染颗粒均较模型组不同程度减少(P0.05)。免疫组化结果显示:模型组大鼠肝组织GRP78、SREBP2、HMGCR和LDLr蛋白表达水平,18mg/L锶组大鼠肝组织GRP78、SREBP2和LDLr蛋白表达水平,36 mg/L锶组大鼠肝组织LDLr蛋白表达水平及辛伐他汀组大鼠肝组织SREBP2和LDLr蛋白表达水平均明显高于对照组(P0.05)。36 mg/L锶组大鼠肝组织GRP78、SREBP2和HMGCR蛋白表达水平明显低于模型组,而LDLr蛋白表达水平明显高于模型组;辛伐他汀组大鼠肝组织GRP78和HMGCR蛋白表达水平明显低于模型组(P0.05);而18 mg/L锶组大鼠肝组织GRP78、SREBP2、HMGCR和LDLr蛋白表达水平较模型组无显著差异(P0.05)。结论长期较高浓度锶摄入可改善脂代谢紊乱,减轻NAFLD,其作用机制可能与调节内质网应激、HMGCR活性和LDLr的功能等有关。     

人参二醇组皂甙对人肾小管细胞增殖的影响

目的：研究不同浓度的人参二醇组皂甙对培养的人肾小管细胞增殖的影响。方法：用含有7种不同浓度的人参二醇组皂甙（0ug.ml^-1、5ug.ml^-1、10ug.ml^-1、25ug.ml^-1、50ug.ml^-1、75ug.ml^-1、100ug.ml^-1）的培养基,在96孔培养板中培养人肾小管细胞96小时后,以MTT法判定细胞的增殖情况。结果：与对照组比较,在5-25ug.ml^-1浓度范围内,人参二醇组皂甙可明显地促进肾小管细胞增殖;在50ug.ml^-1时,其作用不明显;在75-100ug.ml^-1。则抑制其生长。结论：适量的人参二醇组皂甙能促进肾小管细胞的增殖,浓过高则对其生长产生抑制作用。     

人参皂苷Rb_1与Rg_1对肾小管细胞缺氧复氧损伤模型的影响

目的:探讨人参皂苷的2种单体成分Rb1、Rg1在肾小管细胞缺氧复氧(HRO)损伤模型中的作用及机制。方法:将大鼠肾小管上皮细胞分为对照组、HRO组、Rb1+HRO组和Rg1+HRO组。除对照组外,其余各组给药同时缺氧复氧培养36h后分别检测肾小管细胞增殖活性、增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达情况、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)漏出量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:人参皂苷Rb1、Rg1可促进HRO性肾小管细胞增殖(P<0.01),增强细胞中PCNA阳性表达(P<0.05),减少肾小管细胞MDA生成及LDH释放,增强SOD活性。结论:人参皂苷Rb1和Rg1对HRO性肾小管细胞损伤模型具有保护作用。     

无创肢体缺血预处理对兔心肌电稳定性的影响及机制

目的探讨无创肢体缺血预处理(LIP)对兔心肌电稳定性的影响及其机制。方法取兔27只,随机分为:单纯缺血对照组(Ctr组),LIP组,LIP+ATP敏感的钾通道(KATP)抑制剂格列苯脲组(LG组),LIP+丝裂素活化的蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580组(LSB组),闭胸状态下同步记录体表ECG及心内、外膜单相动作电位。分析心肌缺血背景下单相动作电位振幅(MAPA)、单相动作电位复极90%时间(APD90)、0期去极化最大速率(Vmax)和心率、心律失常的类型、发生率及持续时间的变化,实验结束后取心肌组织检测其中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量。结果缺血后,四组的平均心率、MAPA、Vmax均不同程度地减小,APD90不同程度地延长;LIP能抑制心律失常的发生,使心律失常持续时间缩短。LG组心律失常发生降低,持续时间缩短,LSB组结果与Ctr组相近。与Ctr组比较,LIP组SOD活力升高;其余三组的MDA含量降低;LIP组NO含量升高,而LG组及LSB组亦低于LIP组(P均<0.05)。结论无创肢体缺血预处理具有增强兔心肌电稳定性、减轻心肌氧化损伤的作用,p38MAPK可能为其发挥保护作用的重要途径,KATP则可能仅在抗氧化和改善供血等方面发挥了作用。     

人参二醇组皂甙对肾缺血再灌流性血清致伤的肾小管细胞膜稳定性的影响及机制研究

目的:用培养的人肾小管细胞,观察人参二醇组皂甙(PDS)对肾缺血再灌流性血清致伤的小管细胞膜稳定性的影响,并探讨其机制。方法:提取兔肾缺血再灌流后血清(SIR)及对照血清(SC),用不同的培养基(普通培养基、对照血清、缺血血清以及缺血血清加PDS)分别与肾小管细胞共培养96小时,生化法测定培养液或细胞中MDA含量以及SOD、LDH、Na -K -ATP酶和Ca2 -ATP酶活力。结果:SIR可使培养液中提示细胞膜脂质过氧化程度的MDA含量和表示膜完整性的细胞外LDH活力均显著升高,同时胞内的SOD、Na -K -ATP酶和Ca2 -ATP酶活力明显降低,而PDS则可抑制SIR的这些效应的发挥。结论:PDS具有增强急性肾缺血再灌流性兔血清致伤的培养人肾小管细胞膜稳定性的作用。其机制可能为增强SOD活力、减轻氧自由基对细胞膜的攻击,增强细胞膜上ATP酶的活性以维持细胞内外水、电解质平衡等作用有关。     

激励竞赛法在生理学实验教学中的运用

目的探讨激励竞赛法在生理学实验教学中的运用。方法通过对225名参加生理学实验课程学习的医学本科生随机分组,分别采用激励竞赛法和非激励竞赛法教学;通过对学生的生理学期末闭卷考核成绩的分析,比较实验组与对照组客观存在的学习成绩差异。结果实验组的学习成绩优于对照组。结论巧用激励竞赛法教学的班级其教学效果明显优于非激励竞赛法教学的班级。     

心血管活动改变对家兔肾传出神经放电的影响

目的 :应用电生理技术研究心血管活动改变对家兔传出肾神经放电的影响 ,以探讨肾脏电活动与心血管活动之间的联系。方法 :分别给家兔静脉注射肾上腺素、去甲肾上腺素和乙酰胆碱 ,同步观察心率、动脉血压和肾传出神经放电的变化。结果 :肾上腺素和去甲肾上腺素使心率加快、动脉血压升高的同时 ,使肾传出神经放电活动抑制 ,乙酰胆碱的效应则相反。结论 :心血管的功能活动变化对肾传出神经产生影响 ,该影响可能在肾脏的功能活动中起重要的作用     

不同浓度的高锶矿泉水对人肝细胞增殖及功能的影响

目的:观察不同浓度的高锶矿泉水对LO2细胞(入肝细胞株)增殖和功能的影响.方法:LO2细胞分为2mg/L、4mg/L、6mg/L、8mg/L锶矿泉水组(SMW)和双蒸水组(DDW),以5× 104/ml的浓度接种于培养板中,24h后,换成条件培养基培养至7d.分别于2d、3d、5d和7d后行MTT法观察细胞的增殖情况.培养5d的细胞分别用比色法测培养基中总胆红素(TB)的含量,和用赖氏法测细胞内谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的活性.结果:2mg/L SMW细胞增殖、胆红素摄取量和转氨酶活性无显著变化(P＞0.05);4mg/L和6mg/L SMW组细胞提前出现增殖峰,并较长时间地保持旺盛的增殖状态(P＜0.05);细胞摄取胆红素的能力增强(P＜0.05),AST活性无显著变化(P＞0.05),但ALT的活性降低(P＜0.05);8mg/L SMW组细胞增殖速度减慢、摄取胆红素量增多(P＜0.05),但细胞内ALT和AST的活性均降低(P＜0.05).结论:4～6mg/L浓度范围的天然高锶矿泉水对肝细胞的增殖和胆红素代谢有益,能降低转氨酶活性;但超过8mg/L浓度时可对肝细胞造成一定损害.     

三七总皂甙对马兜铃酸Ⅰ诱导人肾小管上皮细胞转分化的作用及机制

目的 探讨三七总皂甙(PNS)治疗肾间质纤维化的作用机制.方法 将人肾小管上皮细胞(HK-2)按不同处理因素分为6组,空白对照组不予干预;PNS对照组加入PNS,使终质量浓度为 400 μg/ml;马兜铃酸I(AA I)诱导组加入AA I,终质量浓度为20 μg/ml;PNS低、中、高剂量组均加入AA I 20 μg/ml,同时分别加PNS 200、400、600 μg/ml.培养48 h后应用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;免疫组织化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;ELISA法测定细胞上清液中TGF-β1水平;RT-PCR法检测结缔组织生长因子(CTGF) mRNA表达.结果 AA I诱导组HK-2细胞从原来典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞形态,胞质内大量表达α-SMA,其积分光密度值、TGF-β1水平、CTGF mRNA表达均增加(P＜0.05);PNS各剂量组细胞形态学改变减轻,α-SMA、CTGF mRNA表达和TGF-β1分泌降低,且呈剂量依赖性(P＜0.05);PNS对照组各指标均无明显变化.结论 PNS可抑制AA I诱导的肾小管上皮细胞转分化作用,其机制可能是抑制TGF-β1及其下游因子CTGF表达.     

雷公藤红素对非酒精性脂肪肝L02细胞内质网应激的影响及机制

目的:通过雷公藤红素干预非酒精性脂肪肝L02细胞模型来探讨雷公藤红素调节肝L02细胞脂质代谢紊乱及非酒精性脂肪肝L02细胞内质网应激的相关机制。方法:将肝L02细胞分为空白组,模型组,雷公藤红素低剂量组(0. 5 mg·L~(-1)),雷公藤红素高剂量组(1 mg·L~(-1))和辛伐他汀组(SIM,6 mg·L~(-1))进行培养。检测肝L02细胞内胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量变化;用油红O染色观察肝L02细胞脂质沉积情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组肝L02细胞中内质网应激(ERS)相关信号分子活化转录因子6(ATF6),葡萄糖调节蛋白78(GRP78),肌醇需求酶1(IRE1),固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP),固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)和固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)的mRNA转录以及蛋白表达水平。结果:非酒精性脂肪肝病(NAFLD)组肝L02细胞中TC及TG含量均高于空白组(P 0. 05),雷公藤红素低、高剂量组及SIM 6 mg·L~(-1)组肝L02细胞中TC及TG含量较NAFLD组均有不同程度减少(P 0. 05)。油红O染色显示NAFLD组肝L02细胞内含有大量红染脂质颗粒沉积,而雷公藤红素低、高剂量组及SIM 6 mg·L~(-1)组红染脂质颗粒较NAFLD组均有不同程度减少。RT-PCR和Western blot结果显示,NAFLD组肝L02细胞内ERS相关信号分子ATF6,GRP78,IRE1,SCAP,SREBP-1c和SREBP-2的mRNA转录和蛋白表达水平均高于空白组(P 0. 05);雷公藤红素低、高剂量组和SIM 6 mg·L~(-1)组肝L02细胞内ATF6,GRP78,IRE1,SCAP,SREBP-1c和SREBP-2的mRNA转录及蛋白表达水平均低于NAFLD组(P 0. 05)。而雷公藤红素高剂量组与SIM 6 mg·L~(-1)组间肝L02细胞内ATF6,GRP78,IRE1,SCAP,SREBP-1c和SREBP-2 mRNA转录及蛋白表达水平差异不具有统计学意义。结论:雷公藤红素可通过下调肝L02细胞ERS时相关信号分子ATF6,GRP78,IRE1,SCAP,SREBP-1c和SREBP-2的表达来减轻肝L02细胞脂质代谢紊乱,从而改善NAFLD。