原代人黑素细胞Wnt5A基因沉默的研究

目的 优化Wnt5A特异性siRNA转染原代人黑素细胞的实验条件,建立沉默Wnt5A基因的模型.方法 培养原代人黑素细胞,将不同浓度(0、20.0、33.3、40.0、60.0 nmol/L)的阳性参照基因GAPDH特异性siRNA通过脂质体法介导转染原代人黑素细胞,实时荧光定量PCR(qPCR)筛选转染效率最高的siRNA浓度;合成3条Wnt5A-siRNA(Wnt5A-siRNA-793、Wnt5A-siRNA-943、Wnt5A-siRNA-1743),分别转染原代人表皮黑素细胞,qPCR法选择干扰特异性最佳的Wnt5A-siRNA;用最佳Wnt5A-siRNA转染原代人黑素细胞,分别于培养24、48、72 h提取总mRNA及总蛋白,通过qPCR及Western印迹法确定转染效率最高的时间点.结果 0、20.0、33.3、40.0、60.0 nmol/L GAPDH-siRNA转染原代人黑素细胞后,GAPDH mRNA相对表达量分别为1.009±0.161、0.086±0.010、0.140±0.016、0.285±0.095、0.012±0.007,组间比较,差异有统计学意义(F=69.469,P＜0.05).60 nmol/L siRNA组GAPDH表达低于其他各组(均P＜0.05),干扰效率最佳;各Wnt5A-siRNA组及空白组Wnt5AmRNA相对表达量分别为0.331±0.010、2.229±0.029、0.078±0.006、1.000±0.024,差异有统计学意义(F=7 006.094,P＜0.05).Wnt5A-siRNA-1743组目标分子表达量低于其他3组(均P＜0.05),干扰效率最佳.Wnt5A-siRNA-1743转染原代人表皮黑素细胞后24、48、72 h及空白组Wnt5A mRNA相对表达量分别为0.396±0.002、0.026±0.008、0.131±0.079、1.025±0.276,组间比较,差异有统计学意义(F=29.215,P＜0.05),干扰后48 h低于干扰后24、72 h及空白组(均P＜0.05);Wnt5A蛋白相对表达量分别为112.798±0.218、77.765±0.415、30.540±0.219、130.025±0.158,组间比较,差异有统计学意义(F=79 122.889,P＜0.05),干扰后72 h低于干扰后24、48 h及空白组(均P＜0.05).结论 成功建立siRNA沉默人黑素细胞Wnt5A基因的模型.     

妊娠期母体亚临床甲状腺功能减退对妊娠结局及胎儿的影响

<正>亚临床甲状腺功能减退(subclinical hypothyroidism,SCH)简称亚临床甲减,是指血清促甲状腺激素(TSH)水平超过正常参考值上限。近年来的研究表明妊娠期亚临床甲减对妊娠期母儿均有影响,现就     

羟基磷灰石义眼座植入在先天性小眼球和隐眼治疗中的应用

目的：对先天性小眼球和隐眼患者行羟基磷灰石义眼座植入，以填充眼窝尽早恢复眼睑的功能，达到美容的效果。方法：将眼眶内残存的眼球内面色素膜清除，保留巩膜外壳及巩膜外组织，眼．眶软组织向外提拉，义眼座植入后，遂层缝合巩膜、Tenon囊及球结膜。结果：对8例先天性小眼球和隐眼患者进行了义眼座植入治疗，术后随访结果显示术眼活动与健眼同步，改善了眼窝凹陷。植入物无反应，无并发症，美容效果满意。结论：对先天性小眼．球和隐眼患者，因其眼凹塌陷不能配戴义眼片，应尽早行义眼座植入术，使眼眶得到正常的发育。羟基磷灰石义眼座植入后，眼球活动、眼部外观与健眼相同，达到了关各效果。     

维胺酯对皮肤鳞癌细胞系SCL-1增殖的影响

目的 探讨维胺酯对皮肤鳞癌细胞系SCL-1增殖的影响及可能机制.方法 MTT法检测不同浓度维胺酯(5、10、20、40、80 μmol/L)作用SCL-1细胞24、72 h后细胞增殖率.维胺酯10 μmol/L作用 SCL-1细胞24 h,流式细胞术检测细胞周期分布,实时荧光定量PCR检测维A酸受体(RAR)α、RAARβ、RARγ、维A酸X受体(RXR)α和他扎罗汀诱导基因1(TIG1)、细胞色素P450家族成员26A1 (CYP26A1) mRNA的表达；荧光素酶报告基因检测维胺酯10 μmol/L作用SCL-1细胞24 h激活蛋白1(AP-1)转录活性的变化.结果 5-80μmol/L的维胺酯呈时间和浓度依赖住地抑制SCL-1细胞.维胺酯10 μmol/L作用24 h后,SCL-1细胞的G1期百分比上升,而S期、G2期百分比下降.维胺酯10 μmol/L不诱导RARα、RARβ、RARγ、RXRα、TIG1和CYP26A1 mRNA的表达,但能在24 h内抑制AP-1的转录激活.结论 维胺酯抑制SCL-1细胞增殖涉及G1期细胞阻滞；其作用机制不依赖于经典的维A酸受体通路,而与抑制AP-1的转录活性有关.     

皮秒翠绿宝石激光与超脉冲CO2点阵激光治疗面部萎缩性痤疮瘢痕的疗效与安全性比较

【摘要】 目的 通过前瞻性、半脸对照研究,比较皮秒翠绿宝石激光与超脉冲CO2点阵激光治疗面部萎缩性痤疮瘢痕的疗效与安全性。方法 2015年10月至2017年10月在中国医学科学院皮肤病医院激光科收集面部对称性萎缩性痤疮瘢痕患者,左侧面部痤疮瘢痕采用超脉冲CO2点阵激光治疗,右侧采用皮秒翠绿宝石激光点阵模式治疗,治疗间隔为2个月,共治疗3次。治疗前后由皮肤科医生根据ECCA评价表对瘢痕进行评分,患者根据四分法自评临床疗效。记录治疗时疼痛程度和不良反应。两侧间、治疗前后ECCA评分及疼痛程度评分比较采用配对t检验,组间四分法评分比较采用 Wilcoxon 秩和检验。结果 治疗前皮秒激光侧和点阵激光侧间ECCA评分差异无统计学意义（t = 1.06,P = 0.300）,治疗3次后差异有统计学意义［（70.98 ± 21.48）分比（58.04 ± 17.63）分,t = 3.76,P = 0.001］。与治疗前相比,皮秒激光侧瘢痕改善评分（2.21 ± 1.09）分,CO2点阵激光侧（2.83 ± 1.11）分,两组差异有统计学意义（z = 2.70,P = 0.007）。与CO2点阵激光侧相比,皮秒激光侧不良反应更少,表现为一过性红斑、水肿,治疗疼痛评分亦明显降低［（3.71 ± 0.62）分比（6.23 ± 1.06）分,t = 11.93,P < 0.001］。结论 皮秒翠绿宝石激光与超脉冲CO2点阵激光均能有效改善萎缩性痤疮瘢痕,CO2点阵激光疗效更显著,而皮秒激光不良反应更少。     

连花清瘟胶囊(颗粒)抗病毒药理作用及临床应用研究进展

连花清瘟胶囊具有清瘟解毒、宣肺泄热的功效,临床用于治疗流行性感冒属热毒袭肺证,在抗击新型冠状病毒肺炎疫情期间发挥了重要作用,成为国家诊疗方案、各省治疗方案推荐的中成药。从药理作用以及临床应用两个方面来总结连花清瘟胶囊(颗粒)抗新型冠状病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒、肠道病毒、疱疹病毒等的研究进展,以期对连花清瘟胶囊(颗粒)抗病毒作用的研究现状有新的认识,从而更好地推进其抗病毒的深入研究,更加合理地应用于临床。     

丹皮酚对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨丹皮酚对体外培养人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。 方法 CCK8法检测0.5,1,2,4,8 mmol/L丹皮酚作用24,48 和72 h后A375细胞增殖水平。用0、1.25、2.5和5 mmol/L浓度丹皮酚作用24 h后,以Annexin-Ⅴ/PI法观察A375细胞凋亡的变化、分别测定caspase 3,caspase 8和caspase 9的活性,并以Western印迹检测p53,NF-κB及相关蛋白水平的变化。 结果 与空白对照组比较,0.5,1,2,4,8 mmol/L丹皮酚作用24,48 和72 h后均对A375细胞的增殖有抑制作用,且与时间、浓度呈依赖性。1.25、2.5、5 mmol/L丹皮酚在作用24 h时,A375细胞早期凋亡率由对照组的（3.11 ± 0.53）%分别上升至（13.74 ± 1.73）%、（25.95 ± 0.57）%、（46.44 ± 0.81）%,各组与对照组间差异均有统计学意义（P < 0.05或 < 0.01）。2.5 mmol/L和5 mmol/L作用组的caspase 3,caspase 8,caspase 9活性升高,且与对照组间比较,差异均有统计学意义（P < 0.05或< 0.01）。p53及Bax的蛋白水平随药物浓度的增加而升高,NF-κB、bcl-2、bcl-XL的蛋白水平随药物浓度增加而降低。 结论 丹皮酚对黑素瘤A375细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。可通过细胞内和细胞外两条途径发挥促凋亡作用,其机制可能与调节p53及NF-κB基因有关。     

卵巢上皮性癌肿瘤细胞减灭术中经膈肌切除心膈角增大淋巴结的可行性及安全性探索

目的:探讨卵巢上皮性癌（卵巢癌）肿瘤细胞减灭术中经膈肌切除术前CT检查提示的心膈角增大淋巴结的可行性及安全性。方法:收集2019年8月至2021年5月期间郑州大学附属肿瘤医院经膈肌行心膈角淋巴结切除术的24例卵巢癌患者的临床病理资料,回顾性分析患者的术前CT检查情况、手术时间、术中出血量、术后病理检查及心膈角淋巴结转移...     

血清饥饿处理对人角质形成细胞系HaCaT细胞自噬的调控效应研究北大核心CSCD

目的研究血清饥饿处理对人角质形成细胞系HaCaT细胞自噬的调控效应,初步分析其分子机制。方法采用血清饥饿处理体外培养的HaCaT细胞诱导自噬,分析血清饥饿对细胞形态和细胞活力（MTr法）的影响。透射电镜观察自噬体囊泡形成,使用Western印迹法进行自噬标志性分子LC3-I-Lc3Ⅱ转化分析和自噬关键基因Atg7的表达以及MDC染色标记自噬体囊泡。对mTOR的蛋白表达及其ser2448和ser2481位点磷酸化产物水平进行分析。结果血清饥饿HaCaT细胞活力上升,电镜观察和MDC染色发现,血清饥饿处理的HaCaT细胞中有自噬体囊泡形成。Western印迹显示,血清饥饿细胞LC3-I—LC3Ⅱ转化（LC3-Ⅱ,LC3-I比率为3．5084-0．415）较正常培养的细胞（0．538±0．038）显著上调（两组比较,t=13．32,P〈0．01）;自噬关键基因Atg7表达上调（对照细胞和血清饥饿细胞Atg7／GAPDH分别为0．021±0．006和0．048-4-0．011,t=7．27,P〈0．05）。血清饥饿处理的细胞中,roTOR的ser2448位点、ser2481位点磷酸化产物水平显著降低（对照细胞和血清饥饿细胞间的磷酸化mTORser2448／mTOR比率分别为0．762±0．108和0．394±0．048,t=7．58,P〈0．05;磷酸化mTORser248I／mTOR的比率分别为0．263±0．039和0．111±0．020,t=13．77,P〈0．01）。结论血清饥饿处理可以诱导HaCaT细胞发生自噬,并且导致细胞活力上升。这种自噬的诱导可能与自噬调控关键元件mTOR蛋白活化抑制相关。