人巨细胞病毒感染的核酸检测比较及对肝脏损伤的研究

目的：应用实时荧光定量聚合酶链反应（ FQ-PCR）检测疑似人巨细胞病毒（ HCMV）感染的患儿尿液、血液及对应母亲乳汁中HCMV DNA含量,探讨其在HCMV感染诊断中的价值及对肝脏损伤情况。方法应用FQ-PCR方法检测104例疑似HCMV感染患儿新鲜尿液上皮细胞、血液及其对应的母亲乳汁中的HCMV DNA拷贝数,并同时检测患儿血液中天冬氨酸转氨酶（ AST）、丙氨酸转氨酶（ ALT）、谷氨酰转肽酶（GGT）、总胆红素水平。结果尿液、血液标本阳性检出率分别为52．9％（55/104）,24．0％（25/104）,尿液阳性率明显高于血液阳性率,二者差异有统计学意义（P＜0．01）。乳汁标本阳性检出率为81．7％（85/104）,对应患儿血液和/或尿液阳性率为62．4％（53/85）,二者差异有统计学意义（P＜0．05）。且患儿HCMV拷贝数越高,肝脏损伤的可能性越大。结论婴儿尿液中HCMV DNA检测率明显高于血液的检出率,且拷贝数越高,肝功能损伤的可能性就越大。尿液HCMV DNA检测对于诊断婴儿HCMV感染和治疗监测具有重要的价值。肝功能的检测对判断HCMV感染严重程度有一定的参考价值。     

HPLC法测定复方咪康唑散中硝酸咪康唑含量

目的:建立高效液相色谱法测定复方咪康唑散中硝酸咪康唑的含量。方法:色谱柱:Angilent Eclipse XDB-C₁₈柱（150nn×4.6 mm,5μm）,流动相:甲醇-乙腈-0.5%乙酸铵（42.5:42.5:15）,检测波长:230 nm,流速:1.0 ml·min^-1,柱温:30℃。结果:硝酸咪康唑在0.010 8～1.080 0 mg·ml^-1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 9）,平均回收率为100.8%（RSD=1.05%,n=9）。结论:该法准确、重复性好、简便,可用于复方咪康唑散中硝酸咪康唑的含量测定。     

抗癌方治疗晚期肝癌的临床疗效评价

目的探索"抗癌方"治疗失去手术、放疗、化疗机会的原发性肝癌晚期的有效性。方法采用非盲法、非随机临床平行入组选取2013年1月至2016年12月江苏省中医院住院肝癌晚期患者,其中试验组入组11例,脱落2例。对照组入组9例。试验组予以"抗肝癌方"浓煎口服,同时抗病毒治疗,可联合一般综合支持治疗,对照组予抗病毒治疗,可联合一般综合支持治疗,连续服药30天为1个疗程,每30天复诊一次。观察时间为6个疗程。观察患者生存时间、生存质量、肝功能、PT、AFP指标。结果试验组生存时间及生存质量优于对照组,差别有统计学意义;试验组凝血功能短于对照组,差别有统计学意义;肝功能及AFP结果两组对比差别无统计学意义。结论抗癌方对肝癌晚期患者生存时间、生存质量、凝血功能有改善的作用。     

CCAAT/增强子结合蛋白α对K562细胞分化和凋亡的影响及其机制

目的:研究CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein-alpha,C/EBPα)对K562细胞株分化和凋亡的影响及对相关基因的调控,为慢性粒细胞白血病的治疗提供新的治疗靶点.方法:将C/EBPα表达质粒pEGFP-C/EBPα及空载体对照质粒pEGFP分别经阳离子脂质体2000介导转染K562细胞,用G418筛选出C/EBPα稳定表达细胞株.Wright-Giemsa染色观察细胞形态学变化,FCM分析细胞表面分化抗原CD11b的表达、细胞周期及细胞凋亡,电子显微镜观察细胞凋亡,RT-PCR和Western印迹法检测细胞中相关基因Per 2、cyclin B1和C-myc的表达.结果:筛选得到稳定表达C/EBPα的细胞株pEGFP-C/EBPα-K562.与空载体转染组及对照组细胞相比,转染组K562细胞分化明显,同时粒系细胞表面分化抗原CD11b表达增加;细胞周期分析发现,转染组细胞中G2期细胞增多,与空载体组和对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),同时出现细胞凋亡峰.细胞凋亡检测结果显示,转染组细胞凋亡明显增加(21.1%),与空载体组(6.0%)和对照组(4.2%)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);电子显微镜观察发现,转染组细胞中出现染色质浓集、断裂和核固缩等现象,并见凋亡小体;RT-PCR和Western印迹法检测发现,C/EBPα明显上调Per 2 mRNA和蛋白表达,抑制cyclinB1、C-myc mRNA和蛋白的表达.结论:C/EBPα能促进K562细胞分化,并诱导细胞凋亡,其机制可能是通过对细胞周期相关基因的调控来实现的.     

化学发光免疫分析检测抗-HCV 抗体与 HCV-RNA 的关联研究

目的：分析实时荧光定量 PCR 检测 HCV-RNA 载量与化学发光免疫分析（CLIA）检测抗-HCV 抗体的相关性。方法抽取 CLIA 法抗-HCV 检测有反应性标本587例,采用实时荧光定量 PCR 进一步检测 HCV-RNA。结果荧光定量 PCR 检测 HCV-RNA,阴性225例,阳性362例,阳性率为61．67％,且阳性标本比例与 CLIA 法 S/CO 比值呈正相关。结论HCV-RNA阳性率与 CLIA 法 S/CO 比值呈正相关,可根据 S/CO 比值预测 HCV-RNA 结果。     

泛素连接酶β-TrCP降解BCR-ABL 融合蛋白对白血病K562 细胞增殖的抑制*

目的:t（9;22）（q34;q11）突变导致的BCR-ABL融合基因及其编码的融合蛋白在慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML ）发病中发挥重要作用。本研究观察可与BCR-ABL融合蛋白N 端寡聚化区域（Oligomerization domain,OD）特异性结合的嵌合泛素连接酶E3 β-TrCP 的β-TrCP-OD-HA 的重组腺病毒载体,经泛素- 蛋白酶体途径降解BCR-ABL融合蛋白对白血病K562 细胞增殖的影响。方法:HEK293 细胞扩增野生型Ad5β-TrCP-OD-HA、突变型Ad5 Δ F-TrCP-OD-HA 及空载Ad5GFP 重组腺病毒载体,感染K562 细胞。以未感染K562细胞作空白对照,流式细胞术检测重组腺病毒载体感染效率,Western blot检测外源性重组蛋白和BCR-ABL融合蛋白的表达,通过细胞增殖曲线、甲基纤维素集落形成试验、细胞周期检测β-TrCP-OD-HA 对K562 细胞增殖的影响。结果:成功建立携β-TrCP-OD-HA 重组腺病毒载体的K562 细胞株,重组腺病毒载体感染效率达66.4% 以上,β-TrCP-OD-HA、Δ F-TrCP-OD-HA 可在K562 细胞中表达。三组重组腺病毒载体感染K562 细胞后,Ad5β-TrCP-OD-HA 组Western blot检测BCR-ABL融合蛋白含量下降;K562 细胞生长和集落形成能力均受抑制;细胞周期显示S 期细胞数下降至10.88%±2.42% 、G0/G1 期升高至85.6%±5.61% ,与Ad5 β-TrCP-OD-HA 组、Ad5GFP 组及对照组相比,差异具有统计学意义（P 均<0.05）。 结论:重组腺病毒介导的β-TrCP-OD-HA、Δ F-TrCP-OD-HA 能够在白血病K562 细胞中表达;β-TrCP-OD-HA 可以抑制K562 细胞的生长增殖,其机制可能与其降解BCR-ABL融合蛋白、阻滞细胞周期而实现。      

首诊为急性缺血性脑卒中患者的骨髓增殖性肿瘤相关基因突变研究

目的 分析首诊为急性缺血性脑卒中(AIS)患者的骨髓增殖性肿瘤(MPN)相关JAK2、MPL和CALR基因突变发生情况.方法 收集378例AIS患者的外周血标本和临床资料.用等位基因特异性PCR和Sanger基因测序法检测患者基因组DNA中JAK2 V617F、JAK2 Exon12、MPL Exon10和CALR Exon9基因突变,并分析突变阳性患者的病史、临床资料、外周血细胞分类计数以及其他辅助检查结果.结果 共检测到5例(1.3％)患者JAK2 V617F突变阳性,1例(0.3％)CALR基因突变阳性,总阳性率为1.6％.其中2例JAK2 V617F突变阳性患者的外周血血红蛋白水平达到MPN的诊断标准.结论 约1.6％的首诊为AIS的患者可检测到JAK2 V617F或CALR突变,这部分患者可能处于MPN的早期阶段.     

野生型p53基因对K562细胞中心体数量和蛋白的影响

目的 研究重组腺病毒介导的野生型p53基因(Ad5wtp53)对人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞系中心体数量和中心体蛋白表达的影响.探讨应用重组腺病毒p53基因对CML进行基因治疗的可行性.方法 分别将含有野生型p53基因、突变型p53基因和绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒表达载体(AdSwtp53、Ad5mtp53和Ad5GFP)反复扩增,联合多聚季胺共同感染K562细胞.观察感染效率.MTT法确定最适重组腺病毒感染滴度和感染时间.然后用RT-PCR和Western blot检测p53 mRNA和蛋白的表达.最后应用间接免疫荧光染色法对中心体γ-微管蛋白和纺锤体α-微管蛋白同时进行标记,在激光共聚焦显微镜下观察中心体γ-微管蛋白的表达和有丝分裂,并对中心体进行计数.结果 多聚季胺可显著提高腺病毒载体对K562细胞的感染效率.多聚季胺的剂量选择为4μg/ml;感染K562细胞的最适腺病毒滴度为20 000 MOI,感染时间为72 h;Ad5wtp53和AdSmtp53转染的K562细胞均可表达p53 mRNA和蛋白.Ad5wtp53感染K562细胞后,中心体数量减少,γ-微管蛋白的表达降低.结论 重组腺病毒介导的野生型p53基因能够在白血病K562细胞中持续表达;野生型P53蛋白能够降低K562细胞中心体数量及中心体γ-微管蛋白的表达.     

三阴性乳腺癌患者腋窝淋巴结转移与血清低密度脂蛋白胆固醇水平的关系

目的 探讨三阴性乳腺癌(TNBC)腋窝淋巴结转移与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的相关性。方法 回顾性选取2010年1月至2016年12月于山东第一医科大学附属省立医院就诊并术后病理确诊的TNBC患者107例(TNBC组)、人表皮生长因子受体2过表达型乳腺癌患者122例(HER-2组)、乳腺良性肿瘤患者136例(良性肿瘤组),另选取同期的健康体检者155例(对照组),均为女性。根据腋窝淋巴结位置,将淋巴结分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组。记录受试者年龄、体重指数、绝经状况、血清LDL-C水平以及TNBC患者的临床病理因素,分析腋窝淋巴结转移的危险因素。结果 良性肿瘤组、HER-2组、TNBC组体重指数均高于对照组,HER-2组、TNBC组绝经比例、LDL-C水平均高于对照组和良性肿瘤组,且TNBC组LDL-C水平高于HER-2组(均P<0.05)。单因素分析结果显示,LDL-C与TNBC患者年龄、绝经、淋巴结转移相关(均P<0.05);Ⅰ组腋窝淋巴结转移与TNM分期、LDL-C相关,Ⅱ、Ⅲ组转移与TNM分期相关(均P<0.05)。二元Logistic回归分析结果显示,LDL-C(比...