肌营养不良症模型鼠神经元型一氧化氮合酶抑制蛋白的表达及定位

目的:观察肌营养不良症模型鼠(mdx)肌肉组织神经元型一氧化氮合酶抑制蛋白(proteininhibitorofnNOS,PIN)的表达及定位,以及与dys-trophin复合物及神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的关系。方法:取mdx鼠(18只,实验组)和C57BL/10ScSn鼠(15只对照组)骨骼肌作常规染色,比较其组织学改变;同时对mdx鼠,C57BL鼠骨骼肌作Northernblot和固定化蛋白质印迹法(Westernblot)及免疫组化分析。结果:Northernblot分析发现,mdx鼠肌肉组织PINmRNA显著高于C57BL/10ScSn鼠,对照组骨骼肌有少量PINmRNA表达,其杂交斑点A值为1352.4±219.7,mdx组杂交斑点灰度A值为2724.2±394.6,两者差异有非常显著性意义(t=11.985,P<0.05);固定化蛋白质印迹法(Westernblot)显示,PIN蛋白的杂交信号在mdx组与对照组均出现在约8ku处,两者的吸光度平均值(A)几乎相等,mdx组的杂交斑点灰度A值为2378.2±486.7,对照组PIN蛋白的杂交斑点灰度A值为2438.5±494.9,两者差异无显著性意义(t=0.352,P>0.05);免疫组化及激光共聚焦扫描显微镜均揭示,在C57BL/10ScSn鼠肌纤维中,PIN蛋白在肌膜、周边核附近呈强阳性表达,肌质中弱表达,而mdx鼠的PIN蛋白在肌膜及中心核附近呈强阳性表达,细胞质中亦弱表达;PIN于mdx鼠肌纤维表达明显,而nNOS及dystrophin复合物表达明显减少     

VonKossa染色法和碱性磷酸酶的免疫组化染色法在牙齿矿化研究中的应用

牙齿的发育是一个长期复杂的连续过程。包括生长、矿化、萌出三个时期。其中矿化是指牙体硬组织形成的重要阶段。在这一生物矿化过程中，有文献报道钙盐的沉积与碱性磷酸酶活性有关。为证实这一论点，我们选择了钙质VonKossa及碱性磷酸酶的PAP免疫组化染色对小鼠牙胚进行不脱钙切片染色。现将本研究结果及实验过程中我们的一些经验体会与同道们进行交流。     

利塞膦酸钠治疗老年慢性肾脏病伴骨质疏松的疗效与安全性评价

目的评价利塞膦酸钠治疗老年慢性肾脏病(CKD)伴骨质疏松症的临床疗效及安全性。方法回顾性分析65例老年CKD2期或3期合并骨质疏松症患者的临床资料,分为应用利塞膦酸钠联合碳酸钙D3咀嚼片的治疗组32例及单独口服碳酸钙D3咀嚼片的对照组33例,疗程均为6个月。通过检测治疗前、后两组患者的骨密度、骨代谢指标如总1型胶原氨基端延长肽(t-P1NP)、N-端中段骨钙素(N-MID OC)、β-胶原降解产物(β-CTx)、25-羟基维生素D(25-OH-VD)等,对利塞膦酸钠的有效性进行评估,并评价其安全性。结果治疗6个月后两组患者T值及腰2~4、股骨颈的骨密度均显著升高(分别为P0.01和P0.05),且治疗组治疗后腰2~4、股骨颈的骨密度明显高于对照组治疗后(P0.05)。治疗组骨密度改善的总有效率(84.38%)显著高于对照组(60.61%)(P0.05)。治疗组治疗后t-P1NP、N-MID OC、β-CTx水平显著下降,25-OH-VD明显升高,与治疗前和对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗组治疗6个月后VAS评分显著下降(P0.01),且显著低于对照组(P0.05)。治疗组新骨折发生率显著低于对照组(P0.05)。治疗中未出现与药物相关的严重不良反应。结论利塞膦酸钠对于估算肾小球滤过率(e GFR)≥30 m L/(min·1.73m2)的老年CKD伴骨质疏松症的治疗有效,优于单用钙剂,且安全性较好。     

黄芪单体毛蕊异黄酮对TNF-α损伤人脐静脉内皮细胞ET-1/NO的影响

目的 探讨黄芪单体毛蕊异黄酮对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(ECV-304)的一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)的影响.方法 用DMEM培养液在37℃、5％ CO2条件下对ECV304细胞株进行扩增至足够数量后,调细胞密度为1×105,并分为7组:A组:空白组,不加任何诱导剂;B组:TNF-α(40ng/ml)诱导组;C组:TNF-α(40ng/ml)+氯沙坦钾(105 mol/l);D组:TNF -α(40ng/ml)+毛蕊异黄酮(0.1 mg/ml);E组:TNF -α(40ng/ml)+毛蕊异黄酮(1mg/ml);F组:TNF-α(40ng/ml)+毛蕊异黄酮(10mg/ml);G组:TNF-α (40ng/ml)+毛蕊异黄酮(20mg/ml).分别于孵育6小时、24小时后时收集上清液,用ELISA检测上清液中一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)的含量.结果 ①与空白组比较,TNF-α降低了ECV-304NO水平(P＜0.001)、提高了ET-1水平(P＜0.001);②氯沙坦钾提高了ECV-304NO水平(P ＜0.001)、降低了ET-1水平(P＜0.001);③毛蕊异黄酮(0.1 mg/ml～10mg/ml)能够促进ECV-304细胞NO的产生(P＜0.001)、降低ET -1的产生(P＜0.001);④氯沙坦钾和毛蕊异黄酮(20mg/ml)对ECV-304细胞ET-1和NO水平的影响无明显差异((P＞0.05);⑤毛蕊异黄酮浓度(在0.1 mg/ml ～20mg/ml内)与ECV-304 ET-1的分泌呈负相关性(r=-0.02、P＜0.001);与ECV-304NO的分泌呈正相关性(r=0.0075、P ＜0.001).结论 黄芪毛蕊异黄酮单体可以促进TNF-α诱导的内皮细胞NO分泌,抑制ET-1分泌,并在一定浓度内(0.1 mg/ml～20mg/ml)呈浓度依赖性.     

α1-抗胰蛋白酶对急性呼吸窘迫综合征大鼠机械通气肺损伤的治疗作用

目的评估α1-抗胰蛋白酶(AAT)是否可减轻急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠接受机械通气后的呼吸机相关肺损伤(VILI)。方法大鼠随机分为假手术组(S组)、机械通气组(V组)和机械通气/AAT组(VA组)。S组大鼠仅接受麻醉,V组和VA组大鼠接受脂多糖模拟ARDS,然后机械通气4 h。在通气开始时,V组大鼠股静脉给予盐水,VA组大鼠接受股静脉给予AAT。测量氧合指数(PaO2/FiO2)、肺湿/干重比(W/D),检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白浓度、弹性蛋白酶浓度、中性粒细胞和巨噬细胞计数,检测BALF中的炎症因子和血清中的细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)浓度,测量肺内氧化应激反应,观察肺组织学损伤和细胞凋亡情况。结果与S组比较,V组和VA组大鼠PaO2/FiO2显著降低,BALF中的蛋白质浓度和肺W/D明显升高,BALF和外周血中炎症因子浓度显著升高,BALF中炎症细胞计数增高;丙二醛(MDA)浓度、髓过氧化物酶(MPO)和还原型辅酶Ⅱ(NADPH)活性显著增加;V组和VA组损伤严重,凋亡细胞数明显增加。与V组比较,VA组PaO2/FiO2显著提高,肺W/D和BALF蛋白浓度降低,BALF中的巨噬细胞和中性粒细胞的数量以及弹性蛋白酶的浓度显著降低;BALF中的肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β、白细胞介素-6降低,白细胞介素-10升高;外周血中的ICAM-1和MIP-2降低;MDA浓度、MPO和NADPH活性显著降低,组织损伤明显减轻,细胞凋亡数量明显减少;Bax、凝溶胶蛋白和裂解的胱天蛋白酶-3表达降低,但Bcl-2的表达增强(P<0.05)。结论 AAT可减轻ARDS大鼠的VILI。AAT给予的保护作用可能与AAT的抗炎、抗氧化应激反应和抗细胞凋亡作用有关。     

G-CSF在心血管疾病方面的临床研究进展

粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对心脏有直接保护作用,也可以通过刺激骨髓干细胞动员至外周血,间接发挥作用,加速损伤修复,减少心血管不良事件。近年来涌现出大量关于G-CSF在心血管疾病方面的临床研究文章,G-CSF使用的剂量、时机、疗程、联用药物等均会影响治疗效果,本文总结了国内外的研究结果,可为G-CSF在心血管疾病方面进一步的临床应用提供依据。     

肌营养不良症模型鼠神经元型一氧化氮合酶抑制蛋白的表达及定位

目的：观察肌营养不良症模型鼠(mdx)肌肉组织神经元型一氧化氮合酶抑制蛋白(protein inhibitor of nNOS，PIN)的表达及定位，以及与dystrophin复合物及神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的关系。方法：取mdx鼠(18只，实验组)和C57BL／10ScSn鼠(15只对照组)骨骼肌作常规染色，比较其组织学改变；同时对mdx鼠，C57BL鼠骨骼肌作Northern blot和固定化蛋白质印迹法(Western blot)及免疫组化分析。结果：Northern blot分析发现，mdx鼠肌肉组织PIN mRNA显著高于C57BL／10ScSn鼠，对照组骨骼肌有少量PIN mRNA表达，其杂交斑点A值为1352．4&;#177;219．7，mdx组杂交斑点灰度A值为2724．2&;#177;394．6，两者差异有非常显著性意义(t=11．985，P&;lt;0．05)；固定化蛋白质印迹法(Westem blot)显示，PIN蛋白的杂交信号在mak组与对照组均出现在约8ku处，两者的吸光度平均值(A)几乎相等，mak组的杂交斑点灰度A值为2378．24-486．7，对照组PIN蛋白的杂交斑点灰度A值为2438．5&;#177;494．9，两者差异无显著性意义(t=0．352，P&;gt;0．05)；免疫组化及激光共聚焦扫描显微镜均揭示，在C57BL／10SeSn鼠肌纤维中，PIN蛋白在肌膜、周边核附近呈强阳性表达，肌质中弱表达，而mdx鼠的PIN蛋白在肌膜及中心核附近呈强阳性表达，细胞质中亦弱表达；PIN于mdx鼠肌纤维表达明显，而nNOS及dystrophin复合物表达明显减少。结论：PIN并非是骨骼肌纤维内dystrophin复合物的一个组成部分；mdx鼠肌纤维PIN的表达受到诸多因素的调控，不同于nNOS及dystrophin复合物。     

《中华人民共和国药典》2020年版收载何首乌和制何首乌质量标准【鉴别】项的商榷

目的 讨论完善《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）2020年版何首乌及制何首乌的薄层色谱鉴别项。方法 考察超声及加热回流2种不同的样品制备方式,以及用二氯甲烷-甲醇-甲酸、乙酸乙酯-石油醚-甲酸展开系统代替原标准中三氯甲烷-甲醇展开系统的可行性,同时比较了不同显色条件。结果 2种制备方式制得的样品在相同的展开条件下展开结果并没有明显差异,超声提取操作更加简便;以二氯甲烷-甲醇-甲酸（5∶1∶0.3）和石油醚-乙酸乙酯-甲酸（5.0∶1.0∶0.3）代替三氯甲烷-甲醇展开系统后,喷10%硫酸乙醇显色剂并在紫外灯365 nm下检视,薄层色谱板上斑点明显增多且分离效果好,较《中国药典》2020年版何首乌和制何首乌薄层色谱鉴别条件更理想。结论 改进后的方法毒性低、简便易行、可行性良好,为进一步完善《中国药典》2020年版何首乌和制何首乌质量标准提供参考。     

箱庭疗法治疗中度抑郁大学生的过程和效果

目的:探讨箱庭疗法对抑郁症大学生治疗的过程及有效性。方法:个案研究法,对一名19岁大一学生进行为期10个月的箱庭治疗,共24次。结果:来访者的箱庭治疗经历了抑郁情绪呈现、回归于转化、整合应用、前进四个阶段;在沙的使用和自我像等方面有独特性;箱庭能够促进来访者的人格发展,进而改善抑郁和焦虑症状,改善人际关系和学习问题。结论:抑郁大学生的箱庭作品和治疗过程具有独特性,箱庭疗法对治疗中度抑郁大学生有较好的效果,并具有长期作用。     

中老年失眠症患者的神经心理特征研究

目的 初步探讨中老年失眠症患者的焦虑、抑郁、自主神经功能状况及注意力和反应控制力情况.方法 采用焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)、自主神经功能检查用表(TMI)和视听觉连续执行任务(CPT)测试对中老年失眠症患者和对照者进行评估,比较两组的焦虑、抑郁、自主神经功能状况、注意力及反应控制力情况.结果 中老年失眠症组抑郁、焦虑和自主神经功能障碍的发生率分别是60.0％、61.7％、76.7％,明显高于对照组的30.0％、35.0％、20.0％,差异有统计学意义(P＜0.05);且中老年失眠症组在视听觉测试中错误数、漏报数及平均反应时间均高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 中老年失眠症患者更易出现焦虑、抑郁和自主神经功能障碍,且会有不同程度的注意力及反应控制力的下降.