重组质粒pRNAT-U6.1/CFB siRNA的构建、鉴定及其对人脐静脉内皮细胞增生的影响

背景 脉络膜新生血管(CNV)是多种眼部疾病致盲的原因之一,研究发现补体系统在CNV的发病机制中起重要作用.目的 构建针对补体因子B(CFB)的小干扰RNA(siRNA)重组质粒,体外观察其对人脐静脉内皮细胞ECV-304增生的影响.方法 根据人CFB的基因序列设计引物,经PCR扩增后与质粒pRNAT-U6.1连接,得到重组质粒pRNAT-U6.1/CFB siRNA,并进行测序鉴定和PCR鉴定.ECV-304细胞株进行常规培养,用电转染技术将重组质粒或空质粒分别转染人ECV-304细胞株,分为CFB-siRNA转染组和空质粒转染组,未转染的细胞为空白对照组.细胞转染后继续培养48 h,于倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达并计算转染效率;采用半定量逆转录PCR(RT-PCR)法测定各组细胞中CFB mRNA的相对表达量;用MTT法检测各组细胞转染24、48和72 h时细胞的增生值(A)并计算生长抑制率;利用流式细胞技术检测各组细胞的生长周期变化.结果 PCR扩增的目的片段序列与CFB基因序列完全相符,ECV-304细胞转染后,倒置荧光显微镜下可见CFB-siRNA转染组和空质粒转染组的细胞中GFP呈绿色荧光.半定量RT-PCR结果显示,CFB-siRNA转染组、空质粒转染组和空白对照组的CFB mRNA相对表达量分别为0.07±0.04、0.14±0.02和0.14 ±0.03,总体比较差异有统计学意义(F=233.05,P=0.00);其中CFB-siRNA转染组CFB mRNA相对表达量明显低于空质粒转染组和空白对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).MTT法检测结果显示,各组不同时间细胞增生抑制率总体比较差异有统计学意义(F分组=212.99,P=0.00);CFB-siRNA转染组细胞转染24、48、72 h后细胞增生的抑制率分别为(23.45±0.01)％、(33.48±0.02)％和(45.49±0.01)％,明显高于同时间点空质粒转染组和空白对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,CFB-siRNA转染组、空质粒转染组和空白对照组G1期的细胞数占总细胞数的(44.4±0.5)％、(25.8±0.4)％和(27.9±0.6)％,总体比较差异有统计学意义(F=58.98,P=0.00);CFB-siRNA转染组G1期和G2期细胞所占百分比显著高于空白对照组和空质粒转染组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 重组质粒pRNAT-U6.1/CFB siRNA可通过将细胞阻滞在G1期而有效抑制人脐静脉内皮细胞的增生.     

术前NLR和PLR对上皮性卵巢癌患者预后的评估价值

目的:探讨术前中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)和血小板与淋巴细胞比值(PLR)对上皮性卵巢癌患者预后的评估价值。方法:收集2005年11月至2012年12月在天津市中心妇产科医院初治且经手术治疗的153例卵巢良性肿瘤和206例上皮性卵巢癌患者的临床病理资料,比较术前NLR和PLR在卵巢良恶性肿瘤的区别,根据统计学方法选取NLR和PLR临界值,分析NLR和PLR与上皮性卵巢癌临床病理因素的关系。通过单因素及多因素分析评估术前NLR和PLR对患者术后生存的影响。结果:术前NLR和PLR水平在上皮性卵巢癌中明显高于卵巢良性肿瘤。选取NLR=2.62和PLR=173分别作为临界值。单因素分析结果显示,FIGO分期晚、中-低分化、腹水、脉管癌栓、CA125≥35、NLR≥2.62、PLR≥173是影响患者术后无病生存期(DFS)的危险因素(P0.05);FIGO分期晚、腹水、脉管癌栓、CA125≥35、PLR≥173是影响患者术后总生存期(OS)的危险因素(P0.05)。多因素分析显示,FIGO分期晚、NLR≥2.62、脉管癌栓是上皮性卵巢癌患者DFS的独立危险因素(P0.05)。结论:NLR和PLR方便测得且价格便宜,对卵巢癌的预后有一定的评估价值。     

纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架材料复合大鼠成骨细胞培养的实验研究

目的 将纳米羟磷灰石/壳聚糖(nHA/CS)支架材料与大鼠的成骨细胞在体外复合培养,研究其生物相容性,以期在骨组织工程支架材料的选择方面提供依据.方法 原代培养大鼠成骨细胞,倒置显微镜作细胞形态学观察,碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红钙染色对细胞进行鉴定.将第三代细胞与nHA/CS材料体外复合培养,采用MTT比色法和...     

四大主产区枳壳的指纹图谱分析

摘要：目的:建立枳壳色谱指纹图谱的分析方法,评价四个主产区枳壳药材的质量属性,并基于聚类分析和主成分分析方法,为不同主产区枳壳药材质量控制提供参考。方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm, 5μm）色谱柱,以甲醇（A）-水（B）为流动相梯度洗脱,流速：1.0ml·min-1,检测波长：330 nm,柱温：30℃,建立14批次四大主产区枳壳的HPLC指纹图谱,比较四大主产区枳壳指纹图谱的相似度,并应用SPSS19统计软件对四大主产区枳壳进行聚类分析和主成分分析,综合评价四大主产地枳壳药材的质量。结果:枳壳药材HPLC指纹图谱16个峰确定为共有峰,并指认了2号峰为柚皮苷,3号峰为新橙皮苷,9号峰为木犀草素,14批次四大主产区枳壳指纹图谱和对照图谱的相似度为0.873～0.972;聚类分析及主成分分析显示不同主产区枳壳间存在一定的差异。结论:建立的枳壳指纹图谱重现性及专属性较好,聚类分析及主成分分析较好地解释了不同主产区枳壳药材的质量差异,为枳壳药材的质量控制提供科学的参考。     

鞘内给予外源性头蛋白对缓解神经病理性疼痛的作用

目的:观察鞘内给予外源性头蛋白(noggin,NOG)对腰5脊神经结扎(L5 spinal nerve ligation,SNL)致神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)大鼠疼痛行为学的影响,并同时检测NOG对脊髓内星形胶质细胞活性、炎性因子及下游信号的调控作用.方法:40只雄性Sprague Daw...     

肝胆管结石肝切除术后结石残留的相关危险因素分析

目的调查乳腺癌根治术后患者采血模式现状,探究采血模式与采血异常情况之间的相关性。方法通过自制问卷调查表以简单随机抽样方法对成都市某三甲医院门诊乳腺癌根治术后患者的采血模式现状进行调查,采用卡方检验分析采血模式与采血异常之间的关系。结果 157例乳腺癌根治术后患者中有44例患者曾进行术侧采血,19例患者出现过采血异常现象。采血是否异常与采血位置的选择无关,健侧采血异常事件的发生与术后首次采血时间有关（P<0.05）,术侧采血异常事件的发生与年龄、术后首次采血时间、采血部位均无关（P>0.05）。结论乳腺癌根治术后患者采血位置受限制时可行术侧采血。     

军队中心医院派驻门诊部防控传染病的对策探讨

军队医院应做好传染病防控工作,确保官兵战斗力不受损失是对其医疗保障能力的重大考验.某军队中心医院担负着天 津及周边地区部队的传染病收治工作,开设2个院区和5个派驻门诊部,分布于天津市区、滨海新区和河北省廊坊市,驻地分 散、管控难度大.     

血清miR-23a表达水平与急性脑梗死患者预后的相关性

目的 探讨急性脑梗死患者血清中miR-23a的表达与疾病严重程度及其与患者预后的关系.方法 选取160例急性脑梗死患者为研究组,收集120例同期进行健康体检的非脑梗死患者为对照组.用qPCR检测2组血清中miR-23a的表达,并分析急性脑梗死神经功能评分(NIHSS评分)与miR-23a的表达的相关性.出院后3个月进行...     

化疗导致的心脏毒性生物标志物研究进展

随着肿瘤患者治疗生存率的提高,以肿瘤治疗相关心脏功能不全(CTRCD)为主的心脏毒性已成为威胁患者生存的严重问题。与心脏活检、超声心动图等检查方式相比,生物标志物具有及时性和检测简便的优点。应用生物标志物在早期发现化疗导致的心脏毒性,并及时改善治疗方案,可有效减少或避免心脏损伤的发生。本文对在化疗引起的心肌细胞早期损伤、炎性反应及心脏功能性改变等毒性反应中表达异常的传统生物标志物、新型生物标志物和潜在生物标志物在心脏毒性方面的应用及研究现状进行综述,以期及时发现心脏毒性,为提高患者生存质量提供指导。     

果酸化学剥脱治疗面部痤疮患者的效果

目的:观察羟基乙酸(果酸)化学剥脱治疗面部痤疮患者的疗效。方法:选择2018年12月1日至2019年5月31日于北京友谊医院皮肤科就诊的36例面部痤疮患者,男4例、女32例,年龄24~36(28.06±2.88)岁。应用浓度20%果酸治疗,评估治疗前后患者痤疮分级、痤疮数目、痤疮消退率、治疗有效率、毛孔改善情况及患者满...