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目的:探讨糖尿病氧化应激环境中过表达α-Klotho(KL)的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增生、迁移、管腔形成以及紧密连接的影响。
方法:将RAW264.7细胞分为对照组、4-羟壬二酸酯(4HNE)组、4HNE+KL组,采用免疫荧光实验检测RAW264.7细胞F4/80的表达。制备3组细胞的条件培养基用于培养HUVECs,分为Mø-NC组、Mø-4HNE组和Mø-4HNE+KL组。采用CCK8实验检测血管内皮细胞增生,采用划痕实验和Transwell实验检测迁移,采用管腔形成实验检测管腔形成,采用Western blot实验检测闭合蛋白5(Claudin 5)、咬合蛋白(Occludin)、带状闭合蛋白1(ZO 1)表达水平。
结果:免疫荧光实验结果显示,4HNE组RAW264.7细胞F4/80荧光强度较对照组明显增强,而4HNE+KL组F4/80荧光强度较4HNE组明显减弱(均P<0.05)。CCK8实验结果显示,相比于Mø-NC组,Mø-4HNE组HUVECs增生显著增加,而Mø-4HNE+KL组HUVECs增生较Mø-4HNE组显著下降(均P<0.01)。划痕实验和Transwell实验结果显示,相比于Mø-NC组,Mø-4HNE组HUVECs迁移显著增强,而Mø-4HNE+KL组HUVECs迁移较Mø-4HNE组显著减弱(均P<0.01)。管腔形成实验结果显示,相比于Mø-NC组,Mø-4HNE组HUVECs管腔数显著增加,而Mø-4HNE+KL组管腔数较Mø-4HNE组显著下降(均P<0.01)。Western blot实验结果显示,相比于 Mø-NC组,Mø-4HNE组HUVECs中Claudin 5、Occludin、ZO 1蛋白的相对表达量明显减少,而Mø-4HNE+KL组Claudin 5、Occludin、ZO 1蛋白的相对表达量较Mø-4HNE组明显增加(均P<0.01)。
结论:KL通过改变糖尿病氧化应激环境中巨噬细胞激活状态抑制了HUVECs的增生、迁移、管腔形成,并增强了HUVECs的紧密连接。 相似文献