丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活基因NS5ATP13的克隆化研究

目的 应用微矩阵(microauray)技术，结合生物信息学(bioinformatics)技术筛选并克隆丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)的反式激活基因，阐明授性HCV感染、肝纤维化及肝细胞癌(HCC)的等相关疾病的发病机制。方法 根据HCV-H病毒株序列设计、合成序列特异性的引物。以含有全长HCV—H株cDNA的pBRTM-3011质粒DNA作为模板，进行多聚酶链反应(PCR)扩增，获得的HCVNS5A编码基因片段克隆到TA载体中进行核昔酸序列的测定，构建真核表达载体PcDNA3．1(-)-NS5A。以pcDNA3．1(-)-NS5A转染肝母细胞瘤细胞系HepG2，提取总RNA，逆转录为cDNA后进行表达谱基因芯片分析。应用分子生物学技术，结合生物信息学技术，克隆HCVKDA反式激活作用的新的靶基因。结果 构建了真核表达载体pcDNA3．1(-)-NS5A，经过限制性内切酶作图分析和核苔酸序列分析证实正确无误。以PcDMA3．1(-)-NS5A转染HepG2后提取总MA，逆转录后进行表达谱基因芯片技术分析。应用分子克隆技术结合生物信息学技术克隆NS5A反式激活的新型靶基因，命名为NS5ATP13，在GenBank中登录，登录号为D21262。Ns5ATP13基因的编码序列全长为2103个核苷酸(nt)，编码产物由700个氨基酸残基(aa)组成。结论 丙型肝炎病毒NS5A基因产物具有显著的反式激活作用。微短阵技术是分析基因表达谱变化的自动化和高通量技术。应用这些技术，发现了HCVKDA反式激活作用的新的靶基因，将为进一步研究HCVNS5A反式激活作用的分子生物学机制及HCV相关疾病发病机制奠定基础。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3反式激活基因2的克隆化研究

目的 应用抑制性消减杂交技术(SSH)及生物信息学技术(bioinformcs)筛选并克隆丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)反式激活新型靶基因，进一步阐明HCV感染相关疾病的发病机制。方法 以HCVNS3蛋白表达质粒pcDNA3．1(-)-NS3转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3．1(-)为平行对照，提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析。并应用分子生物学技术，结合生物信息学技术，克隆HCvNS3反式激活作用的新的靶基因。结果 对于所获基因片段序列分析表明，其中之一为新型基因片段，从HepG2细胞提取总RNA，以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列，并测序证实，因其可以被NS3蛋白反式激活，故命名为NS3TP2，在GenBank中注册，注册号为AYll6970。NS3TP2基因的编码序列全长为1299个核苷酸(nt)，编码产物由432个氨基酸残基(aa)组成。结论 HCVNS3是一种典型的病毒基因组编码的具有反式激活作用的蛋白，而抑制性消减杂交(SSH)是一种鉴定、分离组织细胞中选择性表达基因的技术。通过这种技术，发现了HCVNS3反式激活作用的新的靶基因，这一发现，为进一步研究HCVNS3蛋白反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础。     

细胞色素CYPⅡE1与肝脏疾病关系的研究进展

0 引言在肝细胞微粒体内有1个氧化还原酶系统,由多种水解酶和结合酶组成.这个酶系统在生理情况下,可以促进生理活性物质的灭活和排泄,另一方面也可以促进药物代谢,所以又叫药酶.细胞色素P450是药酶中的一种多功能氧化还原酶,他可以使药物的烃基及芳香基羟化,使硝基及偶氮化合物还原成氨基,因他的一氧化碳结合物的吸收光谱高峰在450 nm处,故叫P450. P450是肝药酶中最重要的酶系,参与各种外源物(如药     

安全留置针的探索与实践

在快节奏、高度紧张和人员不足的护理工作中，由于使用非安全型的医疗用品，针刺伤时有发生。长期以来，人们更多地关注血源性疾病在患者中的传播，而对医务人员因职业暴露感染血液性疾病危险的关注却很少。有关专家指出，医务人员职业感染的危险程度取决于人群中血液性传播疾病的流行率。我国是乙型肝炎好发国之一，乙肝病毒的携带者约有1．2亿，丙肝的感染率也达到1．7％，艾滋病的流行在我国也已进入快速增长期。因此，医务人员正面临着严重的职业暴露危险。其中护理人员是针刺伤的主要受害者，但80％以上的针刺伤可以通过使用安全型的穿刺针预防。     

护士长在日常工作中管理思路探讨

<正>护理是医院工作中不可缺少的一部分。护士长是护理工作的组织者和领导者,对保证护理安全,提高护理质量起着重要作用。通过多年的护理管理工作,作者在护士长管理方面积累了一些粗浅的经验,报道如下。     

联合术式治疗女性出口处梗阻性便秘的临床观察

我们从1999年6月～2005年2月共收治女性出口处梗阻性便秘191例，其中耻骨直肠肌肥厚、直肠黏膜内脱垂、直肠前突三者并存61例，占31．9％；61例病人均采用联合术式治疗，取得满意效果，总结报道如下。     

半导体激光穴位照射治疗颈腰腿痛116例

我院从 2 0 0 0年起引进ＷＴＸ -ＩＴ型无创伤半导体激光血氧治疗仪用于颈腰腿痛的治疗 ,取得较满意疗效 ,现报道如下 :1　临床资料1 1 6例是门诊与老年病床选出的资料较为完整 ,能坚持治疗的患者。其中男 71例 ,女 45例 ,年龄最大 76岁 ,最小 2 8岁 ;病程 1年以内 65例 ,1～ 5年以内 36例 ,5年以上 1 5例 ;颈椎病 38例 ,肩周炎 2 2例 ,网球肘 1 3例 ,腰椎骨质增生 34例 ,膝病 9例。2　治疗方法使用中国科学院上海光机所研制的ＷＴＸ -ＩＴ型半导体激光治疗仪 ,波长 65 0ｍｍ(红色 ) ,激光功率≥ 5ｍＷ ,照射光斑直径 3× 3ｃｍ2 ,发射方式…     

N-乙酰半胱氨酸对稳定期慢性阻塞性肺疾病肺常规通气的改善分析

目的：探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对稳定期慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者肺常规通气的改善情况。方法：选择119例符合人选标准的COPD患者，随机分为治疗组（60例）和对照组（59）例，治疗组在常规治疗基础上。加用NAC（200mg。每日13次。连用2月）；对照组仅给予常规治疗。观察两组2百常规肺通气功能的变化。结果：2月后，治疗组第一秒用力呼气容积（FEV1）、用力肺活量（FVE）、和最大自主通气（MVV）较治疗前有显著改善（P〈0．05）。对照组治疗前后无明显改善（P〉0．05）。结论：COPD稳定期患者，治疗加用抗氧化剂NAC可改善机体的通气功能。     

应用抑制性消减杂交技术筛选乙型肝炎病毒DNA聚合酶末端蛋白的反式激活基因

目的 应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶末端蛋白(TP)反式激活基因的差异表达的cDNA消减文库，克隆TP反式激活相关基因。方法 以TP表达质粒pcDNA3．1(-)-TP转染HepG2细胞，以空载休peDNA3，1(-)为对照；制备转染后的细胞裂解液，提取mRNA并逆转录为cDNA，经Rsal酶切后，将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR，将产物与T／A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果 文库扩增后得到35个阳性克隆，经菌落聚合酶链反应(PCR)分析，得到34个200-1000bp插入片段。对所得片段测序，并进行同源性分析，显示14种己知基因编码蛋白和1种未加功能基因序列，可能是TP反式激活靶基因。结论 成功构建乙型肝炎病毒TP反式激活基因差异发达的cDNA消减文库，为今后进一步分析、研究病毒蛋白的致病机制奠定基础。