尼洛替尼诱导K562/A02细胞凋亡及对HO-1基因表达的影响

 目的 研究尼洛替尼(nilotinib,AMN107诱导K562/A02细胞凋亡及对血红素加氧酶-1(HO-1基因表达的影响。方法 采用荧光原位杂交(FISH法检测K562/A02细胞中的BCR-ABL融合基因;用不同浓度的AMN107分别处理K562/A02细胞24 h后,通过实时荧光定量PCR(RQ-PCR法检测BCR-ABL融合基因mRNA的表达水平;采用MTT法观察细胞增殖变化;通过Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡和细胞周期;采用RT-PCR法和Western Blot法检测HO-1基因的表达。 结果 FISH法分析结果显示,K562/A02细胞BCR-ABL融合基因阳性细胞占细胞总数98%;RQ-PCR法检测结果显示,0,5,10,20 μmol·L-1 AMN107作用于K562/A02细胞24 h后BCR-ABL融合基因表达随AMN107浓度增加而逐渐下降;MTT法和Annexin V/PI法显示与对照组相比,细胞存活率随AMN107浓度升高而下降,凋亡率逐渐增加;细胞周期分析显示,经AMN107处理的细胞,G₀/G₁期和S期细胞明显减少,细胞阻滞在G₂/M期;RT-PCR法和Western blot法均检测到HO-1基因表达随AMN107浓度升高而降低。结论 AMN107可抑制BCR-ABL融合基因和HO-1基因表达,从而诱导慢性粒细胞白血病（CML耐药细胞的凋亡,说明HO-1是CML细胞生长以及BCR-ABL基因存在的一个相关因子,HO-1基因是克服慢性粒细胞白血病耐药的一个潜在靶向。     

天冬总皂苷对衰老大鼠脾脏Bcl-2基因表达水平的影响

目的研究天冬总皂苷对衰老大鼠脾脏Bcl-2基因表达的影响,探讨其延缓衰老大鼠脾脏的作用及其机制。方法通过皮下注射D-半乳糖建立衰老大鼠模型的同时,以天冬总皂苷灌胃进行治疗,3个月后处死各组大鼠,检测各组大鼠脾脏指数变化;采用光镜观察各组大鼠脾脏形态学改变;应用MTT法检测各组大鼠脾脏淋巴细胞对ConA刺激后的增殖能力的变化;应用Real-time PCR检测各组脾脏组织Bcl-2 mRNA的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠脾脏指数、脾淋巴细胞对ConA刺激的增殖能力明显下降,脾脏发生明显病理损伤。天冬总皂苷给药组能使上述指标明显逆转(P<0.05),并且能够提高大鼠脾脏组织Bcl-2 mRNA的表达(P<0.01)。结论天冬总皂苷升高Bcl-2 mRNA的表达可能是其改善衰老大鼠脾脏的机制之一。     

贵州产天冬总皂苷提取物对人早幼粒白血病细胞株HL-60的影响

目的： 提取贵州产天冬中总皂苷（ASP）并研究其对人早幼粒白血病细胞株HL-60增殖和凋亡作用。 方法： 选取贵州产天冬为研究对象,提取其总皂苷成分;以不同浓度梯度的天冬总皂苷提取物作用于人早幼粒白血病细胞株HL-60,采用MTT法检测细胞增殖情况,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;应用实时定量（Real-time） PCR检测各组HL-60细胞中B细胞淋巴瘤/白血病2（Bcl-2） mRNA的表达。 结果： 随着天冬总皂苷浓度的升高,其对HL-60细胞增殖的抑制作用明显增强,呈现剂量依赖趋势;与对照组相比,天冬总皂苷组使HL-60细胞凋亡率明显增加;并且能够使HL-60细胞内的Bcl-2 mRNA表达下降。 结论： 贵州产天冬总皂苷提取物下调Bcl-2 mRNA的表达、诱导人早幼粒白血病细胞株HL-60凋亡,可能是其治疗白血病的机制之一。     

急性髓系白血病FLT3基因突变研究

本研究探讨急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者中FMS样酪氨酸激酶3（FLT3）基因内部串联重复突变（ITD）及第二酪氨酸激酶结构域（TKD）点突变及其临床意义。采用基因组DNA—PCR方法检测131例初发AML患者骨髓单个核细胞FLT3基因外显子14、15中ITD突变,采用基因组DNA—PCR结合限制性内切酶酶切方法检测FLT3基因外显子20中TKD点突变。结果表明：131例初治AML患者中,21例（16．0％）FLT3－ITD突变阳性,3例（2．3％）FLT3－TKD点突变阳性,无同一患者同时发生两种突变。FLT3－ITD阳性组初诊时白细胞计数（WBC）及骨髓原始细胞比例高于野生型FLT3（FLT3－wt）组。FLT3－ITD阳性组患者完全缓解（CR）率47．6％,显著低于FLT3－wt88．1％（P〈0．05）。20例M3患者中,FLT3－ITD阳性组及阴性组患者缓解率差异无统计学意义;非M3FLT3－ITD阳性组患者cR率为37．5（6／16例）,显著低于非M3FLT3－wt组患者CR率90．6％（48／53例）（P〈0．05）。阳性组患者完全缓解后14个月（2—20个月）内复发3例,复发率为50％（3／6）,高于FLT3－wt组29．2％（14／48例）。由于FLT3－TKD阳性患者仅3例,未单独进行统计学分析。结论：FLT3基因突变是AML患者中常见的突变,FLT3－ITD突变较FLT3－TKD点突变发生率高,FLT3－ITD有突变的AML患者预后差;FLT3－TKD点突变对预后的影响不明显。临床上早期FLT3基因突变检测对AML患者今后的靶向治疗及了解临床预后有重要意义。     

ALDH2基因导入对K562细胞增殖和抗氧化损伤的影响

目的 克隆人乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因,研究ALDH2基因导入慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞后对其增殖和抗氧化损伤的影响.方法 从肝细胞中克隆人ALDH2基因,构建真核表达载体,用脂质体法将其导入K562细胞中,用RT-PCR和Western blot法检测ALD-H2基因的表达,锥虫蓝拒染法和MTT法检测转基因组细胞的增殖水平及对氧自由基引起的氧化损伤的反应;在此基础上,利用RT-PCR以及荧光分光光度法进一步检测氧自由基诱导后转基因组细胞中血红素加氧酶-1(HO-1)的表达和细胞内活性氧类(ROS)的产生.结果 成功克隆人ALDH2基因并将构建的真核表达载体转染K562细胞,RT-PCR和Western blot法检测到ALDH2的高表达.锥虫蓝拒染法和MTT结果显示转基因组细胞增殖水平明显高于对照组(P＜0.05),经基因修饰的细胞对H2O2耐受性增高,H2O2的IC50值提高了7.8倍(IC50值分别为12.3μnol/L和1.4 μmol/L,P＜0.01).HO-1的表达和ROS的产生随H2O2浓度的增大而增加,而一定浓度H2O2诱导后HO-1的表达和ROS的产生在转基因组中显著低于对照组(P＜0.05).结论 ALDH2基因导人K562细胞后可增加对氧自由基引起的细胞损伤的耐受性,起到保护作用,该过程伴随着ROS水平以及HO-1表达的降低.     

以全血细胞减少为表现的巨幼细胞贫血56例临床分析

巨幼细胞贫血在临床上较为常见,患者除了表现贫血外,尚有一部分人还表现为全血细胞减少,常易被误诊为再生障碍性贫血、溶血性贫血、骨髓增生异常综合征等疾病,现将我院收治的56例该类患者资料进行分析,总结报道如下。     

健康成人凝血酶原片段F_(1+2)随龄变化的研究

凝血酶原片段 1 + 2 ( F1+ 2 )为 Xa因子介导裂解凝血酶原分子而产生的多肽片段。检测血浆中 F1+ 2可作为 Xa因子作用于凝血酶原的确切标记 〔1,2〕。健康成人随着年龄增长 ,特别是到了老年期 ,凝血因子常被激活 ,血液凝固性增加 ,凝血酶原活化产物F1+ 2 及血浆因子 X水平升高〔3〕。本文通过不同年龄组健康成人 F1+ 2 血浆水平的分析 ,旨在探讨健康成人从青年到老年血浆 F1+ 2 随龄变化的规律及其临床意义。1　对象和方法1 .1 　 研究对象健康成人 75例 ,男 42例 ,女 33例 ;年龄 2 1～75岁 ,平均 46.3岁。均为经体检的健康人。行实验室…     

甲磺酸伊马替尼治疗儿童慢性髓细胞白血病一例

患者 女性,11岁,因右腿疼痛40 d、耳鸣8 d、发热半天入院,查体:双侧颈部及腹股沟区黄豆大小淋巴结,肝肋缘下10 cm、剑突下14 cm,脾大入盆腔,Ⅰ线10.5 cm,Ⅱ线13.5 cm.Ⅲ线2 cm.     

硼替佐米治疗多发性骨髓瘤八例

目的 初步观察硼替佐米联合地塞米松(DEX)或化疗治疗多发性骨髓瘤(MM)的初步疗效和患者的不良反应.方法 8例MM患者分别采用硼替佐米(1.3 mg/m2,第1、4、8、11天或3.5mg,第1、8天)联合地塞米松或VTD[长春新碱(VCR)、吡柔比星(THP)、Dex]方案治疗,每4周为1个疗程,完成1～4个疗程,其中3例行自体外周血造血干细胞移植,评价疗效和不良反应.结果3例完全缓解(CR),2例部分缓解(PR),3例达到微小反应(MR);总有效(CR+PR)率为62.5%;常见不良反应有胃肠道反应、白细胞和血小板轻度减少、肢端麻木感、肝功能异常及乏力等,均能耐受.3例行自体外周血造血干细胞移植(APBSCT)患者获得足量的干细胞数并成功植活.结论 硼替佐米联合DEX或化疗治疗MM疗效好,不良反应轻微,患者易于耐受,硼替佐米不影响MM干细胞采集和植活.     

硼替佐米治疗多发性骨髓瘤八例

 目的　初步观察硼替佐米联合地塞米松（DEX）或化疗治疗多发性骨髓瘤（MM）的初步疗效和患者的不良反应。方法　8例 MM患者分别采用硼替佐米（1.3 mg／m2,第1、4、8、11天或3.5 mg,第1、8天）联合地塞米松或VTD[长春新碱（VCR）、吡柔比星（THP）、Dex]方案治疗,每4周为1个疗程,完成1～4个疗程,其中3例行自体外周血造血干细胞移植,评价疗效和不良反应。结果　3例完全缓解（CR）,2例部分缓解（PR）,3例达到微小反应（MR）;总有效（CR+PR）率为62.5 %;常见不良反应有胃肠道反应、白细胞和血小板轻度减少、肢端麻木感、肝功能异常及乏力等,均能耐受。3例行自体外周血造血干细胞移植（APBSCT）患者获得足量的干细胞数并成功植活。结论　硼替佐米联合DEX或化疗治疗 MM疗效好,不良反应轻微,患者易于耐受,硼替佐米不影响MM干细胞采集和植活。