肾癌ACHN细胞HIF-1α基因siRNA真核表达质粒的构建与筛选

目的采用RNA干扰方法,构建及筛选对肾透明细胞癌ACHN细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因有干扰沉默作用的真核表达质粒。方法 CoCl2缺氧诱导培养ACHN细胞高表达HIF-1α,设计并化学合成4条针对HIF-1α基因的小干扰RNA（siRNA）序列,构建相应真核表达质粒pU6H1-GFP-HIF1α-siRNA-1/2/3/4,经测序分析,质粒构建成功后,分别转染ACHN细胞后培养24h,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,计算转染效率,采用荧光实时定量PCR（real time-PCR）和免疫印记杂交法（Western blot）分别检测HIF-1α的mRNA与蛋白表达水平。结果质粒构建后经测序显示与设计完全一致;荧光显微镜下观察到ACHN细胞表达绿色荧光蛋白,证实重组质粒已转入细胞,转染效率约为78%;实时定量PCR与Western blot结果显示,siRNA-1/2组HIF-1α的mRNA与蛋白表达较对照组均明显下降（P〈0.05）,质粒pU6H1-GFP-HIF1α-siRNA-1/2明显干扰抑制ACHN细胞HIF-1α基因表达,其中以质粒pU6H1-GFP-HIF1α-siRNA-1效果最佳。结论本实验成功构建靶向HIF-1α基因的真核表达质粒,并筛选出能有效抑制ACHN细胞HIF-1α基因表达的质粒pU6H1-GFP-HIF1α-siRNA-1/2,这为肾癌的基因治疗提供了新的方法和手段。     

74例耻骨上膀胱穿刺造瘘术早期并发症的处理

目的：探讨耻骨上膀胱穿刺造瘘术早期并发症发生的原因及防治措施。方法：局麻下耻骨上膀胱穿刺造瘘术1600例患者中出现并发症的共74例，其中，穿刺误入腹腔3例，出血及血肿7例，尿外渗18例，改开放性手术造瘘5例，造瘘管脱落3例，膀胱刺激症状32例，感染6例，均给予相应的治疗。结果：经用不同的方法治疗，所有的并发症均获治愈或好转。结论：发生耻骨上膀胱穿刺造瘘术早期并发症的原因有解剖异常、操作失误、术前准备不充分和导尿管刺激等，正确操作、术前充分准备、术后严密观察和及时处理可以预防和治愈并发症。     

苦参碱抑制人雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3细胞增殖和诱导凋亡机制的研究

目的 探讨苦参碱抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3增殖、诱导细胞凋亡的可能机制,为临床雄激素非依赖性前列腺癌的治疗提供一定的实验基础和理论依据.方法 应用活性Caspase-3检测、Western blot印迹分析不同浓度苦参碱作用PC-3细胞后其Caspase-3表达的差异,并通过荧光免疫细胞化学染色、Western blot印迹分析研究不同浓度苦参碱对PC-3细胞Bax/Bcl-2表达的影响.结果 Caspase-3检测显示不同浓度苦参碱均可上调Caspase-3表达.随着苦参碱浓度的增加,Caspase-3表达的荧光强度升高,Caspase-3/β-actin积分密度值亦升高,呈现剂量依赖性关系(P<0.01).Bax、Bcl-2蛋白表达分析显示不同浓度苦参碱作用PC-3细胞后,Bax蛋白的表达增加,Bcl-2蛋白表达下降.Bax表达的荧光强度及Bax/β-actin积分密度值随着苦参碱浓度的增加而升高,呈现剂量依赖性关系(P<0.01);Bcl-2表达的荧光强度及Bcl-2/β-actin积分密度值随着苦参碱浓度的增加而下降,亦呈现剂量依赖性关系(P<0.01).结论 苦参碱抑制PC-3细胞增殖并诱导细胞凋亡可能涉及到了线粒体.细胞色素C/Caspase-9/Caspase-3途径.     

损害控制外科技术救治地震严重多发伤

目的 探讨损害控制外科技术在汶川地震灾区严重多发伤救治中的作用.方法 回顾性分析损害控制在24例四川地震灾区严重多发伤伤员救治中的经验,研究损害控制的方法、时机.结果 本组24例全部存活,5例截肢,4例重要器官衰竭者已脱离危险,3例尚需进一步行清创和植皮手术,其他伤员均已完成确定性手术并在顺利康复中.结论 地震灾区严重多发性损伤特点与平常不一样;骨科损害控制有利于提高地震灾区严重多发伤的救治,特别是前线和后方二级医院联合采用可有效地控制损害.     

侗药五味止泻汤对溃疡性结肠炎大鼠血清IL-1,IL-10 的影响

目的:研究侗药五味止泻汤对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠损伤的修复作用及对血清IL-1和IL-10的影响.方法:以2,4,6-三硝基苯磺酸和乙醇灌肠法制备UC大鼠模型,将60只SD大鼠随机分为正常组,模型组,侗药五味止泻汤低、中、高剂量组(5.5,11,22 g·kg-1)和美沙拉嗪(0.5 g·kg-1)组,共6组,每组10只.低、中、高剂量组分别给予不同剂量侗药五味止泻汤ig,美沙拉嗪组予以美沙拉嗪ig,正常组及模型组灌服等体积蒸馏水.10d后观察大鼠一般情况及组织病理学改变,透射电镜观察结肠超微结构改变,采用ELISA法检测各组大鼠的血清白介素-1(IL-1)、白介素-10(IL-10)的水平.结果:与模型组比较,侗药五味止泻汤3个剂量组均能有效提高大鼠血清IL-10含量,降低IL-1含量(P＜0.01),并对损伤的结肠黏膜有明显的修复作用,降低结肠黏膜损伤指数(P＜0.01).结论:侗药五味止泻汤通过抑制促炎细胞因子IL-1,促进抗炎细胞因子IL-10生成,发挥对UC的治疗作用.     

控制性降压联合自体血回输在特发性脊柱侧弯矫形中的应用

背景：特发性脊柱侧凸是青少年较为常见的脊柱畸形,手术矫形是其重要的治疗手段。但手术创伤大、时间长,矫形过程中暴露、剥离组织较多,出血量大,需较大量的输血。为缓解血源紧张,减少输血费用,避免输血性疾病的发生,尽量减少输注异体库存血。 目的：观察控制性降压联合自体血回输在特发性脊柱侧弯矫形中的作用。 方法：对46例特发性脊柱侧弯患者行后路矫形时均进行术中控制性降压。其中17例未进行自体血回输,作为对照组,矫形后全部输异体库存血;另外29例均使用自体血液回输,包括矫形前预存自体血及矫形过程中自体血回输,作为实验组。观察两组患者失血量及输血情况。 结果与结论：失血量：对照组400~1 000 (867±161) mL,实验组350~1400 (842± 376) mL,两组相比差异无显著性意义(P > 0.05)。输入库存血量：对照组500~1 800 (845±332) mL,明显多于实验组0~1 300 (423±237) mL(P < 0.01)。提示控制性降压可减少矫形过程中出血量,同时矫形后采用自体血回输可明显减少异体库存血的需要量。     

外科手术中大血管意外损伤的救治(附34例报告)

目的探讨外科手术中大血管意外损伤的救治经验。方法回顾分析34例术中大血管意外损伤的经验,研究其原因、特点、救治方法。结果34例中血管吻合5例(14.7%),自体静脉移植7例(20.6%), 人造血管移植1例(2.9%),血管修补9例(26.5%),血管结扎6例(17.7%),压迫等保守治疗4例(11.8%), 无法处理或未来得及处理术中死亡2例(5.9%)。输血800～15200ml,平均2862ml。结果本组死亡 6例(17.7%),截肢1例(2.9%),手术成功修复27例(79.4%)。结论 (1)手术中大血管意外损伤,可引起严重并发症和造成严重后果。(2)人为因素是主要原因,提高医生的警觉性及手术技巧,规范操作可有效地降低发生率。(31)损伤以单纯的动脉损伤为最多见,单纯静脉损伤次之,因此治疗以修补为主,静脉移植次之。(4)患者常常并发较严重的原发病,为避免顾此失彼,多脏器的兼顾与多科室问的协调在救治中较为重要。     

重组人生长激素对老年人骨盆骨折蛋白质代谢及免疫功能的影响

目的 探讨应用重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)对接受常规肠内营养支持的老年骨盆骨折患者蛋白质代谢及免疫功能的调理作用.方法 选择多发性骨盆骨折(骨折3处以上),年龄＞70岁患者30例,随机分为2组: 治疗组15例,采用标准肠内营养 rhGH[rhGH 0.2U/(kg·d)皮下注射,共计8天];另外15例作为对照组,治疗前和治疗后的第8天,分别测定血清白蛋白、血清转铁蛋白、血清前白蛋白浓度、免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)、T淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8),并统计医院获得性肺炎的发生情况.结果 治疗组患者在治疗后第8天的血清白蛋白、血清转铁蛋白和血清前白蛋白水平比对照组显著升高(P＜0.05), IgA、IgG、IgM、CD3、CD4、CD4/CD8与对照组相比有明显增高(P＜0.05);治疗组患者医院获得性肺炎的发生率也较对照组显著降低(P＜0.05).结论 在肠内营养支持下加用rhGH可以明显促进老年骨盆骨折患者的蛋白质合成代谢,并改善免疫功能,增加肌肉的收缩力,增强排痰力度,减少医院获得性肺炎的发生率.