肠道病毒71型北京分离株全基因组序列分析

目的 了解2008年北京地区肠道病毒71型(EV71)分离株的全基因序列特点.方法 收集北京地区手足口病患儿的咽拭子样本12份,对其中1份样品08YM-3,经Vero细胞分离培养,提取病毒RNA.利用RT-PCR和5'、3'RACE扩增EV71全长基因.对PCR产物克隆和测序.利用DNAStar软件包的MegAlign进行核苷酸序列分析,构建系统进化树.结果 分离的EV71病毒株经过扩增后克隆得到3个涵盖EV71全基因组的阳性质粒,测序后拼接为EV71全基因组,命名为BJ08株.BJ08的5'非编码区(UTR)、P1、P2、P3、3'非编码区(UTR)和全基因组的核苷酸与C4亚型的参考序列同源性均最高,分别为95.6%～96.7%、88.3%～96.1%、78.1%～94.0%、90.8%～94.6%、85.9%～94.1%和90.9%～93.9%.BJ08株与其他亚型各区段的核酸同源性均低于90%.在全基因序列与VP1区构建的系统进化树中,BJ08株均与C4亚型在同一分支.BJ08株与C4亚型参考株VP1区的6个亚型相关氨基酸序列一致,VP1抗原性表位(92～107aa)无变异.结论 北京BJ08 EV71病毒分离株为C4业型.     

聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的质量标准和质控方法研究

目的:建立聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的质量标准和质控方法.方法:采用荧光分光光度法测定PEG-rhG-CSF的PEG化率,RP-HPLC方法蒸发光检测器检测游离PEG残留量,胰蛋白酶裂解进行肽图分析,其它指标按照<中国生物制品规程>进行.结果:建立了聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的质控方法和质量标准.结论:建立的方法和质量标准已用于聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子产品的检定.     

RNA干扰研究进展

一种能特异性抑制血管内皮细胞生长的抑制因子－内皮抑素（endostatin)，可以抑制内皮细胞的增殖和迁移，在体内具有良好的抗肿瘤效果。内皮抑素的抗肿瘤效果可能与诱导凋亡，以及与原肌球蛋白，黏附受体整合蛋白以及基质金属蛋白酶等重要因子有关。     

重组人GM-CSF的理化特性及其肽图的研究

rhGM-CSF在经过盐酸胍处理,DTT还原,碘乙酰胺封闭二硫键等各种状态下,分别分析其理化特性,发现经过DTT处理后其在紫外特征光谱和RP-HPLC行为上表现出不均一性,而在SDS-PAGE电泳行为和免疫学特性方面却没有明显差异,盐酸胍对其上述指标的影响是可逆的;经过打开二硫键,封闭巯基后的肽图分析比未经处理的样品溴化氰裂解更完全,蛋白酶消化更彻底。     

长效人红细胞生长刺激蛋白质量控制标准研究

目的：建立长效人红细胞生长刺激蛋白质量控制方法和质量标准。方法：用UT-7细胞依赖株和ELISA测活法测定生物学和免疫学活性，使用高效液相色谱系统分析N-糖链结构、测定纯度，及胰蛋白酶酶切的肽图分析．等电聚焦电泳分析异构体，使用比色法检测唾液酸含量。其余检测项目按2005年版中国药典三部方法进行。结果：建立的方法经过比较和对长效人红细胞生长刺激蛋白的检测，结果稳定可靠，重复性好，各指标符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和2005年版中国药典三部的要求。结论：本研究建立了一套完善的长效人红细胞生长刺激蛋白质量控制体系。     

气相色谱法测定质粒DNA中乙醇和异丙醇残留量

目的:建立测定质粒 DNA 中乙醇和异丙醇残留量的方法。方法:顶空进样气相色谱法。色谱条件:DB-624石英毛细管柱(30 m×0.53 mm×3μm),柱温:60℃,气化室温度:120℃,FID 检测器,温度为300℃;进样分流比:1:50,载气 N_2(3.0mL·min~(-1))。结果:乙醇、异丙醇线性关系良好(相关系数均大于0.9999);最低检测浓度分别为0.00125 mg·mL~(-1)和0.00083 mg·mL~(-1);平均回收率分别为100.1%和100.9%;平均 RSD 分别为3.0%和1.5%。结论:该法简单快速,可用于质粒 DNA 中乙醇和异丙醇残留量的测定。     

液质联用分析重组人白细胞介素-11的肽图

目的用液质联用技术分析鉴定重组人白细胞介素-11(rhIL-11)的肽图。方法用胰蛋白酶酶解rhIL-11，采用HPLC测定肽图，用电喷雾-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF/MS)技术分析肽段的精确相对分子质量，通过串联质谱(MS/MS)测定肽段的氨基酸序列。结果根据肽段的色谱保留时间、相对分子质量及对其碰撞诱导解离质谱的解析结果，归属出肽图中各肽段所在的色谱峰，已检出肽段的总覆盖率为97%。结论液质联用研究肽图是验证和分析蛋白质结构的高效准确的方法。     

重组人干细胞因子生物学活性测定的质量控制研究

目的：建立干细胞因子（stem cell factor,SCF)体外生物学活性测定方法,用于该制品生物学效价测定。方法：应用类原巨核细胞白血病细胞系的UT－7细胞株,比较不同细胞浓度,培养时间等条件下应用MTT染色的效果,确定最佳实验条件,并用国家参考品校正SCF效价,结果：UT－7细胞对SCF的反应存在量－效关系,并确定了最佳测定条件和剂量范围,效价测定重复性好,结果准确,客观,并用于重组SCF新生物制品的效价测定,结论：已建立的UT－7细胞依赖株测定SCF生物学活性的方法可用于SCF的生物学活性的常规评价。     

肠道病毒71型北京分离株全基因组序列分析

目的 了解2008年北京地区肠道病毒71型(EV71)分离株的全基因序列特点.方法 收集北京地区手足口病患儿的咽拭子样本12份,对其中1份样品08YM-3,经Vero细胞分离培养,提取病毒RNA.利用RT-PCR和5'、3'RACE扩增EV71全长基因.对PCR产物克隆和测序.利用DNAStar软件包的MegAlign进行核苷酸序列分析,构建系统进化树.结果 分离的EV71病毒株经过扩增后克隆得到3个涵盖EV71全基因组的阳性质粒,测序后拼接为EV71全基因组,命名为BJ08株.BJ08的5'非编码区(UTR)、P1、P2、P3、3'非编码区(UTR)和全基因组的核苷酸与C4亚型的参考序列同源性均最高,分别为95.6%～96.7%、88.3%～96.1%、78.1%～94.0%、90.8%～94.6%、85.9%～94.1%和90.9%～93.9%.BJ08株与其他亚型各区段的核酸同源性均低于90%.在全基因序列与VP1区构建的系统进化树中,BJ08株均与C4亚型在同一分支.BJ08株与C4亚型参考株VP1区的6个亚型相关氨基酸序列一致,VP1抗原性表位(92～107aa)无变异.结论 北京BJ08 EV71病毒分离株为C4业型.     

黄芪和红芪的免疫药理研究进展

黄芪是中医最常用补益药之一。常用黄芪为豆科黄芪属植物膜荚黄芪〔Astragalus membra-nceus(Fisch)Bge〕,红芪(Radix Hedys-ari)又叫多序岩黄芪(Hedysarum PolybatrysHand-Mazz),与黄芪同科异属。中医用药时黄芪、红芪不分,在我国西北地区以红芪代黄芪药用尤为普遍。现代药理研究证明黄芪和红芪对机体免疫系统有广泛的影响。本文仅就近年来关于黄芪、红芪对免疫功能影响的研究,做一概述。一、对单核巨噬细胞功能的影响据报道红芪和黄芪水煎剂不论 ig 或 ip 均能促进小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,但红芪的毒副作用较黄芪为小。从红芪和黄芪中提取的多糖 ip不仅增强正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,而且完全对抗强的松龙的抑制作用,两种多糖的药效无显