髓系抗原在成人急性淋巴细胞白血病中的表达及其意义

目的 探讨髓系分化抗原在急性淋巴细胞白血病（ALL）中的表达及其临床意义。方法 采用碱性磷酸酶－抗碱性磷酸酶法和流式细胞仪检测68例初治成人ALL的免疫表型，并观察髓系抗原不同表达的临床特征。结果 68例ALL中有10例除表达淋系抗原外尚有髓系抗原表达（My^ ALL）（阳性率14.7％）。My^ ALL组皮肤粘膜出血严重、肝脾肿大明显、白细胞总数增高显著，完全缓解（CR）率较My^-ALL低。结论 具有髓系抗原表达的My^ ALL CR率较低，临床出血及白血病负荷较高，具有独特的临床生物学特征。     

幽门螺杆菌根除后血清抗体的变化及意义

目的：旨在研究幽门螺杆菌（Ｈｐ）清除后血清抗体水平下降规律。寻求抗体下降至何种程度可作为反映Ｈｐ根除的可靠指标，以替代侵入性检查。方法：Ｈｐ感染及根除的判断依据组织学、快速尿素酶反应及ＰＣＲ检查结果。ＥＬＩＳＡ法检测血清Ｈｐ抗体。３４例病人采用三联２周抗Ｈｐ疗法，并于治疗结束后１、３、６个月复查。结果：所有Ｈｐ根除的病例ＩｇＧ均下降，１、３、６个月时下降幅度分别为３９．１８％、５２１９％、６２１７％。以３个月时下降４０％为反映Ｈｐ根除的指标，敏感性是７４％，特异性是１００％，准确度７９４％。结论：观测抗Ｈｐ治疗后的血清抗体的变化能简便、准确反映Ｈｐ的根除情况     

甲氧基聚乙二醇衍生物与抗OX40L单抗双诱导移植物免疫耐受

背景:甲氧基聚乙二醇可在淋巴细胞表面形成空间位阻而遮蔽T细胞表面抗原:OX40及其配体OX40L是一对重要的协同刺激信号分子,阻断该信号通路可使T细胞处于无反应性的失能状态,诱导免疫耐受.目的:为获得更为理想的免疫耐受状态,检测甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酸酯(methoxy-polyethyleneglycol-succinimidyl-propionic acid ester,mPEG-SPA)化学修饰联合抗OX40L单抗对移植物T淋巴细胞增殖、表型及分泌细胞因子的影响.设计、时间及地点:对比观察移植物免疫耐受体外实验,于2006-12/2007-06在徐州医学院附属医院血液病研究室完成.材料:清洁级近交系C57BL/6(H-2b)雄性和BALB/c(H-2d)雌性成年小鼠各12只,制备的脾淋巴细胞分别作为反应细胞和刺激细胞.mPEG-SPA为北京凯正公司产品,大鼠抗小鼠OX40L单抗为eBioscicnce公司产品.方法:将反应细胞密度调整为4×109 L-1,分别加入3,6,12,15,18 g/L mPEG-SPA修饰1 h,以加入相同体积的磷酸盐缓冲液作空白对照;另向反应细胞中加入15g/L mPEG-SPA分别修饰1 h,24 h,48 h,96 h,120 h,流式细胞仪检测脾淋巴细胞表面CD3分子的表达.单向混合淋巴细胞培养分4组:细胞对照组,单纯加入刺激细胞 反应细胞:抗OX40L单抗组,向两种细胞中加入10 mg/L抗OX40L单抗:mPEG-SPA组,向两种细胞中加入15 g/L mPEG-SPA;联合组,向两种细胞中加入抗OX40L单抗和mPEG-SPA.主要观察指标:CD3分子的表达水平,其反映mPEG-SPA遮蔽脾淋巴细胞的效果.淋巴细胞增殖情况与表型分析.培养上清细胞因子含量.结果:①不同浓度mPEG-SPA修饰后淋巴细胞表面CD3分子的表达均明显低于空白对照,且15,18 g/L mPEG-SPA降低幅度尤为明显(P<0.05):15g/L mPEG-SPA修饰不同时间后CD3分子的表达无变化(F=1.715,P>0.05).与细胞对照组比较,抗OX40L单抗组、mPEG-SPA组、联合组对淋巴细胞的增殖抑制率均明显升高,联合组抑制效果最强(P<0.01);抗OX40L单抗组、mPEG-SPA组T细胞表型CD4 CD25 ,CD8 CD25 比值无明显变化(P>0.05),联合组明显降低(P<0.05).抗OX40L单抗组、mPEG-SPA组、联合组γ-干扰素含量均明显低于细胞对照组,且联合组降低幅度更为显著(P<0.05);联合组自细胞介素4含量明显高于细胞对照组(P<0.05).结论:甲氧基聚乙二醇衍生物可明显遮蔽淋巴细胞表面抗原,且对抗原的遮蔽作用较持久;其与抗OX40L单抗联合应用能够阻断T细胞激活的抗原和共刺激双信号通路,抑制T细胞的增殖活性,使Th0类细胞向Th2类细胞偏离.     

15例新生儿产伤性锁骨骨折的原因与护理措施

新生儿锁骨骨折是产伤性骨折中最常见的一种,多发生在分娩过程中。2003年1月-2004年12月,我院分娩的5 140例新生儿中发现新生儿锁骨骨折15例。在对新生儿锁骨骨折的原因进行分析后,采取了相应的护理措施,降低了发生率,提高了产科护理质量,现报道如下。临床资料1.一般资料。2003     

15例新生儿产伤性锁骨骨折的原因与护理措施

新生儿锁骨骨折是产伤性骨折中最常见的一种，多发生在分娩过程中。2003年1月-2004年12月，我院分娩的5140例新生儿中发现新生儿锁骨骨折15例。在对新生儿锁骨骨折的原因进行分析后，采取了相应的护理措施，降低了发生率，提高了产科护理质量，现报道如下。     

慢病毒介导RNAi干扰β-catenin对小鼠骨髓间充质干细胞生物学行为的影响

本研究通过构建β-连环蛋白（β-catenin）特异的RNAi慢病毒表达载体,探讨阻断Wnt／β-catenin信号通路对骨髓间充质干细胞（MSC）生物学行为的影响。设计3对针对β-cateninmRNA不同位点的shRNA编码序列,分别连接到慢病毒载体质粒PLB中,构建PLB-β-catenin／shRNAl,PLB-β-catenin／shRNA2和PLB-β-catenin／shR-NA3;将重组质粒与慢病毒包装质粒及包膜蛋白质粒共转染293FT细胞,收获病毒颗粒,浓缩后测定病毒滴度,感染Msc细胞,并应用流式细胞术分选GFP阳性细胞,Westernblot和RT-PCR验证其对细胞内β-catenin基因表达的抑制效果,筛选干扰效率最高质粒;CCK-8法检测细胞增殖,Annexin-V／7-AAD法检测干扰后细胞凋亡情况,细胞划痕实验及Transwell实验检测MSC迁移能力。结果表明：构建的特异性慢病毒siRNA干扰组（PLB-β-catenin／shRNA2）能有效抑制β-catenin的mRNA和蛋白表达,并抑制细胞的增殖;而空载体对照组（PLBgroup）和正常对照组（controlgroup）细胞增殖无明显变化,两组之间无显著的统计学差异（P〉0．05）;流式细胞术检测结果显示,采用血清饥饿法处理后,干扰组细胞的凋亡率明显增加,但两对照组之间无统计学差异（P〉0．05）;细胞划痕和Tran-swell实验显示,干扰组MSC的迁移能力明显降低,对照组细胞迁移能力无明显变化。结论：构建的特异RNAi慢病毒能够有效抑制β-catenin基因的表达,减少细胞内目的基因mRNA和蛋白的水平,从而对MSC细胞的增殖、凋亡和迁移能力产生重要影响。     

AMD3100动员造血干/祖细胞的实验研究

目的观察AMD3100对造血干/祖细胞(HSC/HPC)动员作用。方法 C57BL/6小鼠分为两组:实验组皮下注射AMD3100 5mg/kg;对照组皮下注射等体积的生理盐水。分别于0、0.5、1、2、4、8及12h取血,检测外周血白细胞计数、流式细胞术检测KSL细胞及KL细胞。结果用药30min后,实验组白细胞、KSL细胞及KL细胞明显高于用药前及对照组(P<0.05),2h达到高峰,随后逐渐下降,到24h下降到用药前水平。结论 AMD3100对HSC/HPC有一定的动员作用,动员速度快,作用时间短。     

siRNA特异性抑制HEL细胞evi1基因的实验研究

本研究探讨小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）沉默人红白细胞白血病细胞（HEL）的evi1基因后对细胞evi1基因表达的抑制作用及细胞生物学特征变化及其作用机制。体外合成3条evi1基因特异性的siRNA（siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3）并转染HEL细胞,并设对照。用四甲基偶氮唑蓝法评价细胞增殖抑制情况,半定量逆转录聚合酶链反应（semiquantitative RT-PCR）检测evi1基因mRNA的表达,台盼蓝染色试验测定细胞活性的变化,流式细胞术检测细胞周期变化和凋亡率。结果显示,细胞转染24、48、72小时后,以siRNA-1作用最强,转染后48小时抑制作用最明显。siRNA浓度为120nmol/L时,抑制率达到最大。转染48小时后siRNA-1对HEL细胞的增殖抑制率为（72.22±2.80）%,evi1-mRNA相对表达率为（27.31±1.11）%,HEL细胞活率为（26.05±2.49）%,与其他各组相比有显著性差异（p〈0.001）。siRNA可使细胞周期阻滞在G0/G1期,S期细胞明显减少,凋亡率明显增高（p〈0.01）。结论：evi1基因特异性siRNA可抑制HEL细胞增殖,使evi1-mRNA表达水平降低,细胞活性下降,HEL细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制细胞的有丝分裂,促进细胞凋亡。     

硼替佐米对小鼠急性移植物抗宿主病作用及其机制研究

目的 探讨硼替佐米(Bortezomib)对小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)的预防作用及其机制.方法 建立小鼠aGVHD动物模型,将小鼠随机分3组,A:移植对照组;B:移植+早期输注硼替佐米组;C:移植+延期输注硼替佐米组.比较各组受鼠aGVHD临床及病理改变、生存率,流式细胞术检测移植后供鼠来源细胞(H-2b+)率.体外建立单向混合淋巴细胞培养(MLC)体系,植物血凝素刺激后,分别用0、2、4、8 nmol/L的硼替佐米作用于反应体系,在不同的时间点收集细胞,采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测培养上清IL-2、IFN-γ、TNF-α含量.结果 移植对照组小鼠出现典型的aGVHD症状,3周内死于aGVHD,平均存活时间为16.1 d,移植加早期输注硼替佐米组小鼠aGVHD症状明显减轻,平均生存时间较移植对照组显著延长,60 d时生存率为70%,高于其他组(P<0.05),60 d时H-2b+细胞的百分率为(98.1±1.1)%.移植加延期输注硼替佐米组小鼠aGVHD症状明显较移植对照组加重,平均存活时间较A组缩短.硼替佐米对MLC体系细胞活性的抑制作用表现为剂量依赖关系,8 nmol/L硼替佐米作用24 h后细胞活性抑制率为(41.4±6.0)%;硼替佐米作用于细胞后12、24、36 h的凋亡率逐渐增加,8 nmol/L硼替佐米作用36 h后细胞凋亡率为(62.8±7.0)%;硼替佐米作用24 h后上清液中IL-2、IFN-γ、TNF-α浓度减少.结论 移植后早期输注硼替佐米可显著减轻小鼠异基因移植后的aGVHD、提高生存率,同时不影响骨髓植入;而移植后延期给予硼替佐米则加重aGVHD,导致受鼠死亡率增加.其机制可能是通过抑制淋巴细胞活性,诱导淋巴细胞凋亡,抑制同种反应性细胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α.     

通过引物设计和提高退火温度提高实时定量PCR检测microRNA的特异性

目的：了解因某些microRNA (miRNA) 家族成员序列相似,以及同一种成熟miRNA的长度不均一对PCR定量检测结果的影响,寻找区分相似miRNA成员和准确定量的方法和条件。方法: 采用RNA加尾和引物延伸实时定量RT-PCR法,设计不同位置错配的引物,以克隆到质粒中的全长成熟miRNA为模板,比较在不同退火温度下各种错配引物与完全匹配引物在扩增miRNA上的效率差异,并根据由此得出的经验设计let-7家族成员引物,以克隆的成熟miRNA为模板,检测其在不同退火温度下区分相似家族成员的能力。此外,设计了10组3′末端碱基位置不同的特异引物,比较了它们在检测小鼠大脑miRNA表达水平上的差异。结果：提高退火温度12 ℃~14 ℃将最大限度增加特异性而不降低敏感性,将引物的3′ 末端置于差异碱基或其附近可以有效区分相似miRNA序列,将引物3′ 末端置于miRNA第18~20个碱基,可避免漏检较短的成熟miRNA,使定量更真实准确。结论：精心设计引物并提高退火温度可提高实时定量PCR检测microRNA的特异性和准确性。