应用多重连接探针扩增技术快速高通量检测染色体非整倍体

目的评价多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)在染色体非整倍体诊断中的应用价值。方法应用MLPA技术检测了150例羊水标本、50例外周血标本,所有标本均进行常规染色体核型分析,应用Cof-falyser9.0MLPA-DATA数据分析软件获得MLPA结果,比对MLPA和染色体核型分析结果的准确性,评价两种技术的符合率,总结MLPA技术临床应用过程中的关键要点。结果MLPA扩增后探针信号强度与质控相比比率大于1.3判定为重复,小于0.7判定为缺失。150例羊水标本,MLPA显示非整倍体染色体数目异常14例,与羊水染色体培养核型分析结果相同;50例外周血标本,MLPA异常21例,与培养结果符合率100%。DNA质量和浓度是实验成败的关键,Coffalyser9.0MLPA-DATA数据分析软件可以实现MLPA数据处理通量化。结论MLPA技术用于普通的染色体非整倍体数目检测快速、特异、敏感,弥补了常规染色体培养周期长等缺点,对于大量的产前诊断羊水标本,可以实现高通量检测,具较高的临床应用价值。     

利用戊型肝炎病毒开放读码框架2截短多肽降低抗戊型肝炎病毒IgM检测中的假阳性

目的 研究用戊型肝炎病毒4型(HEV4-)开放读码框架(ORF)2主要免疫表位截短多肽排除抗-HEV IgM检测中发生假阳性的可行性.方法 用重组HEV-4 ORF2蛋白主要抗原决定簇多肽(459～607位氨基酸)及其截短多肽(472～607位氨基酸)为抗原分别包被ELISA板,用间接ELISA法分别检测35份HEV RNA阳性患者血清、69份健康人血清和117份可疑阳性血清标本的抗-HEV ISM,并用免疫印迹法(Western blot,WB)确认,逆转录(RT)-PCR检测HEV RNA加以比较.结果 WB检测结果显示,戊型病毒性肝炎患者血清中抗-HEV ISM仅与459～607多肽二聚体反应,而不与其单体及472～607多肽反应.间接ELISA法检测35份HEV RNA阳性患者血清抗-HEV IgM均能与459～607多肽反应,而不与472～607多肽反应;69名健康人血清与2种多肽都不反应.117份可疑阳性血清中,5份能同时与2种多肽反应,但450 nm吸光度(A450)值之差小于0.5.WB检测这5份血清抗-HEV IgM均阴性;RT-PCR检测HEV RNA为阴性,说明这5份血清为非特异性吸附引起的假阳性.结论 ORF2 459～607多肽可有效检测抗-HEV ISM,根据血清与2种多肽反应的A450差异,能有效排除因非特异性吸附导致的抗-HEV IgM假阳性.     

噬菌体法直接检测痰标本中结核分枝杆菌利福平耐药性的研究

目的 应用噬菌体生物扩增(PhaB)法直接检测痰标本中结核分枝杆菌(MTB)利福平(RFP)耐药性,探讨其在临床MTB耐药性测定中的应用价值.方法 应用PhaB法检测临床40例痰标本中MTB对利福平(RFP)的耐药性,并与绝对浓度法检测结果 进行比较.结果 加例痰标本PhaB法与绝对浓度法RFP耐药性检测均阳性25例,均阴性7例,两法不相符8例.以绝对浓度法检测结果 为判断标准,则PhaB法RFP耐药性检测的敏感性、特异性、准确性分别是78.13%、87.50%、80.00%.结论 PhaB法检测痰标本中结核分枝杆菌(MTB)对RFP的耐药性具有较高的敏感性和特异性,只需要3天时间,简便快速,不需要特殊仪器设备,费用低廉,可作为MTB耐药性检测的快速筛选方法 .     

塞来昔布对胶质瘤U251细胞株放射敏感性的影响

目的:探讨环氧化酶-2抑制剂塞来昔布(celecoxib)对胶质瘤放射治疗的增敏作用及可能的作用机制.方法:体外培养胶质瘤U251细胞株并将其分为5组,分别加入不同浓度的塞来昔布,并采用60Go照射,噻唑蓝检测细胞的抑制率,免疫组织化学法测细胞表皮生长因子受体(EGFR)的表达.RT-PCR检测毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白(ATM)的表达变化.结果:随着塞来昔布浓度的增加,细胞生长的抑制率明显上升,肿瘤细胞中ATM和EGFR蛋白的表达明显减弱.结论:塞来昔布能够通过降低ATM和EGFR蛋白的表达,增强胶质瘤的放疗敏感性,对胶质瘤的治疗具有重要意义.     

胃浆肌瓣覆盖式食管胃吻合术在贲门失弛缓症手术中的应用

目的:探讨胃浆肌瓣覆盖式食管胃吻合术在贲门失弛缓症的治疗意义。方法:采用食管部分切除、胃浆肌瓣覆盖式食管胃吻合术治疗贲门失弛缓症88例,观察术后反流及吻合口情况。结果:术后半年内42例行头低脚高位食管钡餐检查,吻合口为2.0～2.2cm者6例,1.5～2.0cm者32例,1.0～1.5cm者4例,未见反流现象。术后0.5～3年行食管镜检查和活检36例中仅3例轻度黏膜充血水肿,食管黏膜正常者33例。未发生吻合口瘘。结论:此方法有实用价值,易于推广。     

肝癌MHCC97H细胞肝细胞生长因子(HGF)/c-Met通路激活对血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究肝癌MHCC97H细胞中肝细胞生长因子(HGF)诱导血管内皮生长因子(VEGF)表达过程中的转录因子Sp1的活性.方法:将MHCC97H细胞分为对照组、HGF组、光辉霉素组,分别用RT-PCR及Western blot分析与VEGF mRNA、蛋白质表达及Sp1水平、磷酸化Sp1水平变化以及应用Sp1阻断剂光辉霉素后上述目标蛋白的变化情况.结果:外源性HGF 60 ngmL-1孵育15 min、16 h后分别可以使MHCC97H细胞的VEGF mRNA及其蛋白质的表达明显提高(P<0.01).这一过程中Sp1水平无明显变化(P>0.05).进一步分析发现磷酸化Sp1水平明显升高(P<0.01).用Sp1抑制剂光辉霉素预先处理MHCC97H细胞1 h后,再加入HGF 60 ngmL-1VEGFmRNA及其随后蛋白质表达均受到抑制(P<0.01).结论:HGF诱导MHCC97H肝癌细胞VEGF表达是通过增强Sp1磷酸化实现的.     

内镜黏膜下层剥离术治疗早期胃癌患者的护理

报道了11例早期胃癌患者行内镜黏膜下层剥离术治疗的护理.术前做好心理护理,充分做好物品准备;术中与操作者默契配合,根据手术过程准确递送器械,根据病变部位调节针形刀、钩刀及IT刀的刀芯伸出长度2～3 mm,严密观察患者的面色,监护心率、血压等生命体征和血氧饱和度的变化,操作过程中及时吸引,避免胃液反流至气道,保持呼吸道通畅;术后严密观察腹部体征、腹痛症状,及时处理术后腹痛及消化道迟发出血等并发症.做好饮食管理和正确的健康指导.本组患者均安全、成功完成手术.术后随访,2个月后创面基本愈合,最长随访2年,无1例出现病变残留及复发.     

腺病毒介导入血管内皮生长因子_(165)基因转染促进人骨髓间充质干细胞的成骨特点

目的:课题组以前的实验证实,人血管内皮生长因子_(165)基因重组腺病毒可高效感染人骨髓间充质干细胞,使之大量表达人血管内皮生长因子_(165)促进局部新生血管生成,有利于组织修复。实验观察腺病毒介导入血管内皮生长因子_(165)基因转染对人骨髓间充质干细胞成骨能力的影响。方法:实验于2005-03/2006-01在郧阳医学院附属人民医院临床研究所和创伤骨科完成。人骨髓间充质干细胞取自健康成年男性自愿者.得到医院伦理道德委员会批准.将人骨髓间充质干细胞体外扩增纯化后随机分为4组:①人血管内皮生长因子基因重组腺病毒组。②β-半乳糖酐酶基因重组腺病毒组。③阳性对照组:培养液中添加地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠。④空白对照组:不给予特殊处理。各组细胞处理后12 d,应用全自动生化分析仪检测各组培养上液碱性磷酸酶活性;于处理后14 d.应用Von Kossa染色法检测人骨髓间充质干细胞中骨胶原结节形成情况。结果:①经多次换液传代,人骨髓间充质干细胞呈均一梭形形态、处理后人血管内皮生长因子基因重组腺病毒组与阳性对照组细胞形态逐渐趋于扁平.突起减少;β-半乳糖酐酶基因重组腺病毒组和空白对照组形态无明显变化。②Von Kossa染色人血管内皮生长因子基因重组腺病毒组与阳性对照组可见大量红色骨胶原结节形成,明显多于β-半乳糖酐酶基因重组腺病毒组和空白对照组,③人血管内皮生长因子基因重组腺病毒组与阳性对照组培养上清碱性磷酸酶活性显著高于β-半乳糖酐酶基因重组腺病毒组和空白对照组(F=165.18,P=0.00)。结论:人血管内皮生长因子_(165)基因重组腺病毒基因转染对人骨髓间充质干细胞成骨能力具有促进作用,验证了转染人血管内皮生长因子_(165)的人骨髓间充质干细胞移植治疗骨疾病的可行性。     

生物气溶胶粒径分布及稳定性研究

目的研究生物气溶胶粒径分布、稳定性及其与浮游菌的相关性。方法采用仪器法采样和测定方法,对实验室发生的气溶胶颗粒大小分布及空气中浮游菌颗粒进行了分析。结果用CN61气溶胶发生器制备的白色葡萄球菌气溶胶颗粒直径多数在2.0μm以下,在发生后1 h内,总粒子稳定性良好,不同粒径粒子的自然消亡率随粒径增加而明显增加。在1 h内,粒径在1.0～2.0μm的颗粒衰减率≤27.7%,粒径在5.0μm以上颗粒的衰减率≥73.7%。用六级安德森采样器进行采样3,、4、5级对空气中细菌颗粒捕获率各为20%左右,1、2、6级捕获率约占10%左右。在气溶胶发生后1 h内,空气中浮游菌自然消亡率平均值为8.3%,与2.0μm以上粒子的降解较为一致。结论物理粒子计数与浮游菌数两者之间,呈现较高的一致性,CN61气溶胶发生器制备的气溶胶粒径分布与稳定性符合消毒学研究的要求。     

都江堰友爱学校地震伤员康复状况调查分析

目的分析全国首家无障碍学校——四川省都江堰友爱学校地震伤员的伤情、功能障碍、康复现状及需求,为下一步康复医疗提供依据。方法对105例在校伤员进行现场功能评估,采用截肢身体意象评估量表(AB IS),对40名截肢伤员进行问卷调查。结果 105例伤员中,骨折44例(41.9%)、截肢40例(39%)、挤压伤15例(14.2%)、脑外伤6例(5.7%);大都存在的不同程度、多种功能障碍问题,其中肌力减退62例(59.1%),肌肉萎缩32例(30.2%),关节活动度(ROM)受限49例(46.7%),瘢痕粘连增生70例(66.7%),感觉障碍14例(13.3%),关节挛缩32例(30.5%),步态异常23例(21.9%),生活不能完全自理26例(24.8%)。结论 105例伤员均有不同程度的康复需求,需要进一步的康复指导与治疗;伤员的心理状况也需要关注。