CCLG-ALL 08方案治疗儿童急性淋巴细胞白血病毒副作用的临床研究

目的 2008年中国小儿血液病协作组制定了儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)诊疗建议CCLG-ALL 08方案,本研究旨在评估08方案治疗儿童ALL的相关毒副作用。方法 114例新诊断的ALL患儿采用CCLG-ALL 08方案诊治,分为诱导缓解(VDLD)、早期强化(CAM)、巩固治疗、延迟强化(DIa & DIb)和维持治疗5部分,采用CTCAE v4.0评估药物相关毒副作用。结果 毒副作用主要见于VDLD方案,以肝功能损害(87.7%)、口腔溃疡(20.2%)、高血糖(20.2%)、活化部分凝血酶时间延长(21.1%)、纤维蛋白原降低(34.2%)为主,其重度损害的发生率分别为7%、0、1.3%、0.8%、2.7%。L-ASP过敏发生率在延迟强化DIa方案(28.0%)显著高于VDLD方案(7.9%),其中15例换用培门冬酶后未再发生过敏反应。无严重心律失常、心肌缺血及左心功能降低;无骨坏死和肌病发生;无脏器功能衰竭发生;无治疗相关死亡发生。结论 CCLG-ALL 08方案药物相关毒副作用常见于VDLD方案,毒副作用轻微且可逆,无治疗相关死亡发生,提示此方案治疗儿童ALL是安全的。     

Survivin反义寡核苷酸对k562细胞周期及c-myc的影响

目的 探讨凋亡抑制基因survivin的反义寡核苷酸对白血病细胞k562细胞周期及c-myc的影响。方法 实验分反义组、无义组、脂质体组、空白组，转染后24、48小时流式细胞仪检测细胞周期；免疫组织化学方法检测survivin、c-myc蛋白水平。结果 反义寡核苷酸作用后，k562细胞被阻滞在G0／G1期，G0／G1期细胞明显增多，S期及G1／M期细胞明显减少，细胞周期进程受到明显阻滞，而无义组、脂质体组、空白组细胞周期进程无明显变化（P〈0．05）；反义寡核苷酸作用24小时后细胞内survivin及c-myc的表达水平下降，但与无义组、脂质体组、空白组比较无显著性差异（P〉0．05），而48小时后survivin及c-myc表达水平进一步降低，与各对照组比较有显著性差异（P〈0.05）。结论 survivin反义寡核苷酸能阻滞K562细胞于G0／G1期、并下调c-myc蛋白的表达。     

持续性和慢性免疫性血小板减少症的临床研究

目的探讨持续性免疫性血小板减少症(persistent ITP,pITP)和慢性免疫性血小板减少症(chronic ITP,cITP)患儿临床特征和疗效。方法对2002年12月-2009年12月间于我院诊断和治疗的pITP和cITP患儿103例的临床资料进行回顾性分析。结果 (1)103例患儿中96.1%年龄分布在学龄前期及以后;男女性别比例为1.24∶1。(2)73.8%有诱因,其中上呼吸道感染占89.5%;患儿病原血清学IgM阳性率为45.0%,混合感染率为36.1%。(3)有黏膜出血者占61.2%,失血性贫血者占25.2%,以轻度贫血为主。就诊时血小板计数<25×109/L者占71.9%。黏膜出血组与非黏膜出血组的血小板计数比较差异无显著性;而血小板减少与贫血程度间比较差异亦无显著性(P>0.05)。(4)遵医嘱维持用药治疗者占59.2%,该组患儿黏膜出血的发生率(55.7%)低于维持间断治疗组(69.0%);而维持用药组患儿失血性贫血发生率(8.2%)显著低于间断治疗组(50.0%),差异有极显著性(χ2=23.034,P<0.001)。(5)单用激素组(79.7%)、激素+IVIG(静脉注射用人免疫球蛋白)组(78.6%)治疗有效率高于激素+VCR(长春新碱)组(40.0%);激素+IVIG与激素+VCR组间疗效差异有显著性(χ2=4.441,P=0.035);单用激素组与激素+VCR组间疗效差异有显著性(χ2=9.772,P=0.002)。结论 (1)pITP和cITP患儿主要见于学龄前期及学龄期儿童,性别差异不明显。(2)上呼吸道感染是儿童pITP和cITP发生的主要诱因,病毒感染在ITP病情反复中起着一定的作用。(3)pITP和cITP患儿出血程度较轻,血小板减少以重型、极重型居多;而出血表现、贫血程度与血小板减少间无相关性。(4)维持用药可减轻pITP和cITP患儿出血症状,降低失血性贫血发生率。(5)单用激素组、激素+IVIG组的治疗有效率显著高于激素+VCR组。     

K562细胞survivin基因表达对淋巴细胞增殖和功能的影响

目的探讨K562细胞中survivin基因的表达对淋巴细胞增殖和功能的影响。方法将融合重组质粒pEGFP-C1-survivin和靶向survivin基因的RNAi的重组质粒pTZU6^＋1-survivin分别转染K562细胞,得到K562/survivin^＋和K562/survivin^-2种细胞,用G418筛选K562/survivin^＋细胞,用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法及免疫细胞化学法检测K562/survivin^＋和K562/survivin^-2种细胞中survivinmRNA及蛋白水平的表达,并与K562细胞作对照。将这3种细胞与健康人外周血单个核细胞（PBMC）混合培养（MLTC）,检测混合培养体系中淋巴细胞增殖能力、NK细胞活性及培养上清中IFN-γ水平。结果K562/survivin^＋组的淋巴细胞增殖指数明显低于其余两组。survivin基因的表达水平与NK细胞活性呈负相关。混合培养上清中分泌的IFN-γ,K562/survivin＋组是K562组的1/4.5,是K562/survivin^-组的1/8。结论高表达的survivin可以抑制淋巴细胞的增殖、NK细胞活性及IFN-γ的分泌。     

克隆造血在再生障碍性贫血与低增生骨髓增生异常综合征鉴别中的意义

再生障碍性贫血( aplastic anemia,AA) 患者中诊断骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)通常是一个难题,MDS 的诊断是基于骨髓形态发育异常的病态造血,但约 10%的 MDS 患者也存在少骨髓细胞,被称为 低 增 生 骨 髓 增 生 异 常 综 合 征 ( hypoplastic-MDS,h-MDS),儿童最常见的是难治性血细胞减少(refractory cytopenia,RCC)。 AA 患者存在克隆造血(clonal hematopoiesis,CH) ,1 / 3 存在 MDS 相关基因突变,部分患者经免疫抑制治疗( immunosuppresssive therapy, IST) 后会进展为阵 发 性 睡 眠 性 血 红 蛋 白 尿 ( paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH) 和急性髓系白血病( acute myeloid lerkemia,AML) / MDS。 虽然部分 h-MDS 患者对 IST 有效,但如何能在早期识别出 AA 患者中的 h-MDS 是有必要的。 基于形态学的结果,加入细胞遗传学、分子生物学等检测如核型分析、荧光原位杂交技术( fluorescence in situ hybridization, FISH )、 单 核 苷 酸 多 态 性 ( single nucleotide polymorphism,SNP)、下一代测序(next generation sequencing,NGS)等技术或许可以从 AA 中更容易诊断出h-MDS。