东莨菪碱透皮控释膜剂的研究

本文研制了东莨菪碱透皮控释膜剂。采用自行设计的体外扩散装置,分别研究了药库、含药压敏胶和复合膜等各层次及控释膜剂的体外释药速率,该制剂在最初4h释放初始剂量约200μg。达到稳态释放阶段后(4～72h),由控释膜控制其释药速率为2.8μg/cm~2·h。用大鼠离体皮肤研究渗透速率,药物以零级速率经皮渗透,0～12h内渗透速率为3.52μg/cm~2·h。     

HPLC法测定牛奶中磺胺二甲基嘧啶残留量

磺胺二甲基嘧啶（sulfamethazine,SM2）为兽医常用的磺胺类药,但磺胺类药物在体内半衰期较长,通过任何途径摄入的磺胺都有可能在体内蓄积,当蓄积超过一定浓度时将对人体机能产生损害。因此许多国家对动物使用磺胺类药物和其在动物源性食品中的残留进行了严格的监控。有规定牛奶中SM2最高残留限量（MRLs）不能超过25μg/kg。测定牛奶中SM2残留量的方法有微生物学法、酶联免疫法、薄层色谱法、分光光度法和毛细管电泳法等。     

一氧化氮调控剂ZX-5对血管内皮细胞eNOS和ERK蛋白表达的影响

目的：研究新型一氧化氮调控剂ZX-5作用后血管内皮细胞eNOS和ERK蛋白的表达,初步阐明ZX-5的作用机理。方法：用Westernblotting测定ZX-5作用后血管内皮细胞eNOS和ERK蛋白的表达。结果：ZX-5能够增加eNOS的表达量,高剂量ZX-5可以增加ERK蛋白表达。结论：ZX-5可能通过ERK途径增加eNOS的表达（eNOS是ZX-5作用的靶点之一）,具有开发成药物的潜力。     

用pIII及pVIII噬菌体展示系统展示抗原和抗原表位的免疫原性的研究

目的:探索用pIII和pVIII噬菌体展示系统展示抗原和抗原表位的免疫源性以及用噬菌体展示颗粒为免疫原制备抗体的可能性.方法:从人心肌组织中获得cTnI基因,突变后克隆入pMDT-18载体及pFD5 pIII型噬菌体展示载体.合成两条互补寡聚核苷酸单链,退火后变成编码cTnI 95～108位氨基酸的双链,与 PC89 pVIII型噬菌体展示载体连接.含有cTnI及其抗原表位基因的重组质粒转化辅助噬菌体敏感的XL1-Blue细胞,用VCSM13超感染获得展示有cTnI及其抗原表位的噬菌体颗粒,测定其表达量.并以此为免疫源免疫新西兰白兔获得抗体,用ELISA方法测定抗体滴度.结果:cTnI及其抗原表位在噬菌体颗粒表面得到成功展示,展示量分别为5 ng/ml和96 ng/ml.免疫后得到的抗体滴度为1∶300和1∶1?800.结论:制备具有一定空间结构的大分子蛋白的抗体时,可用pIII噬菌体展示系统,制备小分子肽线性表位的抗体时,pVIII展示系统具有独特的优势.     

重组人瑞替普酶基因在山羊胎儿成纤维细胞β-酪蛋白基因座的定点整合

目的 :利用体细胞基因打靶技术来获得定点整合有重组人瑞替普酶 (rPA)的山羊胎儿成纤维细胞株。方法 :构建了针对山羊 β- 酪蛋白基因座的定点打靶载体 ,其上游同源臂为 β 酪蛋白启动子端同时包含其信号肽编码区长约 6 .1kb的基因组片段 ,下游同源臂为 3.3kb从 β- 酪蛋白外显子 6至外显子 9的基因组片段。rPA小基因起始密码子位于 β- 酪蛋白信号肽编码区下游。将载体瞬时转染C12 7小鼠乳腺癌细胞 ,并通过激素进行诱导 ,酶联免疫吸附分析 (ELISA)检测细胞培养上清中的rPA表达量来验证载体表达功能。将载体通过电穿孔的方法转染同基因型的山羊胎儿成纤维细胞。利用G4 18和GANC进行药物筛选 ,并通过PCR和southern杂交的方法进行基因组DNA检测。结果 :获得了一株定点整合的细胞克隆 ,绝对基因打靶效率为 2× 10 7。结论 :本实验结果为后续利用核移植技术制备乳腺生物反应器提供了坚实的实验基础。     

重组人干扰素α2b表达与分离纯化研究

目的从湿菌体中分离纯化重组人干扰素α2b。方法采用(NH4)2SO4盐析-H3PO4处理-CM32离子交换层析-DE52离子交换层析-SephadexG100凝胶层析等非亲和层析纯化方法。结果回收率约为30%,HPLC检验纯度达96%,每毫克蛋白比活力达1.66×108IU。结论分离纯化系统令人满意,回收率较高。     

聚乙二醇修饰干扰素α2b的分离纯化和制备

目的建立聚乙二醇修饰干扰素α2b的分离纯化方法.方法运用Superdex75Highload制备型凝胶色谱柱,以含0.15mol/LNaCl的0.01mol/L磷酸盐缓冲液进行洗脱,流速为1.5ml/min,检测波长为215nm.结果各洗脱组分经SDS-PAGE检测呈单一条带.聚乙二醇修饰干扰素α2b的蛋白回收率为36.5%,抗病毒活性回收率为4.3%,比活度为4.74×10\\+7IU/mg,是原形干扰素α2b的10.4%.结论这种方法可以用于制备聚乙二醇修饰干扰素α2b.     

避孕乳膏的制备及透皮吸收研究

为了避免口服避孕对胃肠道刺激性,本文设计制备了避孕乳膏,试图使药物经皮吸收进入体内发挥其避孕作用。通过物理稳定性试验筛选了避孕乳膏基质。用同位素示踪技术和体外流通扩散室研究了炔雌醇和十八甲基炔诺酮的化学结构类似物~3H-雌二醇和~3H-孕酮从避孕乳膏中释药透皮百分率及小鼠体内透皮吸收过程。体外试验结果表明:不同乳膏处方内标记药物的释药透皮百分率不同,水包油型基质释药透皮速度较有规律。处方3,7在8h内分别可释药52%和41.6%。体内试验结果表明:避孕乳膏中药物透皮吸收速度比口服快,透皮吸收峰时为1h,口服吸收峰时为2h。由于小鼠给药时涂布面积较小,透皮吸收程度较差。避孕乳膏对动物皮肤无刺激性。     

蛇毒纤溶酶的体内过程及药物代谢动力学研究

以125I-蛇毒纤溶酶作示踪剂对蛇毒纤溶酶的体内过程及药代动力学进行了研究。实验结果表明,静脉注射后,大鼠体内血药浓度时程曲线为二房室模型,T1/2β分别为6.1h(低剂量),6.3h(中剂量)和5.6h(高剂量)。小鼠尾静脉注射后3h,各脏器中放射性活性达到峰值,其值(%)大小顺序如下:肾(1.34)>肺((1.09)>肝(0.90)=脾(0.90)>心(0.51)>肌肉(0.45)>脑(0.29)。125I-蛇毒纤溶酶主要从尿排泄,静脉注射后,72h内尿排泄率达85.6%,而粪排泄仅为5.4%,胆汁排泄率为12%。     

噬菌体展示载体的构建

目的 构建适宜噬菌体展示的载体系统。方法 利用pCOMB3的LacZ强启动子，Pelb引导序列，包膜蛋白Ⅲ基因，用NHeI-XbaI双酶切，切除一个克隆位点；同时设计一对引物，用PET-28（a)^ 作模板扩增550bp片段，插入XhoI-SpeI位点之间，扩增质粒后用限制性内切酶，PCR，DNA测序等方法作鉴定。结果 切除了272bpNHeI-XbaI片段。插入片段后酶切鉴定显示：XhoI,SpeI单酶切，XbaI,NheI无酶切；所构质粒用XhoI SpeI双酶切及PCR扩增均可见550bp片段；测序结果正确。结论 成功构建了一种高拷贝，稳定，多用途，易于操作的噬菌体展示载体。