镇关灵治疗类风湿性关节炎的药效学研究

目的　探索镇关灵治疗类风湿性关节炎 (rheumatoidarthritis ,RA)的作用。方法　以佐剂性关节炎 (AA)、蛋清性关节炎、角叉菜胶性关节炎为实验病理目标 ,建立二硝基氟苯所致小鼠迟发型超敏反应 (DTH)、棉球肉芽肿及醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高和扭体反应等病理模型。结果　镇关灵能显著抑制大鼠佐剂性关节炎、蛋清性关节炎、角叉菜胶所致炎症的足跖肿胀度和棉球肉芽肿 ,抑制由醋酸引起的小鼠扭体反应和腹腔毛细血管通透性增高 ,并可抑制DTH。结论　镇关灵具有良好的抗炎镇痛免疫抑制作用 ,对类风湿性关节炎具有明显的预防和治疗作用。     

大鼠促黄体素基因β亚基的克隆和在COS细胞中的表达

从摘除卵巢的雌性大鼠脑垂体中提取总RNA，利用RT-PCR技术扩增了促黄体素（LH）的亚基基因。序列分析表明该基因序列与国外报道的促黄体素（LH）的亚基基因序列安全相同。将该基因片段插入到真核表达载体pcDNA3.1(-)上，构建表达质粒pcDNA3.1(-)/LH，利用脂质体包裹技术转染COS细胞，放免检测结果显示LH的表达量达6.2miu/ml。     

小鼠bcl10基因敲除载体的构建

根据已知的cDNA序列设计引物，通过RT-PCR获得小鼠bcl10基因cDNA片段作为探针，用噬斑原位杂交法克隆129品系小鼠的bcl10基因组DNA，在亚克隆完成序列结构分析的基础上，利用常规分子克隆技术，构建完成了针对bcl10基因的替代型基因敲除载体。两条同源臂分别为bcl10基因exon3上游2.4kb和exon4下游4.5kb的基因片段。构建完成替代型小鼠bcl10基因敲除载体，为后续获得bcl10基因缺陷型胚胎干细胞系奠定了实验基础。     

1,6-二磷酸果糖镁在大鼠体内的药动学研究

目的研究大鼠静脉注射不同剂量 1,6 二磷酸果糖镁 (FDP Mg)后的药动学。方法大鼠 2 0只随机分成 2组 ,分别静脉注射FDP Mg 10 0、2 0 0mg/kg ,在设定的时间点采血 ,测定血清中的FDP及Mg2 + 浓度 ,DAS程序计算药动学参数。结果大鼠静脉注射FDP Mg后 ,Mg2 + 血药浓度 时间曲线符合二室开放模型。其t1/2α为 0 .12～ 0 .14h ,t1/2 β为 1.78～ 1.89h ,分布容积 (V)为 3.2 6～ 4 .5 7L/kg ,显示非剂量依赖性特征。FDP在血清中代谢迅速 ,消除半衰期t1/2el为 0 .0 5 7～ 0 .0 86h ,平均滞留时间 (MRT)为 0 .0 90～ 0 .12 4h ,血浆清除率 (Cl)为 3.4 8～ 3.77L/ (kg·h)。结论FDP和Mg2 + 的药动学特征差异明显 ,表明FDP Mg在体内解离成FDP和Mg2 + 两部分后按照各自的代谢特征从体内消除。     

毛蚶多糖的分离纯化和免疫活性测定

目的从毛蚶体内分离纯化得到毛蚶多糖精品（polysaccharide from Arca subcrenata Lischke．简称ASLP），分析其纯度和单糖组成，同时考察免疫活性。方法经除蛋白、DEAE-52和Sephadex-GS0柱层析得多糖精品。糖醇乙酸酯法测定单糖组成。体外脾淋巴细胞增殖测定ASLP的免疫活性。结果从毛蚶体内提取到一种均一的多糖组分，其单糖组成只有葡萄糖，ASLP能够显著地促进脾淋巴细胞的增殖。结论从毛蚶中分离纯化得到一种均一的多糖组分，具有显著的体外免疫活性。     

死亡素突变体TH1在裂殖酵母中的分泌表达

通过PCR方法人工合成带有K28信号肽的死亡素突变体基因，构建了重组表达载体pRHZ-41k28Th1，转化到裂殖酵母中进行表达，发酵液中检测到与TH1理论分子量一致的多肽分子，微量稀释法检验表达产物具有抑菌活性，并计算了粗产物对4种供试菌的最低抑菌浓度。     

重组人甲状旁腺素1～34肽的组织分布和排泄研究

研究重组人甲状旁腺素1~34肽(recombinant human parathyroid hormone1~34,rhPTH1~34)在小鼠中的组织分布和在大鼠中的排泄,为国产rhPTH1~34申报临床研究提供实验依据。用Iodogen法将放射性同位素125I标记到rhPTH1~34的酪氨酸残基上,通过同位素示踪和反相高效液相色谱法(RP-HPLC)相结合的方法考察皮下给药后,125I-rhPTH1~34在小鼠中的组织分布和在大鼠中的排泄。大鼠皮下给予125I-rhPTH后,125I-rhPTH主要从尿中排出,48 h内通过尿液排出(80.33±3.92)%的放射性活性,而相同时间内通过胆汁和粪便排出的放射性活性仅为(7.12±1.52)%和(2.55±1.28)%。RP-HPLC分离结果表明在0~2 h,2~4 h和4~8 h收集的尿液中有125I-rhPTH1~34原型存在,其含量分别相当于该时段通过尿排出的放射性活性的33.62%,17.23%和16.05%;在胆汁和粪便中没有检测到125I-rhPTH1~34原型。小鼠皮下注射给予125I-rhPTH1~34后,rhPTH1-34主要分布在肾脏,并在给药后25 min达到峰值,此后随着时间的延长其在肾脏中的相对积累系数不断下降;与肾脏不同,rhPTH1-34分布到其他组织中的速度较慢,在给药后120 min相对积累系数才达到峰值;此时rhPTH1~34在各组织中的相对累积系数的的大小为:肾>胃>脾>肺>肌肉>肠>心>肝>骨>脑。rhPTH1~34主要在肾脏代谢并以原形和代谢物的形式通过尿液排出体外。     

瑞替普酶在大肠杆菌中的表达与活性测定

目的构建带组氨酸标签(His_6·Tag)的瑞替普酶(Reteplase,r-PA)的表达载体,并在大肠杆菌中表达和活性检测。方法通过引物设计在r-PA基因5’端加上组氨酸标签(His_6·Tag)。克隆到pET23a原核表达载体中,转化E．coli BL21 (DE3),进行IPTG诱导表达。表达产物经亲和层析纯化后,用FAPA法测定其纤溶活性。结果构建的原核表达载体经PCR、酶切鉴定、测序后正确。表达产物分子质量39kDa,为r-PA特异性条带,纯化产物具有纤溶活性。结论成功地在大肠杆菌表达了带有标签的r-PA,简化了下游分离纯化和复性步骤。     

老年痴呆症转基因小鼠模型研究进展

老年痴呆（Alzheimer Disease,AD)最明显的两个病理特征是蚀斑（Plaque)和神经纤维团（Neurofibrillary Tangle,NFT)现在发现与AD密切相关的基因有APP,PSI,PSII,apoE等基因,针对这些基因,研制了转基因小鼠,力图模拟临床病理情况,为疾病研究提供有益的模型,文章综述了这些转基因小鼠模型的基因构建及病理特征。     

转基因动物技术与转基因动物制药

转基因动物技术始于上个世纪 80年代 ,2 0多年来 ,转基因动物在制作方法上由最初的显微注射法、逆转录病毒法和胚胎干细胞法 ,发展到体细胞核移植技术、腺病毒载体法、精子头与转移基因共注射法等。随着转基因技术的不断发展 ,利用转基因动物生产药用蛋白质即转基因动物制药的研究也取得了突破性进展 ,目前 ,转基因动物制药正走向产业化的道路 ,具有十分广阔的前景