利用Xcm I构建T载体

目的：构建能自我复制的T载体。方法：设计一对引物，引入Xcm I酶切位点。通过PCR方法用PET－28（a)^ 作模板扩增550bp，插入Pa载体后用限制性内切酶，PCR及DNA测序等方法作鉴定。结果：用Xcm I酶切可见540bp及3810bp双酶切条带，用此载体人模板可扩增出550bp片段，测序结果与预期序列一致。结论:带有两个Xcm I位点的环状载体被成功构建。     

药物透皮吸收率仪的研制

研究药物透皮吸收率常用体外法,其中又以流通扩散室法比较理想。我们研制吸收率仪由下列部分组成:流通扩散室、加热器、恒温控制器、数字温度计、电源电路、恒流高位槽等几部分组成。皮肤样品用脱毛动物皮。为脱毛动物皮置于扩散室内,透内药物制剂敷于皮肤外侧,接收液以一定速率沿皮肤内侧通过扩散室,分时收集接收液,并测出其中药物含量,     

血管内皮靶向性抗肿瘤多肽研究的新思路

概述近年来血管内皮靶向性抗肿瘤多肽研究状况，并提出研究的新思路，即针对两种重要的肿瘤血管内皮特异性分子标记——生长因子和整合索，设计开发作用于肿瘤血管内皮的抗肿瘤多肽，使该类药物研发由大规模筛选走向更具理性和靶向性。     

硫氧还蛋白-(His)6融合的瑞替普酶的表达、纯化和活性检测

目的:构建硫氧还蛋白-(His)6-瑞替普酶融合表达载体,提高瑞替普酶在大肠杆菌中的表达量,简化rPA的分离纯化.方法:将rPA基因克隆于原核表达载体pET32a硫氧还蛋白-(组氨酸)6标签下游,在大肠杆菌BL21(DE3)中用乳糖进行诱导表达.采用一步稀释法对融合蛋白体外复性后,使用Ni2 亲和层析柱,对包涵体复性液进行初步纯化.采用体外溶圈法对复性后和纯化后的融合蛋白进行生物活性的测定.结果:得到分子量约为56 kDa的融合蛋白,表达量达到总蛋白的30%以上.比本实验室构建的非融合表达载体表达量提高了约50%.经过一步Ni2 亲和层析,融合蛋白纯度达到80%以上.体外溶圈法实验表明融合蛋白复性后和纯化后具有溶栓活性.结论:与非融合表达相比,融合表达的表达量明显提高.即使N端额外融合一段融合多肽,rPA仍然具有生物学活性.     

RP-HPLC测定大鼠N,N-双乙酰胱氨酸的血药浓度

目的:建立一种RP-HPLC测定大鼠血浆中N,N-双乙酰胱氨酸的浓度。方法:血浆样品经10%高氯酸沉淀蛋白后,上清液直接进样分析。色谱柱为LichrospherC18柱(5μm,150mm×4.5mm,ID),流动相为0.025mol/L磷酸二氢钾(磷酸调节pH至3.0)甲醇(90∶10,v/v),流速1.0mL/min,柱温25℃,检测波长205nm。对乙酰氨基酚为内标。测定了大鼠静脉注射N,N双乙酰胱氨酸40mg/kg后的血药浓度时间过程。结果:标准曲线线性范围为1.0～600.0μg/mL(r=0.9988),最低检测限为0.2μg/mL,回收率均大于90%,日内、日间精密度RSD均小于15%。结论:此方法快速、可靠,可用于N,N-双乙酰胱氨酸血药浓度分析及药代动力学研究。     

重组人血管内皮生长因子165在Pichia酵母中的表达

目的：采用基因工程方法构建基因工程菌制备人VEGF165蛋白。方法：自人肿瘤组织中获取人VEGF165 cDNA,构建pPIC9K酵母表达载体,采用Pichia酵母真核表达系统表达目的蛋白。结果：SDS-PAGE及Westem-blot结果显示目的蛋白已成功表达。结论：在Pichia酵母中成功表达人VEGF165。     

重组死亡素裂殖酵母工程菌发酵的研究

在裂殖酵母基本培养基的基础上，通过正交设计，优化了培养基6个组分；优化后的培养基，摇瓶发酵，目的蛋白产量在26～51mg／L之间，发酵罐的批次发酵，产量在51～102mg／L之间。     

PMEA-Na在beagle犬血浆中的液相色谱/质谱/质谱联用法测定及其药代动力学

目的建立LC/MS/MS法测定犬血浆中PMEA-Na浓度,进行其药代动力学研究.方法血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,采用多反应监测法测定其血药浓度.色谱柱为Xterra MS柱,流动相为甲醇水甲酸(25750.5),流速为 0.25 ml·min-1.Beagle犬分3个剂量组经静脉给药,给药剂量分别为 1.0、3.0 和 6.0 mg·kg-1.药代动力学参数通过DAS软件计算获得.结果PMEA-Na线性范围0.02～20 mg·L-1 (r=0.999);最低检测浓度为 20 μg·L-1,方法回收率为 97.1%～107.3%,日内日间变异分别小于 6.5%、10.8%.beagle 犬在 1.0, 3.0 与 6.0 mg·kg-1剂量下单次iv PMEA-Na后,测得其AUC分别为 2.3±0.5, 8.2±1.3 and 18.5±1.3 mg·L-1·h; t1/2 为 3.9±1.8, 8.4±1.5 and 8.9±0.6 h; CL为 0.44±0.09, 0.35±0.05 and 0.31±0.03 ml·h-1·kg-1.结论本方法专属性强,准确性好,可用于PMEA-Na血药浓度测定和药代动力学研究.     

溶纤法测定125I标记基因重组葡萄球菌激酶的活性

目的测定125I标记前后的基因重组葡萄球菌激酶(r-Sak)活性.方法采用抑菌圈原理,建立纤维蛋白平板溶纤法.结果在0.625～10 mg·L-1浓度范围线性良好(r=0.997),125I标记后r-Sak为标记前的81.1%.结论该方法简便准确,操作方便.