生脉散的药动学研究

小鼠口服生脉散后,心肌对~(86)Rb摄取显著增加,根据生脉散对~(86)Rb摄入的时效关系和量效关系,求得了药动学参数。消除速率常数K=0.018分~(-1),体内半衰期t_(1/2)=38分,吸收峰时间约在50～60分钟。     

NO释放调控剂(S,S)ZX-5对eNOS mRNA转录与eNOS蛋白表达的影响

目的考察(S,S)ZX-5对eNOS mRNA转录与eNOS蛋白表达的影响,从分子水平探讨(S,S)ZX-5促进一氧化氮(NO)释放的作用机制。方法用不同浓度的新型化合物(S,S)ZX-5刺激ECV30424h,采用RT-PCR半定量方法研究(S,S)ZX-5对ECV304eNOS的mRNA转录水平的影响;用Westernblot方法研究(S,S)ZX-5对ECV304eNOS蛋白的表达量变化影响。结果30mg.L-1(S,S)ZX-5使ECV304的eNOS mRNA转录量增加119%、使eNOS蛋白表达量增加62%;30mg.L-1(R,R)ZX-5的上述作用不显著。结论(S,S)ZX-5促进ECV304NO释放的作用机制是通过增加内皮型的NOS(eNOS)mRNA转录,提高eNOS蛋白的表达水平,从而提高了eNOS酶的活性。该研究为将(S,S)ZX-5开发为通过增加NO释放从而选择性改善脉络膜血流的药物提供实验依据。     

心肌肌钙蛋白Ⅰ的融合表达和分离纯化

目的研究人心肌肌钙蛋白(cTnⅠ)在大肠杆菌中稳定高效的融合表达和分离纯化,以满足临床诊断的需要。方法人cTnⅠDNA序列由pdf 5-cTnⅠ质粒经PCR亚克隆而得,然后将其插入pET32a(+)载体,构建成pET32a(+)-cTnⅠ表达质粒,以大肠杆菌BL21(DE3)为表达菌,在IPTG诱导下进行表达。结果硫氧还蛋白(TrxA)-cTnⅠ融合蛋白得到高效表达,并经金属螯合亲和色谱一步纯化得到目的蛋白质。试剂盒检测结果表明该重组蛋白质具有cTnⅠ免疫原活性。结论构建了pET32a(+)-cTnⅠ重组质粒,并在大肠杆菌中获得高效表达,为建立急性心肌梗死早期诊断试剂奠定了基础。     

HPLC法测定牛奶中磺胺二甲基嘧啶残留量

磺胺二甲基嘧啶（sulfamethazine，SM2）为兽医常用的磺胺类药，但磺胺类药物在体内半衰期较长，通过任何途径摄入的磺胺都有可能在体内蓄积，当蓄积超过一定浓度时将对人体机能产生损害。因此许多国家对动物使用磺胺类药物和其在动物源性食品中的残留进行了严格的监控。有规定牛奶中SM2最高残留限量（MRLs）不能超过25μg/kg。测定牛奶中SM2残留量的方法有微生物学法、酶联免疫法、薄层色谱法、分光光度法和毛细管电泳法等。     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备与鉴定

为了建立抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ(CTnI)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。以重组表达并纯化后的CTnI免疫BalB/C小鼠,采用传统单克隆抗体技术筛选能稳定分泌抗CTnI McAb的杂交瘤细胞株。结果:建立了3株稳定分泌抗CTnI McAb的杂交瘤细胞株2E3,3D4和3E6,腹水效价分别为4×10-5,1×10-6,1×10-5,亲和常数分别为4.8×108,5.2×109,3.6×108,最低检测浓度分别为20,40,20μg/L,其中2E3和3D4可以识别CTnI的不同表位。     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素3融合蛋白在大鼠体内的药代动力学研究

研究重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素3融合蛋白(GM-CSF/IL-3,MX)在大鼠体内的药代动力学。方法:实验采用同位素示踪技术结合HPLC分析,建立了MX在大鼠血浆中的测定方法,并测定了MX皮下注射3个剂量水平和静脉注射中剂量水平在大鼠体内的药动学参数。结果:高中低剂量T1/2分别为(1 5.4±2.0),(1 6.1±1.8)h,(1 3.2±2.2)h;AUC分别为(5 8 8±1 2 0),(2 8 6±4 7),(1 4 2±2 0)μg/(L.h),Cmax分别为(3 1.2±8.3),(1 4.8±1.2),(8.3±1.4)μg/L。结论:MX皮下注射给药后,Cmax和AUC与剂量成比例,MX在大鼠体内的代谢和消除是线性的。7 0μg/kg组生物利用度为3 5.6%。     

N,N-双乙酰胱氨酸在毕格犬体内的药动学

目的研究毕格犬静脉注射不同剂量N,N-双乙酰胱氨酸(DiNAC)后的药动学。方法毕格犬12只随机分成3组,分别静脉注射DiNAC 25,12.5,6.25 mg/kg,在设定的时间点采血,反相高效液相色谱法测定血浆中的DiNAC浓度,DAS程序计算其药动学参数。结果毕格犬静脉给予DiNAC后,其血药浓度-时间曲线符合二室模型一级动力学过程。AUC0→∞分别为3849.7±157.7,1683.0±90.5,757.1±344.2 mg/(L.min),与给药剂量成良好的线性关系(r=0.9993);Cmax分别为91.99±15.13,53.37±3.88,23.20±7.07 mg/L,与给药剂量呈线性关系(r=0.993);而t1/2α为1.1~1.9 min,t1/2β为34.2~47.3 min,分布容积(Vd)为0.38~0.49 L/kg,显示非剂量依赖性特征。结论DiNAC在毕格犬体内的药动学过程为二室模型一级动力学过程,具有分布快,消除迅速的特点。     

一氧化氮调控剂ZX-5对血管内皮细胞eNOS和ERK蛋白表达的影响

目的：研究新型一氧化氮调控剂ZX-5作用后血管内皮细胞eNOS和ERK蛋白的表达，初步阐明ZX-5的作用机理。方法：用Westernblotting测定ZX-5作用后血管内皮细胞eNOS和ERK蛋白的表达。结果：ZX-5能够增加eNOS的表达量，高剂量ZX-5可以增加ERK蛋白表达。结论：ZX-5可能通过ERK途径增加eNOS的表达（eNOS是ZX-5作用的靶点之一），具有开发成药物的潜力。     

鲨鱼肝再生因子(SHRF)半抗原偶联与多抗制备

探讨鲨鱼肝细胞再生因子(Shark Hepatic Regenerative Factor,SHRF)完全抗原的偶联方法和兔抗体的制备。分别考察了戊二醛(GA)一步法,戊二醛二步法和1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳化二亚胺(EDC)法3 种偶联方法对SHRF与BSA的偶联效果,并将制备的完全抗原免疫新西兰白兔。实验表明碳化二亚胺法具有反应条件温和,偶联效率高等优点,并得到了高效价的兔抗体,为SHRF的ELISA方法的建立奠定了基础。     

一种高效制备重组抗菌肽S-thanatin的方法

S-thanatin是一个含有21个氨基酸的抗菌肽,以融合形式在大肠杆菌体内表达,载体构建时人工设计了一个凝血酶位点。为降低重组抗菌肽S-thanatin的生产成本以利于工业化生产,探索了一个处理速度快且成本较低的分离纯化策略。通过大肠杆菌pET-32a/BL21(DE3)系统高效可溶表达融合蛋白后,首先分析了融合蛋白的表达部位,然后利用融合蛋白热稳定性高的性质通过加热去除不耐热的大分子质量蛋白,同时降低蛋白酶对融合蛋白的影响。离心后溶液通过中空纤维超滤来浓缩融合蛋白,之后进行固定化凝血酶酶切。酶切后的TrxA片段和目的多肽利用其分子质量的差异,使用超滤膜包进行分离,最后使用制备反相高效液相对S-thanatin进行精制,并检测其对大肠杆菌ATCC 25922的抗菌活性。结果表明,通过这一简单的纯化工艺,可制备出纯度95%以上的S-thanatin,并具有很好的抗菌活性。