外科专业学位研究生应用解剖学实验平台建设的实践

近年来,为了加速临床医学高层次人才培养,提高临床医疗队伍素质和临床医疗工作水平,不断扩大医学专业学位研究生的培养规模[1]。医学专业学位是以专业实践为导向,重视实践和应用,侧重于培养研究生的临床能力[2]。外科学是实践性很强的学科,外科专业学位研究生的解剖学基础是决定其临床能力的重要因素,也是决定其培养质量的关键[3]。为此,我们进行了外科专业研究生应用解剖学实验平台建设的实践,提高了专业学位研究生的培养质量,现报告如下。     

“以器官系统为中心”神经系统整合课程教学改革实践

重庆医科大学自2010年起,从神经系统自身特点出发,打破传统以学科为中心的课程模式,通过对神经系统涉及的基础学科和临床学科进行全线整合,建立神经系统整合课程体系,并在该校五年制卓越医师班进行试点。新课程模式引导学生将知识点连接成面,加强知识的纵向和横向联系,精简重复内容,帮助学生形成整体连贯的创新性思维。课程整合是医学教育改革的必然趋势。     

带状疱疹后遗神经痛患者用药依从性及影响因素的横断面调查研究

目的 了解带状疱疹后遗神经痛(PHN)患者用药依从性现状及其影响因素.方法 采用横断面调查的方法,调查2014年1月至2015年3月就诊于陆军军医大学西南医院疼痛门诊的PHN患者用药依从性现状,采用多因素Logistic回归方法分析用药依从性的影响因素.结果 共纳入396例PHN患者,52.3% 患者用药依从性良好,47.7% 依从性差.单因素分析显示,影响用药依从性的因素为年龄、文化程度、婚姻状况、居住情况、经济状况、疼痛程度、病程、医保报销比例、不良反应及合并其他疾病(P<0.05).多因素Logistic回归分析结果显示:影响用药依从性的因素为年龄、文化程度、婚姻状况、居住情况、经济状况、疼痛程度、病程、医保报销比例、不良反应、合并其他疾病.结论 PHN患者服药依从性不高,影响患者用药依从性的因素较多,建议开展健康教育、加强患者心理干预和建立随访用药依从性制度以提高用药依从性.     

《局部解剖学》课程形成性评价体系的实践与思考

为了更全面地提高教学质量和培养学生综合学习能力,尝试建立《局部解剖学》课程形成性评价体系。把考试考核贯穿于课程教学的全过程,使课程教学不但重结果、而且重过程：使学生重视平时学习,养成良好的学习习惯,极大地减少了靠一次期末考试定成败的偶然性。多样的考试考核方法和叠加的综合成绩评定．使考试测验自始至终都能起到促进和帮助学生学习的作用。激励学生爱学、会学、创造性学习,监控教学全过程,是建立该体系的根本目的。     

去甲肾上腺素和激动蛋白2α在大鼠蒲肯野细胞的共表达

目的观察大鼠小脑浦肯野细胞内去甲肾上腺素(NA)和激动蛋白-2α(AP-2α)的共存状况。方法利用免疫组化、Western bloting和免疫荧光双重标记技术,观察神经递质NA的特异性标志酶-多巴胺β羟化酶(DBH)和AP-2α在成年大鼠浦肯野细胞中的表达及共存。结果免疫组化和免疫荧光显示大鼠小脑浦肯野细胞DBH和AP-2α表达呈阳性;Western blot检测结果表明小脑中有DBH和AP-2α的表达;免疫荧光双标显示DBH和AP-2α共存于浦肯野细胞胞浆内。结论小脑浦肯野细胞同时含有NA和AP-2α,NA可能作为神经调质参与小脑蒲肯野细胞的功能调节;AP-2α作为调节因子,可能参与NA的表达调控。     

rAQP4-M1真核表达载体的构建及在CHO细胞中的表达

目的 构建rAQP4-M1基因真核表达载体,建立稳定转染AQP4-M1的CHO细胞系.方法 应用RT-PCR从大鼠脑组织中扩增rAQP4-M1,并将PCR产物双酶切后插入到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,经过菌落PCR、双酶切及测序验证的pcDNA3.1(+)/rAQP4-M1质粒通过脂质体转染CHO细胞.G418筛选建立稳定转染rAQP4-M1的CHO细胞系.采用细胞免疫荧光和免疫印迹技术检测rAQP4-M1在该细胞系中的表达.结果 成功构建了pcDNA3.1(+)/rAQP4-M1表达质粒,建立了稳定转染的CHO细胞系.免疫荧光检测结果显示,rAQP4-M1在CHO细胞膜上稳定表达;免疫印迹检测可见34×103处的阳性条带,表明rAQP4-M1在该细胞系中成功表达.蓝绿温和胶电泳技术证实了rAQP4-M23而不是rAQP4-M1参与了正交排列颗粒(orthogonal arrays of particles,OAPs)的形成.结论 rAQP4-M1在CHO细胞系中稳定表达成功,rAQP4-M1未参与OAPs的形成.     

小鼠嗅黏膜中水通道蛋白1对嗅觉形成的作用

目的 研究水通道蛋白1(aquaporin 1, AQP1)在小鼠嗅黏膜中的表达模式及其对嗅觉形成的作用.方法 应用免疫荧光和免疫印迹技术研究野生型和AQP1基因敲除小鼠嗅黏膜中AQP1的表达差异;采用埋藏食物小球实验(含对照实验)、嗅觉迷宫实验(含对照实验)2种嗅觉行为学方法以及气体刺激性嗅觉电位记录(electroolfactogram,EOG)检测2组小鼠嗅觉功能的差异.结果 免疫荧光和免疫印迹结果均证实了AQP1基因敲除小鼠嗅黏膜中没有AQP1的表达;免疫荧光结果表明AQP1主要分布于嗅黏膜的血管内皮细胞和嗅神经束膜上.行为学检测结果显示,埋藏食物小球实验中第1、2天2组寻找食物时间差异具有统计学意义(P<0.05),而第3天和对照实验之间无明显差异(P>0.05);嗅觉迷宫实验中2组除对照实验外,寻找食物时间差异具有统计学意义(P<0.05).气体刺激性诱发电位结果显示,2组小鼠嗅黏膜在不同气压强度饱和Trithylamine作用下的嗅觉电位波形相似,波幅均随气压的逐渐增加而增大;而在相同气压作用下,AQP1基因敲除小鼠嗅觉电位的波幅低于野生型小鼠,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 AQP1主要分布在嗅黏膜的血管内皮细胞和嗅神经束膜上;AQP1基因敲除小鼠的嗅觉敏感性较野生型小鼠有一定程度的降低,但嗅神经元兴奋性没有差异.AQP1可能在嗅觉信号传递过程中发挥作用.     

脑红蛋白在内毒素脑损伤大鼠模型中的表达变化

Objective To investigate the expression of neuroglobin(Ngb) in frontal cortex, cere-brospinal fluid (CSF) and serum in rats with brain injury induced by LPS and to elucidate its significance. Methods Seventy adult Sprague-Dawley rats were randomly divided into LPS (n = 60, with injection of 0.1 mg/kg LPS into cistern) and control (C, n =10, with injection of equal volume of isotonic saline into cistern) groups, with 10 rats in each group. The plasma, CSF as well as frontal cortex from sacrificed rats were collected in LPS group at 3, 6, 12, 24, 48, 72 post injection hour (PIH), with 10 rats at each time point. The protein expression of Ngb was measured by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) and Western blot. Expression of Ngb in frontal cortex was determined by SP. Water content of frontal cortex was assessed by drying method. The correlation among Ngb contents in serum, CSF, frontal cortex and water con-tent of frontal cortex was analyzed with multiple comparison. Results Ngb expression ( by ELISA) : Ngb expression of frontal cortex, CSF, and serum in LPS group was higher than that in C group at each time point, and it peaked at 48 PBH (35.4±3.9, 22.7±3.1, 14.4±2.8 ng/mL, respectively, P <0.01). Ngb ex-pression ( by Western blot) : Ngb protein with relative molecular mass of 17×103 was observed in each group. Ngb expression detected by Western blot was similar to that detected by ELISA. Brain water content was significantly greater in LPS group than that of C group at 6-72 PIH ( P<0.01) , and it peaked at 48 PBH ( 83.3±1.9) %. Ngb contents in serum, CSF, frontal cortex, and water content of frontal cortex were positively correlated with muhipie comparison (γ=0.631-0.719, P<0.01). Conclusions Up-regu-lation of Ngb expression in brain injury induced by LPS is correlated with duration after challenge of LPS.     

丙戊酸钠对APP/PS1双重转基因AD模型小鼠脑内老年斑和神经元的影响

目的 探讨丙戊酸钠 (valproic acid sodium salt,VPA)处理对淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)/早老素1(presenilin1,PS1)双重转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠是否发挥神经保护作用.方法 对APP/PS1双重转基因AD模型种鼠交配后产下的子代进行基因分型,运用VPA 30 mg/(kg·d)和等量生理盐水腹腔注射APP/PS1双重转基因小鼠4周.药物处理后采用免疫组化、甲硫素S染色检测VPA对老年斑(senile plapues,SP)的影响,用Nissl染色、Tunel染色观察脑内神经元的变化,并采用ELISA定量检测小鼠脑内β-淀粉样蛋白(amyloid β peptide,Aβ)水平.结果 免疫组化及甲硫素S染色结果显示:VPA治疗组较生理盐水组的小鼠大脑皮质及海马区域的老年斑数量明显减少(t ＝ 7.78,P ＜ 0.01).Nissl染色发现VPA治疗组小鼠皮质及海马内的神经元数目较生理盐水组增加;Tunel染色显示VPA治疗组小鼠脑内凋亡神经元明显减少(t ＝ 5.95,P ＜ 0.01);ELISA结果提示VPA治疗组小鼠脑内Aβ40(t ＝ 4.23,P ＜ 0.01)和Aβ42(t ＝ 7.51,P ＜ 0.01)水平显著低于对照组.结论 VPA处理能显著减少AD模型小鼠减少脑内Aβ的沉积和老年斑的形成,通过减少神经元的凋亡来增加神经元的数量.     

水通道蛋白4和内向整流性钾通道4.1在星形细胞瘤组织中的共定位及表达差异

目的：观察水通道蛋白4（aquaporin4,AQP4）与内向整流性钾通道4.1（inward rectifying potassium channel 4.1,Kir4.1）在人不同病理级别星形细胞瘤组织中的共定位现象及其二者的表达差异,探讨星形细胞瘤增殖、生长的病理机制。方法：共收集人不同病理级别星形细胞瘤标本50例。采用石蜡切片HE、激光共聚焦和Western blot分析,以肿瘤周围相对正常脑组织作为对照,观察AQP4与Kir4.1的共定位及其蛋白表达差异。结果：AQP4和Kir4.1在人不同病理级别星形细胞瘤组织中并没有完全共定位;与正常脑组织相比,人星形细胞瘤组织Kir4.1表达上调,并随着星形细胞瘤病理级别的升高表达增强。而AQP4在低级别肿瘤组织中却表达减弱,在高级别肿瘤组织中表达又逐渐增强。结论：AQP4和Kir4.1在各级别肿瘤组织中没有完全共定位,二者的蛋白含量与肿瘤病瘤级别相关,并表现出不同的变化规律,提示二者在肿瘤组织水与离子平衡的维持中可能具有不同的作用。