人肝癌胰岛素样生长因子Ⅱ基因P2,P4启动子克隆及序列分析

目的克隆人胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因P2,P4启动子并进行序列分析,以明确肝癌组织中IGF-Ⅱ启动子碱基序列有无改变及其与转录调控的关系,为后续研究奠定基础。方法根据GenBank数据库提供的IGF-Ⅱ基因全序列及有关文献,应用巢式PCR扩增L-02人胎肝细胞系(正常对照)及8例肝癌组织的IGF-ⅡP2,P4启动子,并采用TOPO TA Cloning kit将PCR产物克隆入pCR2.1-TOPO T载体。目的DNA片段和阳性重组子分别通过琼脂糖凝胶电泳及直接测序鉴定。结果①L-02细胞及8例肝癌组织P2,P4启动子均扩增成功,长度分别为684 bp及1 246 bp;②8例肝癌组织P2,P4启动子碱基序列与L-02相应的DNA序列完全相同,未见突变、缺失等改变,经与GenBank数据库比较,结果完全一致。结论①成功克隆了IGF-ⅡP2,P4启动子;②本组肝癌组织中IGF-ⅡP2,P4启动子序列稳定,未见突变、缺失等改变,可能与IGF-Ⅱ异常表达的转录调控机制无关。     

Relationship between hyperemesis gravidarum and Helicobacter pylori seropositivity

Early pregnancy is commonly characterized by the disturbance of digestive function, characteristically manifested by nausea and vomiting. These symptoms during early pregnancy usually disappear spontaneously after about 12 weeks. In a minority of pregnant women,these symptoms are very severe, and are associated with     

P3启动子调控融合基因质粒构建及在肝癌细胞中表达(英文)

目的：构建人胰岛素样生长因子Ⅱ基因（IGF-Ⅱ）P3启动子驱动单纯疱疹病毒胸苷激酶（tk）与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合基因穿梭质粒，观察其在肝癌细胞系HepG2及宫颈癌细胞系HeLa细胞中的表达及其作用。方法：应用基因重组技术，构建IGF-Ⅱ P3启动子驱动EGFP与tk融合表达穿梭质粒载体，脂质体转染技术将其转入HepG2及HeLa中，48 h后荧光显微镜下观察荧光表达,RT-PCR法检测tk和EGFP mRNA表达，四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验检测转染融合蛋白载体后给予不同浓度的GCV对HepG2及HeLa细胞毒作用。结果:酶切鉴定和测序分析证实重组质粒构建成功；转染此穿梭质粒的细胞中仅有HepG2细胞检测到绿色荧光；RT-PCR检测到tk和EGFP的mRNA仅在HepG2细胞中表达；GCV对转染了携此质粒载体的HepG2细胞有选择性细胞毒作用。结论:成功构建IGF-Ⅱ P3启动子驱动携带tk与EGFP融合基因穿梭质粒载体，转染后对人肝癌细胞系HepG2有选择性杀伤作用，为进一步靶向性肝癌腺病毒基因治疗奠定了基础。     

基于迁移学习的胃镜图像识别模型的构建及其在胃癌诊断中的应用

目的 采用迁移学习技术构建胃镜图像识别模型,探讨其对胃癌的诊断价值。方法 收集2 001例胃癌、2 119例胃溃疡、2 168例慢性胃炎患者的普通清晰白光胃镜图像,将其分为训练集图像组（1 851例胃癌、1 969例胃溃疡和2 018例慢性胃炎图像）和测试集图像组（胃癌、胃溃疡及慢性胃炎各150例图像）。选择在ILSVRC（ImageNet Large-Scale Visual Recognition Challenge）赛中的冠军模型VGG19、ResNet50和Inception-V3作为预训练模型,将其改造后进行模型训练,用训练集图像训练上述3个模型,用测试集图像对模型进行验证,整个模型训练过程分成预训练和微调2个步骤。结果 在3个模型中,ResNet50模型验证准确度最高,对胃癌、胃溃疡及慢性胃炎的诊断准确度分别达93%、92%及88%。结论 基于迁移学习技术,利用ResNet50模型建立的胃镜图像识别软件模型可以较准确地区分胃癌与良性胃疾病（胃溃疡和慢性胃炎）。     

hAFP及hTERT双启动子调控的针对人IGF-II基因的siRNA特异性抑制人肝癌细胞生长

 目的：设计并筛选高效沉默胰岛素样生长因子II（IGF-II）基因的小干扰RNA（siRNA）序列,构建由重组人甲胎蛋白（hAFP）和人端粒酶逆转录酶（hTERT）双启动子调控的该siRNA表达载体,观察其对肝癌细胞生长的影响。方法：根据siRNA设计原则,参照IGF-II mRNA序列设计3对siRNA序列及1对阴性对照序列,转染人肝癌Huh7细胞,转染24 h后采用实时荧光定量PCR检测IGF-II mRNA表达量变化,筛选干扰效率最高的siRNA序列。采用PCR扩增出hAFP及hTERT启动子的核心序列,应用基因重组技术构建重组hAFP和hTERT双启动子调控的该siRNA表达载体。将上述siRNA表达载体转染Huh7细胞及L-02人正常肝细胞,观察IGF-II mRNA表达及细胞生长情况变化。结果：实时荧光定量PCR显示,siRNA3在25 nmol/L浓度时抑制效率最高,约90%。成功扩增hAFP及hTERT启动子核心序列,将其分别克隆入pGL3-Basic载体,构建成重组pGL3-hAFP-hTERT载体;将siRNA3克隆至pGL3-hAFP-hTERT载体,构建成重组pGL3-hAFP-hTERT-siRNA3表达载体。Huh7细胞IGF-II mRNA表达量显著降低,抑制效率达86%,细胞增殖受到明显抑制,G1期细胞比例显著增加;L-02细胞上述指标无明显改变。结论: 成功构建双重RNA聚合酶II启动子（hAFP及hTERT双启动子）调控的针对IGF-II基因的siRNA表达载体,即pGL3-hAFP-hTERT-siRNA3;该siRNA表达载体可特异性抑制IGF-II mRNA表达及肝癌细胞生长。     

RNA干扰与肝细胞癌治疗

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指利用双链RNA(double-strand RNA,dsRNA)诱导同源靶基因的mRNA特异性降解,导致转录后基因沉默的现象[1]。该技术已经成为基因功能、基因表达调控机制、新基因筛选、基因治疗和寻找     

泮托拉唑治疗消化性溃疡50例

目的：评价泮托拉唑对消化性溃疡的疗效。方法：93例经内镜证实的活动性消化性溃疡患者随机分为A,B两组,A组给予泮托拉唑40mg,每晨1次口服;B组给予雷尼替丁300mg,每晚睡前口服。两组疗程均为4周,结果：（1）A组平均上腹痛缓解天数为4．4d,溃疡愈合率96．0％,B组平均上腹痛缓解天数7．6d,溃疡愈合率69．8％,两组比较,前者上腹痛缓解天数显著少于后者（P＜0．05）,而溃疡愈合率显著高于后者（P＜0．01）。（2）在A组和B组中,十二指肠溃疡愈合率分别为96．9％和71．4％,胃溃疡愈合率分别为94．4％和66．7％,两组相比,差异均有显著性统计学意义（P＜0．01及P＜0．05）,结论：泮托拉唑是治疗消化性溃疡较为的药物,疗效明显优于雷尼替丁。     

特异性抗肝癌单链抗体的优化表达与纯化及其生物学活性鉴定

目的:制备有生物活性的特异性抗肝癌单链抗体.方法:以ITPG诱导大肠埃希茵HB2151表达可溶性抗肝癌单链抗体;利用HiTrap抗E Tag亲和层析柱对阳性克隆表达的单链抗体进行纯化;纯化后的单链抗体进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,以Bradford检测法测定其浓度,ELISA法及免疫组化法鉴定其生物学活性.结果:在培养基中加入0.4mol/L蔗糖,以IPTG 1mmol/L于30℃诱导12h,抗肝癌scFv可溶性表达量较多,纯化后可溶性抗肝癌scFv含量为325mg/L,相对分子质量为29×103.与肝癌细胞结合效价为1:64,与肝癌组织结合阳性率为75%,具有良好的生物学活性.结论:成功获得具有生物活性的特异性抗肝癌单链抗体,为肝癌靶向诊断及治疗的开发与应用奠定了基础.     

雷贝拉唑、克拉霉素、阿莫西林4日疗法根除幽门螺杆菌感染疗效观察

目的　观察含雷贝拉唑的 4日疗法根除幽门螺杆菌 (Hp)的疗效。方法　 10 3例Hp阳性患者 ,随机分为治疗组和对照组。治疗组予以雷贝拉唑 10mg ,克拉霉素 0 5g ,阿莫西林 1 0g,均 1日 2次 ,共 4d。对照组予以兰索拉唑 3 0mg ,克拉霉素 0 5g、阿莫西林 1 0g,均 1日 2次 ,共 7d。 5～ 6周后复查1 4C 尿素呼气试验。记录副作用。计算用药成本及费用 效果比 (C/E)。结果　治疗组、对照组按治疗意向 (ITT)分析的根除率为 78 79%、72 97% ,按完成随访病例分析 (PP)的根除率为 88 14 %、84 3 8% (P >0 0 5 ) ,副作用发生率为 11 86%、2 1 88% ,C/E为3 44、5 14。结论　含雷贝拉唑的 4日疗法 ,是一种短程、安全、高效、更为经济的根除Hp方案。