湿润烧伤膏治疗烧伤区微生物学效应与免疫功能的影响

我们采用雄性家兔18只,造成15%Ⅲ烫伤,并将创面涂抹绿脓杆菌1ml(10~4)。随机分为湿润烧伤膏、烧伤药水和对照组三组,每组6只,按说明涂药,分笼饲养。结果表明:湿润烧伤膏组有明显的侵袭性感染,伤后24h 烫伤区3只有出血点和坏死斑,痂下细菌计数>10~8;48h 有大片坏死组织液化脱落,出血加重,痂下细菌计数>10~(10),中性粒细胞数及 PMN—CL 峰值明显下降,与实验前和同一时间点中其它两组比较,差异有非常显著意义(P<0.01);72h 4只动物死亡,1只垂危者血培养有绿脓杆菌生长,当日死亡。     

Effects of multiple tumor suppressor 1 on the proliferation of human ovarian cancer HO-8910 cells

In1994,tworesearchteams,oneinSaltLakeCity[']andtheotherinSanDiego['jfirstreportedanewinhibitorofcancercells,whichencodedapro-tein,ofl6kDandsowasnamedp16gene.Previousresearchesindicatedthatthepl6genewasdeletedormutatedin75%celllinesderivedfromawidevarietyofcancers.Wehavesuccessfullytransfectedthewildtypepl6geneintohumanovariancancerHO-891Ocellsandproveditsgeneexpression.Inthepresentstudy,theeffectsofMTSlonthepro-liferationofovariancancerHO-89lOcellswerefur-therinvestigated.MATERIALSAN…     

环孢霉素A对培养的人角朊细胞主要组织相容性抗原表达的影响

目的：研究环孢霉素Ａ对人皮肤角朊细胞的主要组织相容性抗原（ＭＨＣ）表达的影响。方法：采用γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）刺激培养的人角朊细胞ＭＨＣ－Ｉ／Ⅱ抗原表达的实验模型,研究了低剂量环孢霉素Ａ对角朊细胞ＭＨＣ－Ｉ／Ⅱ抗原表达的影响。结果：０．１２５ｍｇ／Ｌ的环孢霉素Ａ对于ＩＦＮγ－刺激的角朊细胞ＭＨＣ－Ｉ类抗原（ＨＬＡ－ＡＢＣ抗原）表达的增强,具有抑制作用（Ｐ〈０．０１）;但是对于ＩＮＦ－γ刺激的角朊     

外源性hbFGF cDNA导入人角朊细胞及其表达

目的：观察外源性人碱性成纤维细胞生长因子（ｈｂＦＧＦ）基因导入正常角朊细胞后,能否表达及分泌ｈｂＦＧＦ,并探讨其机理;为开展临床创面基因治疗提供实验依据和奠定物质基础。方法：采用脂质体包埋ｈｂＦＧＦ ｃＤＮＡ的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｈｂＦＧＦ转染培养的人角朊细胞,经Ｇ４１８筛选、克隆、扩大及传代培养含转基因的角朊细胞。用特异性ｎｅｏ探针原位杂交显示转基因角朊细胞内含有拟转入的ｐｃＤＮＡ３－ｈｂ     

人增生性瘢痕组织中微血管内皮细胞的分离、纯化和培养

目的　微血管内皮细胞 (MEC)增殖和血管发生存在于很多生理和病理过程中 ,为体外重建人增生性瘢痕组织微血管内皮细胞 (HSMEC)生长模型 .方法　正常人包皮和增生性瘢痕经 1.2 5 g· L- 1 dispase和 1.2 5 g· L- 1 胰蛋白酶依次消化 4℃ 2 4h后 ,机械挤压分离组织内 HSMEC和人真皮微血管内皮细胞 (HDMEC) ,经 5 0 0 0 U· L- 1 b FGF,2 0 0m L· L- 1胎牛血清的 DMEM内培养和 0 .1g· L- 1胰蛋白酶 ,0 .15 mmol· L- 1 EDTA的 TE分离、纯化 ,组织学 HE染色和 因子相关抗原免疫组化染色 ,观察 MEC的阳性细胞百分数 .结果　 MEC在含 b FGF培养基中增殖旺盛 ,少量混生的成纤维细胞经 TE分离 MEC而被基本遗弃 ,3代 MEC能获得 97.0 %～ 98.0 %的纯度 ,明显高于原代培养 (P<0 .0 1) ,HSMEC形态学与 HDMEC无明显差异 .结论　低浓度b FGF和 TE细胞分离液分别对 MEC的培养和纯化有可靠作用 ,HSMEC的培养成功为烧伤创面愈合和瘢痕增生机制的研究扩展了空间 .     

神经激肽1受体非肽类拮抗剂对严重深Ⅱ度烫伤大鼠早期炎性神经递质P物质免疫活性物质含量的影响

目的：探讨静脉给予L-703，606后严重烫伤大鼠P物质免疫活性含量的变化规律。方法：实验于2003—03／2004—01在第四军医大学西京医院烧伤外科实验室完成。选择SD大鼠76只，按随机数分为正常对照组(4只)，烫伤对照组(24只)，L-703，606组(24只)，β-七叶皂甙钠组(24只)，运用放射免疫测定方法，动态检测经尾静脉给予神经激肽1受体非肽类拮抗剂L-703，606(250nmol／kg)后深Ⅱ度烫伤大鼠(20％TBSA)烫伤后早期72h创周及空肠P物质免疫活性物质含量的变化。结果：76只大鼠进入结果分析。①与正常对照组相比，L-703，606组、β-七叶皂甙钠组大鼠创周及空肠P物质免疫活性物质含量同烫伤对照组具有类似规律。烫伤后早期(1h)P物质免疫活性物质含量明显升高，(P&;lt;0.01)，但均低于烫伤对照组(P&;lt;0．01)；而后逐渐下降。与烫伤对照组相比，L-703，606组P物质免疫活性物质含量的病理性改变明显较轻，且轻于β-七叶皂甙钠组。结论：神经激肽1受体非肽类拮抗剂L-703，606能抑制严重烫伤大鼠早期P物质免疫活性物质含量的变化，为减轻严重烧伤后早期包括血管通透性增加、血浆蛋白外渗等炎症反应及局部和全身水肿形成提供新的思路。     

烫伤大鼠创面皮肤中神经肽P物质的变化

目的　观察皮肤创面神经肽P物质 (SP)的变化规律并探讨其来源。　 方法　运用免疫组化检测烫伤大鼠皮肤创面、创周和远处未损伤皮肤内含SP的神经分布密度的改变及其神经肽的分布 ,运用原位杂交技术观察其mRNA表达情况。　结果　烫伤后 15min在皮肤创面、创周和远处未损伤皮肤含SP的神经分布密度明显下降 (P <0.0 5 ),烫伤后 6～ 12h达到最低值 ,以后逐渐恢复。相比之下 ,在创周恢复过程中SP出现较早 ;在创面和创周的真皮层 ,SP免疫反应阳性的的巨噬细胞样大细胞从局部血管中游出 ,烫伤后 12h该细胞与局部含SP的神经关系密切 ,伤后 2 4h该细胞染色增强、破碎并释放大量SP免疫反应阳性的颗粒状物质 ,而后这些细胞在烫伤后 4 8h消失。原位杂交结果显示 ,伤后 6h相同大小细胞内表达编码合成P物质前体的前速激肽A(PPTA)mRNA。　 结论　皮肤烧伤后 ,SP不仅从皮肤内神经末梢释放 ,也可能从局部炎性细胞合成释放     

离体角质形成细胞热损伤模型建立及细胞凋亡观察

Objective To reproduce a model of heat injured KC in vitro and explore its apoptosis rate of KC due to heat injury at different temperature. Methods Human KCs were cultured in vitro, and they were incubated at 37, 41, 43,45, 48, and 51 ℃ respectively for 10 mins in water bath. Trypan blue staining and Hoechst 33258 fluorescence staining were used respectively to determine necrosis and apoptosis of KC. Rates of apoptosis and necrosis of KC were analyzed quantitatively by flow cytometer. The prolifera-tion activity of KC after heat injury was detected by MTT test. Results The results of trypan blue stai-ning, Hoechst 33258 fluorescence staining, and flow cytometer demonstrated that number of apoptotic and necrotic KC increased gradually along with a rise of water bath temperature. The rates of apoptosis and necro-sis of KCwererespectively(12.3±3.2)% and (14.1±1.6)% at 45℃, (27.7±5.1)% and (58.0± 4.2)% at 48 ℃. Rate of KC necrosis reached up to (83.0±5.3)% at 51℃. Inhibition of KC growth reached a stationary phase when the injurious temperature reached 45 ℃ as observed with MTT test. Con-clusions Heat injury can induce apoptosis and growth inhibition of KC in vitro. Incubating KC at 45 ℃ for 10 mins is a good condition to reproduce a model of heat injured KC in vitro. This model may be used to study the biological character and apoptosis of KC after burn injury.     

利用Geneticin纯化雪旺细胞的实验研究

目的：了解Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ在雪旺细胞培养过程中去除成纤维细胞的作用。方法：组织块法培养雪旺细胞，４～３天后应用含有１００μｇ／ｍｌ浓度的Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ培养液培养４～５天，再改用普通培养液进行培养，并进行细胞传代，利用Ｓ－１００蛋白和ＧＦＡＰ（胶质纤维酸性蛋白）进行免疫组化染色，鉴定培养的雪旺细胞。结果：应用含有Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ的培养液培养雪旺细胞４～５天后成纤维细胞基本消失，雪旺细胞仍生长良好，并可传代培养。经Ｓ－１００蛋白和ＧＦＡＰ免疫组化染色鉴定培养的细胞基本为染色阳性的雪旺细胞。结论：应用含Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ的培养液培养雪旺细胞能够有效地去除成纤维细胞，获得纯度高、活力良好的雪旺细胞。     

人胎儿毛乳头细胞和聚羟基丁酯细胞相容性实验

目的：探讨人胎儿毛乳头细胞与生物可降解材料聚羟基丁酯的细胞相容性,为进一步以聚羟基丁酯为基质用人胎儿毛乳头细胞诱导表皮干细胞分化为毛囊,从而构建具有毛囊结构的组织工程皮肤提供实验依据和理论基础.方法：实验于2004-03/07在第四军医大学附属西京医院烧伤外科实验室完成.标本为5～7个月胎龄终止妊娠人流胎儿（家属知情同意）.将二步法培养的人胎儿毛乳头细胞接种于聚羟基丁酯浸泡液及膜片上,四甲基偶氮唑盐法测定细胞黏附率和细胞增殖指数,并在体外培养1,4 d后扫描电镜观察细胞的生长状况.结果：①人胎儿毛乳头细胞在聚羟基丁酯浸泡培养基中生长良好.②24 h,48 h,72 h四甲基偶氮唑盐法结果与对照组无显著差异,4 h后人胎儿毛乳头细胞在聚羟基丁酯支架上黏附率为79.06%.③电镜显示人胎儿毛乳头细胞生长良好,形态正常,黏附牢固.结论：人胎儿毛乳头细胞与聚羟基丁酯相容性,黏附性良好,可以用于进一步构建具有毛囊结构的组织工程皮肤.