妊娠和高脂妊娠大鼠胰腺胰高血糖素的表达

目的:探讨在生理妊娠和高脂饮食诱导的病理妊娠状态下胰腺胰高血糖素的变化特点,同时观察2种妊娠状态葡萄糖耐量试验各点血糖和血清胰岛素的变化。方法:32只雌性SD大鼠随机分为对照组、高脂组、妊娠组和高脂妊娠组,高脂饲料喂养16周后,妊娠组大鼠进行配对受精,妊娠第14天,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法分别检测大鼠胰腺胰高血糖素原mRNA和胰高血糖素蛋白表达。结果:葡萄糖耐量试验结果显示各组大鼠的血糖最高点均在服糖后30min。对照组胰岛素分泌最高点在15min,而高脂组、妊娠组和高脂妊娠组胰岛素分泌高峰为30min。妊娠组空腹胰岛素高于对照组(P0.05),高脂妊娠组空腹胰岛素高于对照组(P0.01),同时胰岛素AUC也高于对照组(P0.05)。妊娠组胰腺胰高血糖素原mRNA相对表达量高于对照组1.46倍(P0.05),高脂妊娠组胰腺胰高血糖素原mRNA相对表达量高于对照组1.77倍(P0.01),高于高脂组1.54倍(P=0.01)。妊娠组胰高血糖素高于对照组2.57倍(P0.01),高脂妊娠组胰高血糖素高于对照组3.44倍(P0.01),高于高脂组2.9倍(P0.01)。结论:高脂和妊娠两种状态均导致胰岛素高峰分泌延迟,生理妊娠中期胰岛素抵抗以基础胰岛素增高为主,而高脂妊娠中期同时存在基础和糖负荷后高胰岛素血症和胰岛素抵抗。妊娠中期胰腺胰高血糖素增高可能是妊娠胰岛素抵抗增加的组成部分。     

人胎儿表皮干细胞的体外分离培养及基因转染

目的：探讨人胎儿表皮干细胞体外分离培养的方法以及作为体外基因转染靶细胞的可行性。方法：利用Ⅳ型胶原快速贴附法分离人胎儿表皮干细胞，以人胎儿成纤维细胞条件培养液配制表皮干细胞培养基，通过角蛋白19（K19）和整合素β1免疫组化染色、细胞周期分析及克隆形成率测定，对培养细胞进行鉴定。采用脂质体介导法，以含血管内皮细胞生长因子165（VEFG165）基因片段的真核表达载体pcDNA3.1(pcDNA3.1/VEGF165)转染培养细胞；采用病毒载体介导法，以含报告基因绿色荧光蛋白（GFP）的重组腺相关病毒载体（raav/GFP)转染培养细胞。应用免疫组化染色及荧光显微镜观察检测转染效果。结果：人胎儿表皮干细胞呈明显克隆性生长、克隆形成率高，G1期细胞比例明显高于普通基底层角质细胞，K19和整合素β1免疫组化染色呈强阳性。pcDNA3.1/VEGF165转染的表皮干细胞VEGF165免疫组化染色阳性，raav/GFP转染的表皮干细胞呈现强荧光。结论：利用Ⅳ型胶原快速贴附法及人胎儿成纤维细胞条件培养基，可初步实现人胎儿表皮干细胞的分离培养。以质体为介导或以腺相关病毒为载体进行人胎儿表皮干细胞的体外基因转染是可行的。     

血竭素高氯酸盐对成纤维细胞增殖与成纤维细胞生长因子mRNA表达的影响

目的 观察血竭素高氯酸盐(Dp)对人皮肤成纤维细胞(Fb)生物学特性的影响,探讨其促进创而愈合的机制.方法 分离培养人正常Fb,将Dp以不同浓度(0.063、0.125、0.250、0.625、1.250、2.500 mg/L)分别加入培养液,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测Dp在不同浓度以及不同时间点对体外培养的Fb增殖作用的影响.通过流式细胞仪,实时荧光定量聚合酶链式反应( real-time PCR)分别检测最适浓度培养条件下Fb的细胞周期变化以及成纤维细胞生长因子(FGF) mRNA的合成表达.结果 Dp在0.625～1.250 mg/L浓度范围内,其吸光度值(0.237±0.012、0.243±0.017)均高于对照组(0.208±0.011)差异有统计学意义(t值分别为2.11、2.23,P＜0.05),此浓度范围可促进Fb增殖,且呈剂量依赖性,在浓度为1.250 mg/L时(A值0.243±0.017),促增殖作用最为显著(t =2.23,P＜0.01),流式细胞仪结果显示,在浓度为1.250 mg/L时,Dp可明显促进Fb通过G1/S及S/G2期限制点,S期及G2/M期细胞与对照组比较明显增多,G0/G1期细胞与对照组比较明显减少(t值分别为4.32、7.53、3.27,P＜0.05).细胞因子mRNA表达测定中,1.250 mg/L Dp组与对照组比较表达明显上调,差异亦有统计学意义(=1.48,p＜0.05).结论 Dp能显著促进Fb增殖,加快Fb周期进程,同时可促进FGF的mRNA表达,可能与血竭促进创面愈合的机制有关.     

横断毛囊体外再生的形态学研究

目的：研究毛囊横断后再生的条件，探索毛囊干细胞的初步定位．方法：将人头皮分离成游离的毛囊，共进行了8批横断毛囊培养，每批培养毛囊约30根，每批分3组，从不同位置(紧贴毛球、毛囊下1／3处、毛囊下1／2处)横断毛囊后进行培养，观测毛囊的生长情况及形态学改变．结果：紧贴毛球上方或在毛囊下1／3横断，上段毛囊大部分可以再生出新毛球样结构，毛囊可继续生长，上段毛囊平均生长长度分别为0．78mm和0．67mm，可生长比例分别为75％和70％；在毛囊下1／2横断，上段毛囊可生长比例仅为12．5％，明显低于前两组(P＜0．01)．结论：在一定位置横断毛囊，上段的毛囊细胞可以发生增殖分化，毛囊可以继续生长，并再生出新的毛球样结构，表明上段毛囊是其干细胞所在地．     

hEGF cDNA导入培养的人角朊细胞及其表达

目的 观察外源性人表皮细胞生长因子（ｈＥＧＦ）基因导入正常导入正常角朊细胞后,能否表达及分泌ｈＥＧＦ;为深入探讨ｈＥＧＦ的作用机制及临床应用奠定物质基础。方法 脂质体包埋ｈＥＧＦ－ｃＤＮＡ的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｈＥＧＦ转染人角朊细胞,经Ｇ４１８筛选,克隆,扩大及传代培养转基因的角朊细胞,特异性ｎｃｏ探针原位杂交显示转基因细胞内的质粒载体,ｈＥＧＦ抗体免疫细胞化学法观察转基因细胞内ｈＥＧＦ的表     

熊果苷对体外培养的人黑素细胞的作用

目的 研究熊果苷对体外培养的正常人表皮黑素细胞的作用效应。方法 利用碱性成纤维细胞生长因子为主要有丝分裂原建立正常人表皮黑素细胞培养系,MTT法测定熊果苷对黑素细胞活力的影响,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性,比色法测定黑素含量,并与曲酸及维生素C磷酸酯的结果比较。结果 熊果苷对体外培养的正常人黑素细胞酪氨酸酶活性呈浓度依赖性抑制,可显减少黑素生成量,对黑素细胞活力影响很小。结论 熊果苷对体外培养的人黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素生成有显抑制作用,且细胞毒性很低。     

湿润烧伤膏治疗烧伤区微生物学效应与免疫功能的影响

我们采用雄性家兔１８只，造成１５％Ⅲ烫伤，并将创面涂抹绿脓杆菌１ｍｌ（１０４）。随机分为湿润烧伤膏、烧伤药水和对照组三组，每组６只，按说明涂药，分笼饲养。结果表明：湿润烧伤膏组有明显的侵袭性感染，伤后２４ｈ烫伤区３只有出血点和坏死斑，痂下细菌计数＞１０８；４８ｈ有大片坏死组织液化脱落，出血加重，痂下细菌计数＞１０１０，中性粒细胞数及ＰＭＮ－ＣＬ峰值明显下降，与实验前和同一时间点中其它两组比较，差异有非常显著意义（Ｐ＜０．０１）；７２ｈ４只动物死亡，１只垂危者血培养有绿脓杆菌生长，当日死亡。     

用~3H—TdR掺入对干燥保存兔角膜组织活性的实验研究

利用干燥、脱水.长期保存的兔眼及猴眼角膜行部分穿透移植实验.均在部分实验动物植片中,获得了透明愈合;文献报告。经过于燥脱水后长期保存的角鹰内皮细胞。并非是真正的死亡细胞。仅仅是由于脱水失去了部分的正常形态和代谢活动的暂时停顿。移植后在活体房水的培育和再水合作用下。又重新恢复了正常的形态和生理功能;为证明干燥保存角膜组织是否具有活性。我们利用体外培养和~3H—TdR掺入法。对干     

烫伤大鼠肠道P物质含量和P物质能神经的观察分析

以30%TBSAⅢ度烫伤大鼠为模型,采用 RIA 和 IHC 的方法,动态观察了伤后72小时大鼠空肠免疫活性 P 物质(iSP)的含量及绒毛内 P 物质—免疫反应(SP—IR)阳性神经纤维的变化。结果发现:①烫伤大鼠空肠内 iSP 伤后1小时出现显著升高,4小时仍处于高水平状态;8小时后明显下降,伤后72小时一直处于低水平状态。③绒毛内 SP—IR 阳性神经纤维在形态、分布密度和纤维内 SP—IR 物质的含量都有明显的改变。图像分析定量结果表明:绒毛内 SP—IR 阳性神经纤维分布密度,伤后1小时明显增加,随后减少,48小时再次出现增加;神经纤维内 SP—IR 阳性物质伤后1小时及4小时明显升高,12小时明显下降,24小时后再次升高。实验结果说明:烫伤后大鼠空肠内 P 物质出现应激性释放与消耗,P 物质可能参与了烫伤后大鼠的肠道损伤;肠绒毛内的 P 物质能神经纤维是肠粘膜屏障损伤的直接参与因素。     

巨噬细胞增强兔晶体上皮细胞c－fos原癌基因的表达

目的验证关于人工晶体表面沉着的炎细胞可刺激残留的晶体上皮细胞增生的推测。方法将巨噬细胞及巨噬细胞调理液与培养的兔晶体上皮细胞共同孵育，用纯化的抗人Ｆｏｓ蛋白抗体做免疫细胞化学染色（ＡＢＣ法）。结果经巨噬细胞及其调理液作用的晶体上皮细胞较对照组生长迅速。在巨噬细胞作用后４小时，及巨噬细胞调理液作用后１小时，晶体上皮细胞核呈Ｆｏｓ蛋白染色阳性反应，而对照组为阴性。结论上述结果表明巨噬细胞能增强晶体上皮细胞ｃ－ｆｏｓ原癌基因的表达，而且这种作用可能是通过巨噬细胞分泌的生物活性因子介导的。