大鼠烫伤后肾上腺内含降钙素基因相关肽神经的改变

目的探讨皮肤烫伤早期大鼠肾上腺内降钙素基因相关肽(CGRP)变化规律,为阐明烫伤后肾上腺内分泌功能改变的机理提供资料。方法采用15%深Ⅱ度大鼠烫伤模型,以免疫组化方法分别检测烫伤后不同时相点肾上腺皮质、髓质 CGRP 免疫反应阳性神经和细胞分布密度的改变。结果①在肾上腺被膜,皮质,髓质均有含 CGRP 神经分布,其中髓质更为密集。在髓质可见含 CGRP 神经与 CGRP 免疫反应阳性细胞密切接触;②烫伤早期大鼠肾上腺皮质和髓质含 CGRP神经的分布密度均下降,但髓质内 CGRP 免疫反应阳性细胞的分布密度上升。结论降钙素基因相关肽可能是烫伤大鼠肾上腺功能改变的影响因素之一。     

基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶原对培养许旺细胞贴壁及增殖的作用

目的：了解基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶对体外培养条件下许旺细胞的贴壁及增殖作用的影响。方法：用基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶原包被培养板，以结合了相应抗体的培养板及包被Ⅰ型胶原和多聚赖氨酸的培养板为对照，将培养的许旺细胞以相同浓度加入各组培养板内。测定2、6、24h细胞贴壁率，培养72h进行^3H-TdR掺入试验，双道液体闪烁计数器测定各组的放射性计数。结果：基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶原组早期贴壁率较Ⅰ型胶原和多聚赖氨酸组高，抗基膜黏连蛋白和抗Ⅳ型胶原且贴壁率较低。基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶原组^3H-TdR掺入量高于其它组。结论：基膜黏连蛋白和Ⅳ型胶原对体外培养条件下的许旺细胞贴壁及增殖有促进作用。     

不同条件对人游离毛囊培养的影响

目的：研究不同培养基对游离毛囊培养的影响。方法：将美容手术后取下的头皮在无菌条件下分离成游离的毛囊培养于含血清或无血清的DMEM培训基、WilliamsE培养基中,观测毛囊的生长速度及形态学改变。结果：在含血清DMEM培养基中毛囊生长速度较慢,扭曲变形早;而无血清DMEM培养基毛囊的生长天数明显延长,毛囊的层次结构及形态可长时间保不变,但前3天长速度与有血清培养时无明显差异;使用WlliamesE培养基毛囊在前3天生长速度明显加快,结论：含血清的DMEM培养基不利于毛囊的生长,而WilliamsE培养基较适用于游离毛囊的培养。     

人表皮细胞生长因子基因真核表达质粒pcDNA3-hEGF的构建

目的 :构建人表皮细胞生长因子 (hEGF)基因真核表达质粒 ,为深入研究hEGF在组织修复中的分子调节机制及临床应用提供物质基础。方法 :含hEGFcDNA的pUC18-hEGF质粒于大肠杆菌JM10 9内扩增 ;提取及纯化pUC18-hEGF质粒 ;经DNA序列分析其所含hEGFcDNA ;限制性酶切hEGFcDNA片段 ,连接酶连接到真核表达质粒pcDNA3 -neo内 ,克隆出真核表达质粒pcDNA3 -hEGF ;再经限制性酶切鉴定hEGF表达质粒。结果 :提取及纯化的pUC18-hEGF质粒含有大小正确的hEGFcDNA碱基片段 ,其碱基序列为编码目的基因的正确序列 ;凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pcDNA3 -hEGF内。结论 :成功地构建了hEGF基因的真核表达质粒pcDNA3 -hEGF。     

纤维蛋白凝胶细胞培养模型的建立

创伤后的组织修复过程 ,在早期可表现为伤口收缩、肉芽组织形成及细胞外基质过度沉积等 ,在后期则表现为瘢痕形成及其异常增生 ,这些现象均与组织中成纤维细胞的生物学活动密切相关。近年来国内外学者利用细胞培养技术 ,在体外可控条件下对成纤维细胞进行了一系列研究 ,进一步丰富了创伤愈合的现代概念[1,2 ] 。细胞培养方法主要有单层培养和立体培养法 ,本实验旨在建立并探讨成纤维细胞的立体培养模式。材　料　与　方　法一、主要试剂ＤＭＥＭ培养基、胰蛋白酶及胃蛋白酶均购自美国Ｇｉｂｃｏ公司 ,人纤维蛋白原 (纯度 >90 % )及ｂ -氨基…     

多肿瘤抑制基因真核表达载体的构建及表达

多肿瘤抑制基因 １（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ,ＭＴＳ １）是１９９４年由 Ｋａｍｂ［１］与 Ｎｏｂｏｒ［２］首先报道的一种新型抑癌基因,其基因编码产物是细胞周期素依赖性激酶（ＣＤＫ）的抑制蛋白－Ｐ１６。Ｐ１６蛋白可通过与ＣＤＫ４结合而使其失活,从而阻止细胞由Ｇ１期进入Ｓ期并抑制细胞的异常分裂及增殖。瘢痕疙瘩是机体在创伤修复过程中结缔组织异常增殖所形成的肿块［１］。研究表明,瘢痕疙瘩成纤维细胞在细胞增殖及ＤＮＡ合成代谢等方面均明显高于正常成纤维细胞和瘢痕成纤维细胞（ＫＦｂ［４］…     

热损伤角质形成细胞培养上清对真皮成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及基质金属蛋白酶1表达的影响

目的探讨角质形成细胞(keratinocytes,KC)热损伤后对真皮成纤维细胞(fibroblasts,Fb)Ⅰ、Ⅲ型胶原及基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase 1,MMP-1)表达的影响。方法分离培养人正常Fb及KC,分别建立KC、Fb热损伤模型;收集正常及热损伤12 h后细胞培养上清,并配制成浓度为50%的细胞条件培养液。根据培养液不同将第3～5代Fb分为3组,分别采用含50%热损伤KC培养上清(A组)、含50%正常KC培养上清(B组)的条件培养液及单纯DMEM(C组)培养,24 h后收集3组细胞;另于培养0、1、2、6、12、24、48 h分别收集A组细胞。采用含50%热损伤Fb培养上清的条件培养液培养Fb,于0、1、2、6、12、24、48 h收集细胞。采用实时荧光定量PCR检测各时间点KC热损伤条件培养上清对FbⅠ、Ⅲ型胶原及MMP-1 mRNA表达影响,以及Fb热损伤条件培养上清对Fb MMP-1mRNA表达影响。结果 KC热损伤条件培养上清培养24 h,A组Ⅰ、Ⅲ型胶原及MMP-1 mRNA相对表达量均显著高于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05)。培养2、6、12、24、48 h,A组Ⅰ、Ⅲ型胶原及MMP-1 mRNA相对表达量均高于0 h(P<0.05),1 h与0 h差异无统计学意义(P>0.05);随培养时间延长相对表达量逐渐增高,2 h后各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Fb热损伤条件培养上清培养1、2、6、12、24、48 h,MMP-1 mRNA相对表达量与0 h比较,差异均有统计学意义(P<0.05);培养2 h后相对表达量逐渐降低,各时间点间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论热损伤后KC培养上清对FbⅠ、Ⅲ型胶原及MMP-1的表达具有调控作用。     

严重烧伤大鼠血清对脂肪间质干细胞生物学特性的影响

目的 探讨严重烧伤大鼠血清对体外培养的大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)生物学特性的影响.方法 取雄性SD大鼠双侧腹股沟脂肪组织,采用胶原酶消化法、分离纯化大鼠ADSCs,取第3代细胞,采用流式细胞仪检测细胞表面标志物,行成脂成骨诱导分化鉴定;ADSCs传代后按随机数字表法分为10％胎牛血清组(正常培养组)、10％正常大鼠血清组,10％烧伤大鼠血清组,采用噻唑蓝(MTT)法测定各组细胞的生长曲线.通过流式细胞仪检测各组细胞的生长周期、Real-time PCR法检测各组细胞血管内皮生长因子(VEGF)、凋亡相关因子Caspase-3的表达情况.结果 分离培养的ADSCs传至第3代时形态规则,经流式细胞仪检测,所培养的ADSCs均表达CD29、CD90、CD105,阳性率分别为88.6％、99.7％、92.8％,而CD31、CD34、CD45阳性率分别为4.4％、4.7％、3.3％;经诱导培养后可向成骨成脂分化.MTT法检测结果显示:10％烧伤大鼠血清组细胞增殖较快,各时间点吸光度值(A值)明显高于10％胎牛血清组及10％正常大鼠血清组.流式细胞仪检测结果显示:培养1周后10％烧伤大鼠血清组、10％正常大鼠血清组、10％胎牛血清组ADSCs G1期细胞比例分别为:(72.20±5.13)％、(83.50±4.74)％、(90.20±6.37)％;S期细胞比例分别为:(21.40±2.84)％、(12.50±1.96)％和(8.60±1.31)％,10％烧伤大鼠血清组ADSCs G1期细胞比例显著低于10％正常大鼠血清组、10％胎牛血清组(t=2.39、4.86;P ＜0.05);10％烧伤大鼠血清组ADSCs S期细胞比例显著高于10％正常大鼠血清组、10％胎牛血清组(=5.54,7.93;P＜0.01).Real-Time PCR检测结果显示:10％烧伤大鼠血清组VEGF的表达明显上调,Caspase-3表达显著下调与10％正常大鼠血清组、10％胎牛血清组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 10％烧伤大鼠血清可明显促进ADSCs的增殖、抑制细胞凋亡发生、促进ADSCs的分泌功能,严重烧伤后可望移植ADSCs用?     

横断毛囊体外再生的形态学研究

目的：研究毛囊横断后再生的条件，探索毛囊干细胞的初步定位．方法：将人头皮分离成游离的毛囊，共进行了8批横断毛囊培养，每批培养毛囊约30根，每批分3组，从不同位置(紧贴毛球、毛囊下1／3处、毛囊下1／2处)横断毛囊后进行培养，观测毛囊的生长情况及形态学改变．结果：紧贴毛球上方或在毛囊下1／3横断，上段毛囊大部分可以再生出新毛球样结构，毛囊可继续生长，上段毛囊平均生长长度分别为0．78mm和0．67mm，可生长比例分别为75％和70％；在毛囊下1／2横断，上段毛囊可生长比例仅为12．5％，明显低于前两组(P＜0．01)．结论：在一定位置横断毛囊，上段的毛囊细胞可以发生增殖分化，毛囊可以继续生长，并再生出新的毛球样结构，表明上段毛囊是其干细胞所在地．     

hEGF cDNA导入培养的人角朊细胞及其表达

目的 观察外源性人表皮细胞生长因子（ｈＥＧＦ）基因导入正常导入正常角朊细胞后,能否表达及分泌ｈＥＧＦ;为深入探讨ｈＥＧＦ的作用机制及临床应用奠定物质基础。方法 脂质体包埋ｈＥＧＦ－ｃＤＮＡ的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｈＥＧＦ转染人角朊细胞,经Ｇ４１８筛选,克隆,扩大及传代培养转基因的角朊细胞,特异性ｎｃｏ探针原位杂交显示转基因细胞内的质粒载体,ｈＥＧＦ抗体免疫细胞化学法观察转基因细胞内ｈＥＧＦ的表