SV40病毒对体外培养的人角朊细胞的转化

目的：研究ＳＶ４０病毒对人角朊细胞的体外转化作用以及转化后细胞生物学特性的改变。方法：采用体外共培养法以ＳＶ４０野生型病毒感染人包皮角朊细胞,观察病毒基因在细胞内的表达以及细胞表型的改变情况。结果：分离获得了可长期体外培养的ＳＶ４０转化细胞克隆,已传２３代以上,体外存活超过２５０ｄ;ＤＮＡ印迹实验显示ＳＶ４０大Ｔ基因已整合至细胞染色体内,间接免疫荧光检测示多数细胞胞核内有大Ｔ基因产物的表达;转化细     

pcDNA3-hbFGF转染角朊细胞对真皮成纤维细胞增殖的生物学效应

目的：观察含外源性人碱性成纤维细胞生长因子（ｈｂＦＧＦ）基因的角朊细胞（ＨＫ）,对真皮成纤维细胞（ＨＤＦｉｂ）增殖的影响;探讨转ｈｂＦＧＦ基因ＨＫ对创面愈合的生物学效应及作用机理,为这种转基因ＨＫ细胞用于创面基因治疗的可行性提供实验依据。方法：收集含真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｈｂＦＧＦ的ＨＫ细胞培养上清,加入培养的ＨＤＦｉｂ细胞内;ＭＴＴ法测定细胞的增殖率、＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定细胞ＤＮＡ合成率     

烧伤患者血清对培养人血管内皮细胞粘附分子ICAM-1 和PECAM-1表达的影响

目的：探讨烧伤早期血管内皮细胞损伤机理,方法：以培养脐静脉血管内皮细胞（ＥＣ）模型与烧伤患者早期血清（ＥＢＰＳ）共同孵育１,４,１２及２４ｈ,应用免疫细胞化学和图像分析技术检测ＥＢＰＳ对培养ＥＣ细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）、血小板内皮细胞粘附分子－１（ＰＥＣＡＭ－１）表达的影响．以相应浓度的正常人血清和小牛血清作对照．结果：ＥＢＰＳ能迅速上调ＥＣ粘附分子ＩＣＡＭ－１,ＰＥＣＡＭ－１的表达,其表达效应与ＥＢＰＳ浓度及作用时间相关,２００ｍＬ／ＬＥＢＰＳ作用２４ｈ,阳性细胞率和阳性细胞粘附分子的表达最高．结论：ＥＢＰＳ可促进ＥＣ粘附分子的表达．ＥＣ粘附分子表达增强,能促进循环ＷＢＣ与ＥＣ粘附,越血管迁移和向组织中浸润,可能是介导烧伤早期血管内皮细胞损伤的重要原因．     

The inhibitory effect of calcitonin gene-related peptide on adriamycin induced acute cardiotoxicity in cultured myocardial cells

Adriamycinisananthracyclinedrugwithawidespectrumofclinicalantineoplasticactivity.However,theclinicalapplicationofthedrugislimitedowingtoitsdose--dependentcardlotoxicity.Thecardiotoxicityofadriamycinhasbeenwellestablishedthroughbothphysiologicalandultrastructuralstudies,andhasbeenshownafterbothchronicandacutetreatmentll.2].Calcitoningene--relatedpeptide(CGRP),aregulatoryneuropeptidediscoveredin1982f".iswidelydistributedintheheartandbloodvessels.Thepeptideisoneofthemostpowerfulvasodilatorsknow…     

用毛囊隆突细胞构建复合皮的实验观察

目的 以人毛囊隆突细胞为种子细胞体外构建组织工程复合皮，在体观察其功能性修复全层皮肤缺损的可行性。方法 胶原酶消化法体外分离培养人毛囊隆突细胞和毛乳头细胞，实验分为A、B两组。A组将毛囊隆突细胞与毛乳头细胞按1：2混合，接种于胶原包被的聚羟基乙酸纤维支架中；B组单纯接种相同数量的毛乳头细胞。而后覆盖角质形成细胞膜片，构成组织工程复合皮，移植于裸鼠全层皮肤缺损创面。观察创面愈合情况，分别于术后2、4、6周在光学显微镜下观察移植物组织学变化。结果 组织工程复合皮能够有效修复A、B两组裸鼠全层皮肤缺损。术后2周，A、B组创面均可见完整的表皮及真皮结构。术后4-6周，A组复合皮表皮层明显增厚并形成基膜的钉突，可见毛囊样结构；B组仅表皮层有所增厚但基膜平整，未见钉突和毛囊结构形成。结论 以聚羟基乙酸真皮基质为支架，用角质形成细胞、毛囊隆突细胞和毛乳头细胞共同构建的组织工程复合皮，可以有效修复裸鼠全层皮肤缺损。其中毛囊隆突细胞参与了创面解剖修复，同时可能引导组织结构和功能的修复。     

褪黑素对烫伤大鼠毛囊细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 了解早期应用褪黑素对烫伤大鼠皮肤残留毛囊细胞的保护作用.方法 将18只雄性SD大鼠分为烫伤组、治疗组和假伤组,每组6只.在烫伤组和治疗组大鼠背部造成30%TBSA的深Ⅱ度烫伤,假伤组浸入37℃水中25 s致假伤.烫伤组和治疗组大鼠在伤后1 h补充平衡盐液抗休克,假伤组不补液.治疗组大鼠伤后1 min和8、16 h腹腔注射褪黑素溶液(10 mg/kg).烫伤组和假伤组腹腔注射相同剂量的乙醇-等渗盐水溶液(两者体积比为1:99).于伤后6、12、24 h采集各组大鼠致伤区皮肤组织,检测丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量.采用原位缺口末端标记法和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)免疫组织化学法,检测致伤区皮肤组织残留毛囊细胞凋亡情况.结果 烫伤组大鼠伤后各时相点皮肤组织MDA含量均显著高于假伤组(P＜0.01),且伤后12 h升高达峰值;治疗组MDA含量较烫伤组明显降低(P＜0.05).GSH的变化情况与MDA相反.在荧光显微镜下可见残留的毛囊细胞呈蓝色,凋亡细胞呈绿色.烫伤组伤后6、12、24h细胞凋亡率分别为(20.2±3.4)%、(31.2±3.6)%、(22.4±2.7)%,均明显高于假伤组[(4.3±2.3)%、(5.1±2.5)%、(4.1±2.4)%,P＜0.01].治疗组伤后6、12、24 h细胞凋亡率分别为(10.9±3.2)%、(19.1±3.7)%、(13.1±3.4)%,均明显低于烫伤组(P＜0.05).烫伤组各时相点caspase-3阳性细胞评分均高于假伤组(P＜0.01),而治疗组均低于烫伤组(P＜0.05).结论 大面积深Ⅱ度烫伤后,大鼠氧化应激水平与毛囊细胞凋亡率关系密切;早期应用褪黑素,可以改善机体的氧化应激程度,进而对皮肤残留的毛囊细胞产生抗凋亡作用.     

强化胰岛素对严重烧伤大鼠心肌细胞TNF-α表达的抑制作用

目的探讨强化胰岛素对严重烧伤大鼠心肌细胞TNF-α表达的抑制作用及其可能机制。方法健康雄性SD大鼠18只,右颈静脉及左心室插管,随机均分为3组:假伤组,大鼠给以假烫;烧伤组,制作30%TBSAⅢ度烫伤后,常规给以液体复苏;强化组,烫伤后给以强化胰岛素治疗,液体总量同烫伤组。测定伤后0、1、2、3、4、5、6h的血糖及左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LV-EDP)。伤后6h处死动物,留取左心室组织,分别用ELISA和定量PCR法测定TNF-α蛋白及其mRNA水平,Westernblot观察p-IκBα和IκBα变化。同时用烧伤血清培养新生鼠心肌细胞,观察胰岛素及其活化抑制剂LY294002对p-IκBα水平的影响。结果与假伤组比较,烧伤组动物伤后出现应激性高血糖反应,LVSP降低,LVEDP升高,左心室组织TNF-α蛋白及mRNA水平升高,p-IκBα蛋白表达增高,IκBα蛋白表达降低(P<0.05或0.01)。烧伤大鼠经强化胰岛素治疗后,血糖维持在4.5～5.2mmol/L之间,左心室功能得到明显改善,左心室组织TNF-α蛋白及mRNA水平显著降低,κBα的磷酸化和降解明显减轻(P<0.05或0.01)。LY294002能够消除胰岛素对烧伤血清培养心肌细胞κBα磷酸化的抑制作用。结论强化胰岛素可能通过减少IκBα的磷酸化降解而降低NF-κB活化,进而抑制心肌细胞TNF-α的转录与表达,发挥改善心肌功能的作用。     

Ⅱ度烧伤病人皮肤角朊细胞ICAM-1的表达

目的探讨Ⅱ度烧伤创面愈合过程中角朊细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达及其意义。方法应用免疫组织化学染色技术,对烧伤后不同时间Ⅱ度烧伤皮肤组织角朊细胞 ICAM-1的表达进行动态观察。8例健康人皮肤,6例烧伤病人正常皮肤及8例Ⅱ度烧伤愈合后增生性瘢痕组织为对照组。结果健康人正常皮肤基底层细胞 ICAM-1可低表达,烧伤病人正常皮肤基底层细胞ICAM-1可表达增强。Ⅱ度创面基底层细胞伤后1周内 ICAM-1表达轻度增高,2周内明显增强,2～4周稳定高表达,ICAM-1呈极性分布,新生上皮多层角朊细胞 ICAM-1表达显著增强,ICAM-1阳性细胞呈长柱状排列。结论Ⅱ度烧伤皮肤角朊细胞 ICAM-1表达增强可能与创基炎性细胞浸润相关,具有诱导角朊细胞增殖、迁移,加速上皮化的作用。     

大鼠烫伤后肾上腺内含降钙素基因相关肽神经的改变

目的探讨皮肤烫伤早期大鼠肾上腺内降钙素基因相关肽(CGRP)变化规律,为阐明烫伤后肾上腺内分泌功能改变的机理提供资料。方法采用15%深Ⅱ度大鼠烫伤模型,以免疫组化方法分别检测烫伤后不同时相点肾上腺皮质、髓质 CGRP 免疫反应阳性神经和细胞分布密度的改变。结果①在肾上腺被膜,皮质,髓质均有含 CGRP 神经分布,其中髓质更为密集。在髓质可见含 CGRP 神经与 CGRP 免疫反应阳性细胞密切接触;②烫伤早期大鼠肾上腺皮质和髓质含 CGRP神经的分布密度均下降,但髓质内 CGRP 免疫反应阳性细胞的分布密度上升。结论降钙素基因相关肽可能是烫伤大鼠肾上腺功能改变的影响因素之一。