以受体为靶点的药物筛选模型的建立及应用

在创制新药的研究中寻找和发现具有生物活性的先导化合物是至关重要的环节之一,而对大量化合物进行活性筛选则是发现先导化合物的主要手段和途径。近年来,我们应用以受体为靶点的药物筛选模型筛选新药技术取得了一定的成果。所谓受体配体结合技术,就是利用从器官中分离出细胞膜受体或重组技术制备的受体作为筛选模型,     

内皮素-1受体拮抗剂的筛选和药理学研究

目的对军事医学科学院毒物药物研究所合成的系列内皮素受体拮抗剂进行筛选,并对有效化合物进行抗肺动脉高压的药理学研究。方法放射配体-受体结合实验测定受试化合物对ETA和ETB受体亚型的亲和力;在ET-1诱发离体大鼠主动脉环收缩、整体大鼠颈动脉压升高实验模型上进行生物活性筛选;在野百合碱诱发大鼠肺动脉高压实验模型上对受试化合物进行抗肺动脉高压的药效学研究。结果部分化合物与ETA受体的亲和力比与ETB受体的亲和力高万倍以上,并能有效地抑制ET-1诱发的离体大鼠主动脉环收缩,其中1μmol.L-1的受试化合物ETP-508可使ET-1累加浓度收缩效应曲线平行右移,且最大效应不变。此外,3.7μg.(0.5ml)-1.kg-1ET-1所致的大鼠体动脉压升高也可被2mg·kg-1ETP-508等化合物静脉注射所阻断;更进一步,ETP-508和BQ-485静脉给药(0.4mg.h-1)还可逆转80mg·kg-1野百合碱皮下一次注射诱发的大鼠肺动脉高压。结论以上结果提示,ETP-508和BQ-485是高选择性的ETA受体竞争性拮抗剂,能有效地抑制野百合碱诱发的大鼠肺动脉高压。     

烟碱样胆碱能受体（N-AChR）的分离提纯以及在药理毒理研究中的应用

本报告了从丁氏双鳍电鳐电器官中分离纯化N—AChR，研究其生化性质，并在毒物、药物、实验性重症肌无力（EAMG）等方面进行了研究。一、N—AChR的分离提纯：N—AChR膜片可用于研究天然状态下受体性质和功能。我们用几次蔗糖密度连续梯度和不连续梯度离心分离，得到的受体膜片无活性胆碱酯酶，比活性达5nmol α-神经毒素结合点／mg蛋白。采用眼镜蛇α-神经毒素为配基制成的亲和层析柱，提纯了N—AChR蛋白，达到了等电聚焦纯，等电点为5．2。发现PAGE出现两条带，     

电鳐电器官膜上的高特异性、低亲和力TCP结合部位

本研究对电鳐电器官中的膜受体与神经性毒剂和重活化剂间的作用进行了探讨。发现在电鳐电器官中有一个高特异性、低亲和力的 2 -噻吩基 -哌啶基 -1,1-环己烷 ( TCP)结合位点 ,这个结合位点具有可饱和性。 TCP和苯环利啶 ( PCP)为同类物 ,它们作用于 TCP/ PCP同一位点。 [3H] TCP结合的 Bmax=1.16pmol/ mg protein,KD=16.13nmol/ L。有机磷毒剂能竞争性地抑制标记化合物 [3H] TCP与 TCP结合位点的结合 ,终浓度 10 - 3mol/ L的 Vx,梭曼 ,沙林及塔崩分别可产生 81% ,48% ,41%及38%的抑制。而膦酰化乙酰胆碱脂酶的四种重活化剂 HI-6、LuH6 、2 -PAM及 TMB4也对 [3H] TCP与 TCP受体的结合产生5 3%、48%、30 %及 30 %的抑制     

α-促黑激素类似物与黑素皮质素受体3和4亲和活性的筛选*

目的:筛选具有中枢黑素皮质素受体3和4(melanocortin 3 and 4 receptors,MC3R,MC4R)高亲和活性和选择性的新化合物(α-促黑激素类似物)。方法:从大鼠下丘脑及周围组织中提取富含MC3R和MC4R的膜蛋白,进行放射标记的α-促黑激素([125I]-NDP-α-MSH)配体与MC3R,MC4R的结合实验,求出受体最大结合容量(Bmax)和平衡解离常数(Kd)。用10 nmol.L-1浓度的与MC3R和MC4R高亲和活性的已知激动剂(PT141)和已知阻滞剂(SHU9119)及各受筛化合物进行竞争结合或抑制实验,比较并找出与MC3R和MC4R具有高亲和活性的新化合物。结果:饱和实验求出Bmax=64.81 pmol.g-1蛋白,Kd=0.768 2 nmol.L-1。受筛化合物中LK-FS024与MC3R和MC4R的亲和活性最高,与PT141几乎相同(相对结合率为97%)。结论:LK-FS024与MC3R和MC4R有较高亲和活性,可能是一个具有较好药理研究价值的α-MSH类似药。