RNA干扰抑制乙酰肝素酶对肺腺癌细胞A549增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨抑制乙酰肝素酶表达对人肺腺癌细胞A549增殖、侵袭和凋亡的影响.方法 构建靶向人乙酰肝素酶基因短发夹状双链RNA(shRNA)真核表达质粒(pshRNA-Hpa),用脂质体将其转入A549细胞,建立稳定转染细胞株系,经逆转录.PCR和Western blot法检测转染效率后,分别用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Transwell侵袭实验和流式细胞术(AnnexinV-FITC/PI双染法)检测其对A549细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.采用Western blot法检测转染后磷酸化蛋白激酶B(PKB/Akt-Ser473)的表达.结果 转染pshRNA-Hpa的A549细胞乙酰肝素酶mRNA及蛋白表达明显低于未处理A549细胞,抑制率分别为54.09%和48.26%,细胞增殖速度减缓,侵袭能力降低,流式细胞术显示早期细胞凋亡率达(12.53±0.34)%,较空白对照组、空载体转染细胞组和阴性对照组明显增加(P＜0.01).同阴性对照质粒相比,转染pshRNA-Hpa的A549细胞Akt-Ser473的磷酸化水平降低52.15%.结论 靶向乙酰肝素酶重组shRNA质粒pshRNA-Hpa能有效抑制A549细胞乙酰肝素酶的表达,并可能通过下调磷酸化蛋白激酶B途径抑制细胞的增殖侵袭、促进细胞的凋亡.     

hsa-miR-125a-5p通过上调Rock-1表达促进肺癌细胞侵袭

背景与目的 MicroRNAs(miRNAs)是广泛存在于真核生物体中的内源性非编码的小分子RNA,通过与靶mRNA不完全互补连接的方式转录后调控靶基因的表达,影响了生物的许多复杂的生命过程.本研究探讨了hsa-miR-125a-5p促进肺癌细胞侵袭的作用机制.方法 应用microRNA.org靶基因预测资源预测hsa-miR-125a-5p的靶基因及其结合位点,并进一步根据预测结果用RT-PCR和Western blot的方法榆测了Rock-1的mRNA及蛋白的表达情况.用Rock-1抗体阻断的方法,检测转染正义的hsa-miR-125a-5p 2'-O-甲基寡核苷酸后A549细胞侵袭能力的变化.结果 转染正义的hsa-miR-125a-5p 2'-O-甲基寡核苷酸36h后,A549细胞中Rocb-1 mRNA和蛋白表达均增加,在转染反义的hsa-miR-125a-5p 2'-O-甲基寡核苷酸的A549细胞中则减少.Transwell小室的结果显示,与未阻断组相比较,阻断Rock-1后,转染正义的hsa-miR-125a-5p 2'-O-甲基寡核廿酸的A549细胞侵袭能力减弱.结论 hsa-miR-125a-5p能够上调Rock-1的表达,并促进肺癌细胞侵袭.