云南文山铁皮石斛居群的初步评价

目的初步评价云南省文山州8个铁皮石斛居群的遗传多样性,主要植物学性状和多糖含量。方法采用ISSR技术,对各铁皮石斛居群进行DNA指纹图谱检测;调查各居群铁皮石斛的主要植物学性状以及测定多糖含量。结果筛选出10条引物,共扩增50条DNA片段,其大小在0.1～3.0 kb之间,其中37条谱带具有遗传多态性,占74.0%。Shannonindex居群平均水平为0.164 1,物种水平为0.366 1。Nei’S genetic identity居群平均水平为0.1045,物种水平为0.240 9。居群遗传一致度和遗传距离的变化范围分别为0.696 8～0.967 5和0.033 0～0.361 2,居群间基因分化系数为0.562 6。各铁皮石斛居群的主要植物学性状存在明显的差别,P3、P5和P6居群的株高和节距明显高于其他居群。多糖含量测定结果表明各居群的含量变化范围为20.55%～25.23%,其中P9、P6和P2居群的多糖含量显著高于P3居群,其他居群间无明显差异。结论云南省文山州各铁皮石斛居群间的遗传多样性较小,主要植物学性状存在明显差别,多糖含量变化不大。     

铁皮石斛蔗糖合成酶基因的克隆及表达分析

目的:克隆铁皮石斛Dendrobium officinale蔗糖合成酶基因并对其表达分析,为研究铁皮石斛多糖合成与蔗糖合成酶活性关系及调控表达提供理论依据.方法:基于GenBank上已知的蔗搪合成酶基因SS同源序列,应用RT-PCR和RACE等方法,克隆铁皮石斛蔗糖合成酶基因全长,将目的片段转化大肠杆菌表达菌株BL21中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析.结果:成功克隆了铁皮石斛蔗糖合成酶基因,该基因cDNA全长2 424 bp,编码807个氨基酸(命名为DOSS1),登录号HQ856835,该基因氨基酸序列与兰科植物Moluara yellow(AF530568)同源性达到95%,与Oncidium goldiana(AF530567)同源性达到90%,与禾本科植物的SS基因同源性在80%以上.并对其进行大肠杆菌原核表达诱导,诱导的工程菌能明显表达出一条相对分子质量约为92×10(3)左右的蛋白质,与理论相对分子质量基本相符.结论:成功克隆了铁皮石斛蔗糖合成酶基因,并诱导出一条与理论蛋白相对分子质量相符的蛋白条带.     

三七果实发育中生理生化的动态研究

目的对三七果实发育过程中的生理生化变化进行研究。方法对三七果实发育过程中的生长情况、干鲜质量变化、含水量变化及可溶性糖、淀粉和蛋白质的量进行动态测定。结果在三七果实的发育过程中含水量先升后降,于成熟时达到73.37%;果实的鲜、干质量随果实发育逐渐增加,发育前期质量增加明显;淀粉和蛋白质的量同样随果实发育而逐渐增加,但发育后期质量增加较快;而可溶性糖的量则先升后降,到后期又略有上升。结论三七果实于盛花期后80 d达到成熟;在发育过程中,含水量的下降伴随着果实鲜、干质量的不断增加,而果实内营养物质的贮存及利用与果实的发育程度密切相关。     

三七种子的后熟生理特性研究

目的:作者通过三七种子后熟生理特性的研究,以了解种子内部的生理生化变化规律,为三七种子的种源保存和育种研究奠定基础。方法:利用常规的生理生化测定方法对三七种子后熟过程中的贮藏物质含量、呼吸速率、酶活性等进行动态测定。结果:层积过程中三七种子的呼吸速率呈持续上升趋势,淀粉、可溶性蛋白和粗脂肪含量随种胚的发育逐渐下降,可溶性糖含量则逐渐增加,CAT,POD,SOD的活性随MDA含量的升高而上升。结论:三七种子的生理生化变化过程与种胚的形态发育过程相互配合共同完成其后熟发育。     

多花黄精遗传多样性和遗传变异规律研究

目的揭示多花黄精遗传多样性及地理分布特征。方法采用ISSR分子标记技术,对来自浙江、安徽、江西、福建、湖南、湖北6省20个种源118株多花黄精进行综合分析。结果 16条引物共扩增出130条清晰条带,其中多态性条带123条,平均多态百分率(PPL)为94.62%,种源内遗传多样性在33.85%～60.00%,平均Nei’s基因多样度(H_e)为0.1838,Shannon信息指数(I)为0.267 4,遗传分化系数(G_st)为0.529 3。UPGMA聚类分析显示,同一种源的种质基本上聚在一起,说明种源间的遗传分化大于种源内不同个体间的基因遗传分化;在遗传相似系数值等于0.61时可将118份种质聚为武夷山脉、武陵山脉和罗霄山脉、大别山脉、洞宫山脉和天目山脉4类。结论多花黄精具有丰富的遗传多样性,遗传变异与山脉密切相关,山脉之间的平原、水域隔离可能是导致群体间遗传分化的主要原因之一。研究结果对黄精种质资源保护、品种选育具有重要的理论价值与现实意义。     

铁皮石斛磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的克隆及表达分析

目的克隆铁皮石斛Dendrobium officinale磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(pepc)基因,并对其在F型和H型铁皮石斛中的表达进行分析,为研究铁皮石斛pepc基因的结构、功能提供依据。方法基于GenBank上已知的pepc基因的同源序列设计引物,应用RT-PCR和RACE等方法,克隆铁皮石斛pepc基因全长。采用荧光定量PCR方法研究pepc基因在2种铁皮石斛中的表达。结果成功克隆了铁皮石斛pepc基因,登录号为JF423930,该基因全长为3 560 bp,其中cds序列为2 895 bp,与兰科植物的同源性为80%左右,与其他科属植物的同源性达到70%以上,编码964个氨基酸。pepc基因在F型铁皮石斛中的表达量为H型的5.55倍。结论成功克隆了铁皮石斛pepc基因,且F型铁皮石斛pepc基因的表达量高于H型。     

多花黄精嫩芽主要营养与功效成分研究

为了揭示多花黄精嫩芽中主要营养与功效成分,采集浙江省杭州市临安区天目山镇横塘村麻泥角弄人工栽培的多花黄精(包括浙江磐安、浙江龙泉、安徽青阳3个种源)展叶前、展叶初期和展叶盛期3个不同时期的嫩芽,测定多糖、蛋白质、氨基酸、总酚等含量。结果表明:多花黄精嫩芽中多糖质量分数为2.34%~12.73%,约占根茎的1/3;蛋白质质量分数达107.75~192.49 mg·g-1,为根茎的5.50倍;总氨基酸质量分数为193.13~248.74 mg·g-1,为根茎的4.16倍,其中人体必需氨基酸占总氨基酸的35.57%~39.44%,接近FAO/WHO提出的理想蛋白质的标准(必需氨基酸占总氨基酸40%左右),味觉氨基酸(TaAA)达到160.12~208.29 mg·g-1,揭示了历代本草"初生苗,味极美"的物质基础;总酚质量分数51.21~58.76 mg·g-1,是根茎的2.96倍;对DPPH自由基清除率均达95%以上,明显优于根茎。因此,多花黄精嫩芽是一种非常优质的野菜与功能食品,具有很好的开发潜力。此外,多花黄精嫩芽中主要营养与功效物质与种源、采收季节等密切相关,加强品种选育、嫩芽培育技术研究,对提高嫩芽质量与产量十分重要。     

浙江七叶一枝花种质资源的化学评价

目的 测定浙江不同采集地野外七叶一枝花中主要活性成分甾体皂苷的含量,为筛选优质种质资源和适宜栽培地提供依据。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为Waters XBridge C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱,柱温：25 ℃,洗脱流速为1.0 mL·min^-1,测定12个不同采集地七叶一枝花中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量。结果 来自不同采集地的七叶一枝花种源间的重楼皂苷含量存在显著差异,有一半种源的皂苷含量达不到药典规定的标准,优质种源来自永嘉上桥头村,4种重楼皂苷之和为2.928%,明显高于其他种源。结论 浙南山区较适合七叶一枝花的人工种植。