辛伐他汀对UUO大鼠肾组织p-Smad2/3表达影响的实验研究

目的观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)/Smads信号传导途径在大鼠肾间质纤维化中的表达及辛伐他汀的干预作用。方法雄性大鼠分为假手术组、模型组和辛伐他汀组。单侧输尿管结扎术(unilateral ureteral obstruction,UUO)建立肾梗阻模型。于术后14d取材。应用HE染色观察肾脏病理变化,免疫组织化学对p-Smad2/3、Ⅰ型胶原蛋白进行定位和半定量观察。同时应用Western blot和反转录聚合酶链反应方法分别检测TGF-β1、p-Smad2/3、Ⅰ型胶原蛋白和(或)mRNA水平表达。生化检测血清胆固醇、甘油三酯水平。结果与假手术组相比,模型组梗阻肾TGF-β1、p-Smad2/3显著升高,同时Ⅰ型胶原蛋白也明显升高。辛伐他汀组均有显著改善。三组间血清胆固醇及甘油三酯水平无显著性差异。结论TGF-β1/Smads信号传导途径在肾间质纤维化形成中可能起着重要促细胞外基质沉积的作用。辛伐他汀可能通过非降脂途径改善肾间质纤维化。     

IgA肾病的预后及其影响因素

IgA肾病在全世界,特别在亚洲国家是最常见的原发性肾小球肾炎,由于在早期的报告中,多数患者肾功能正常,故曾被认为是反复发作的良性血尿综合征[1]。随后在长期的研究观察后,发现其预后变化相当大,20%~50%的患者在诊断后20年进展到慢性肾功能衰竭(CRF),68%肾功能稳定[1],仅5%~10     

RIP1介导的坏死性凋亡通过NF-κB通路调节肾小管上皮细胞炎症反应

目的:探讨受体相互作用蛋白1(RIP1)介导的坏死性凋亡对肾小管上皮细胞炎症的影响及其机制。方法:体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,应用肿瘤坏死因子α(TNF-α)联合Z-VAD-FMK刺激24 h。乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性实验检测细胞坏死百分比,Western blot检测观察RIP1、IKK-α和NF-κB p65的表达,Western blot和ELISA测定白细胞介素1β(IL-1β)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平,real-time PCR检测NF-κB p65的mRNA表达水平。进一步应用RIP1抑制剂necrostatin-1(Nec-1)和NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(PDTC)进行干预,检测上述指标。结果:与对照组比较,TNF-α联合Z-VAD-FMK刺激组(T/Z组)的HK-2细胞中cleaved RIP1蛋白水平明显升高,IKK-α和NF-κB p65的蛋白水平明显增高,LDH释放明显增多(P<0. 01)。Western blot和ELISA检测炎症相关指标IL-1β和MCP-1的水平均有明显升高,real-time PCR检...     

NF-KB、COX-2在高糖培养的肾小管上皮细胞中的表达及意义

目的探讨核因子KB（nuclearfactor-kappaB，NF-KB）／环氧化酶-2（cyclooxygenase2，COX-2）信号途径在高糖培养的肾小管上皮细胞增殖中的作用及意义。方法用正常糖和高糖培养基培养肾小管上皮细胞，24、48、72h后收集细胞，采用免疫细胞化学检测肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear autigen，PCNA）和NF-KB蛋白的表达变化，流式细胞术检测肾小管上皮细胞中NF-KB和COX-2蛋白的表达情况。结果①与正常糖组比较，高糖组肾小管上皮细胞PCNA表达增强；②正常糖组，NF-KB主要表达在肾小管上皮细胞的细胞浆内，而高糖组NF-KB表达增强，阳性表达主要定位于肾小管上皮细胞的细胞核内；高糖能够上调肾小管上皮细胞NF-KB和COX-2蛋白的表达；③NF-KB和COX-2呈显著正相关；同时COX-2蛋白表达与PCNA阳性率呈显著正相关。结论活化NF-KB，上调COX-2蛋白表达从而引起肾小管上皮细胞增殖可能是糖尿病肾脏损伤的机制之     

细胞因子信号传导抑制蛋白1对肿瘤坏死因子-α诱导的肾小管细胞凋亡的影响

目的观察细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HKC),应用脂质体2000分别转染pCR3.1/SOCS-1表达质粒和pCR3.1空质粒载体,G418筛选阳性克隆。给予TNF-α(20μg.L-1)进行刺激。采用Western blot检测SOCS-1、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、Caspase-3、Janus酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导和转录活化因子1(STAT1)、磷酸化JAK2(p-JAK2)和磷酸化STAT1(p-STAT1)的表达;流式细胞术和原位缺口末端标记法(TUNEL)观察HKC细胞凋亡情况。结果与对照组相比,TNF-α组肾小管上皮细胞凋亡明显增加,凋亡相关Cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,Bax/Bcl-2蛋白比率升高;SOCS-1过表达能够抑制TNF-α刺激引起的HKC细胞的凋亡,下调JAK2和STAT1的磷酸化水平及Cleavedcaspase-3蛋白的表达,降低Bax/Bcl-2蛋白比率。结论 SOCS-1过表达抑制TNF-α诱导的肾小管上皮细胞凋亡可能是通过抑制JAK/STAT信号通路活化实现的。     

叔丁基对苯二酚对早期糖尿病小鼠肾脏氧化应激损伤影响的实验研究

糖尿病肾病(DN)发病机制复杂,是多种因素综合作用的结果,氧化应激在DN发病中起重要作用.研究表明,抗氧化剂可以延缓DN的发生发展[1-2].近年发现,NF-E2相关因子-抗氧化反应元件(Nrf2-ARE)信号通路相互作用调节编码抗氧化蛋白,是细胞抗氧化反应的中枢调节者[3].而叔丁基对苯二酚(tBHQ)是Nrf2的激活剂,γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)是受Nrf2-ARE信号通路转录调节的抗氧化蛋白之一.     

SREBP-1在1型糖尿病大鼠肾脏的表达和胰岛素的干预性研究

目的探讨1型糖尿病大鼠肾脏脂质沉积和固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)的表达以及胰岛素处理的影响。方法以Wistar大鼠建立链脲佐菌素1型糖尿病模型并随机分为正常对照组,糖尿病模型组和胰岛素处理组。喂养2 wk后处死,测定肾皮质组织甘油三酯含量,油红O染色检测脂质沉积的部位;免疫组织化学、Western blot和原位杂交检测肾脏SREBP-1表达。结果与正常对照组相比,1型糖尿病大鼠肾脏甘油三酯含量明显升高,油红O检测示脂质沉积定位于肾近曲小管上皮细胞,肾小球内未见着色。胰岛素处理明显降低了甘油三酯含量,和糖尿病模型组相比差异有统计学意义。免疫组织化学检测SREBP-1定位于大鼠肾脏近曲小管上皮细胞胞质,糖尿病组表达量明显高于正常组和胰岛素处理组。Western blot证实了SREBP-1蛋白前体片段和成熟片段在糖尿病组的高表达,前体片段积分光密度比值为0.673±0.027,成熟片段为0.670±0.028,分别是正常组的1.86倍和1.77倍;胰岛素处理后SREBP-1蛋白前体片段表达下降了52.8%,成熟片段表达量下降了30.9%。原位杂交结果证实SREBP-1 mRNA定位于近曲小管上皮细胞胞质,糖尿病组表达明显升高,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);胰岛素处理后其表达明显下降。结论1型糖尿病大鼠肾近曲小管上皮细胞SREBP-1 mRNA和蛋白表达升高可能参与了肾脏脂质沉积,胰岛素处理可有效降低SREBP-1mRNA和蛋白表达。     

罗格列酮对高脂喂养大鼠肾小管上皮细胞SREBP-1、TGF-β1表达和细胞外基质沉积的影响

目的： 探讨高脂饮食对大鼠肾小管上皮细胞固醇调节元件结合蛋白-1（SREBP-1）、转化生长因子-β1（TGF-β1）表达和细胞外基质（ECM）沉积的影响以及罗格列酮的干预治疗。方法: 给予Wistar大鼠高脂饲料喂养并进行罗格列酮灌胃治疗3个月,进行血液生化检测。油红O检测肾脏脂质沉积情况,Masson染色检测肾脏细胞外基质沉积,SREBP-1、TGF-β1和FN蛋白表达检测采用免疫组织化学和Western blotting,原位杂交用于检测SREBP-1 mRNA的表达。结果: 罗格列酮有效避免了高脂饮食导致的大鼠血糖、血胰岛素和血甘油三酯的升高;高脂喂养组大鼠肾脏小管上皮细胞内出现了明显脂滴,小管外间质细胞外基质沉积增多,罗格列酮干预减少了脂滴和基质沉积;SREBP-1蛋白和RNA在高脂喂养组均呈高表达,明显强于正常对照组,经罗格列酮处理表达有显著下降,蛋白前体和成熟片段分别下降了27.39%和27.32%;致纤维化因子TGF-β1和细胞外基质成分之一的纤维黏连蛋白（FN）在高脂喂养大鼠肾脏的高表达均被罗格列酮干预治疗所避免,TGF-β1表达在罗格列酮干预组较高脂组降低了19.14%。结论: 罗格列酮可有效避免高脂饮食造成的大鼠肾小管上皮细胞SREBP-1、TGF-β1高表达、脂质沉积和细胞外基质堆积。     

骨形成蛋白7和转化生长因子β1在不同病理类型IgA肾病的变化

目的 观察转化生长因子β1（TGF-β1）和骨形成蛋白7（BMP-7）在不同病理类型IgA肾病的变化,并探讨其意义。方法 89例IgA肾病患者分成3组：A组为47例轻度系膜增生性IgA肾病;B组为29例中重度系膜增生性IgA肾病;C组为13例增生硬化或硬化性IgA肾病。检测患者的血压、尿蛋白量（24 h）、Scr和Ccr。免疫组化和ELISA方法测定患者肾组织冰冻切片及其血、尿中TGF-β1和BMP-7水平。计算患者病理切片硬化肾小球数、新月体数和间质纤维化面积百分比。结果 随着IgA肾病患者肾小球病变的加重,肾小管萎缩和肾间质纤维化增多,其血压、尿蛋白量（24 h）、Scr逐渐增加,除B、C两组间尿蛋白量（24 h）无显著差异外,其余各组间差异均有统计学意义（P＜0．05）。与A组比较,B组肾组织及血、尿TGF-β1明显增多,C组显著降低（P＜0．01）。肾组织冰冻切片及血、尿BMP-7随着肾脏病变的加重,水平逐渐下降（P＜0．01）;而且与Ccr呈正相关;与血压、Scr、尿蛋白量（24 h）、硬化肾小球数、新月体数、肾间质纤维化面积呈负相关。结论 TGF-β1在IgA肾病系膜增生严重时明显增加,肾脏广泛纤维化时明显降低,可能参与了IgA肾病肾间质纤维化的发生。BMP-7随肾脏病变的加重而明显降低,可能导致其抗肾纤维化作用减弱。