急速冷冻深度蚀刻技术及应用

电镜标本制作过程中，人为地引起组织细胞发生不少变化，致使在电镜下看到的超微结构，已与其生活状态有相当差距，而且这些差距随放大倍率的增高而加大，因而对组织细胞的生理构造及病理变化所做出的解释难免有谬误之处。Ｈｅｕｓｅｒ等〔１，２〕创立的急速冷冻深度蚀刻...     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及bax／bcl—2表达的影响

目的：探讨血管紧张素受体1拮抗剂（AT1Ra)对糖尿病肾脏细胞凋亡及凋亡相关基因的影响。方法：单侧肾切除大鼠腹腔注射STZ诱发糖尿病模型,每日灌胃给予AT1Ra氯沙坦（40mg/kg),共12周,采用原位末端标记法检测肾脏细胞凋亡情况,流式细胞术和免疫组化检测肾皮质Bax和Bcl-2表达,原位杂交检测bax和bcl-2 mRNA表达。结果：糖尿病组较对照组肾小球、肾小管凋亡细胞数明显增多,bax和bcl-2蛋白及mRNA表达增强,Bax/Bcl-2增高;氯沙坦治疗组较糖尿病组凋亡细胞数减少,bax表达减弱,bcl-2表达增强,Bax/Bcl-2降低。结论：氯沙坦可能通过影响凋亡相关基因bax和bcl-2表达而抑制肾脏细胞凋亡,从而发挥肾脏保护作用。     

贲门癌组织p53、mdm2蛋白表达的研究

贲门癌是我国 ,特别是北方地区常见的恶性肿瘤 ,预后很差。近年来的研究提示 ,其流行病学、发病危险因素及临床特征与胃远侧部肿瘤有明显差异[1] ,因而有必要将其作为一个独立的疾病进行研究。癌基因ｍｄｍ 2及抑癌基因 ｐ5 3因在肿瘤中非同寻常的密切关系 ,成为近年来肿瘤分子生物学研究的热点 ,然而该机制在贲门癌中是否发挥作用 ,目前国内外尚未见相关报道。本研究应用免疫组织化学技术及流式细胞术 (ＦＣＭ )对 37例贲门癌组织的 ｐ5 3及ｍｄｍ 2蛋白表达进行定位、定量分析 ,并分析了这两种蛋白表达之间以及两者与贲门癌各项临床病理特…     

磷酸化的cAMP反应元件结合蛋白1在糖尿病大鼠肾小球中表达增强

目的探讨磷酸化的cAMP反应元件结合蛋白1(P-CREB1)在糖尿病大鼠肾组织中的表达特征及与细胞外基质积聚的关系。方法雄性Wistar大鼠切除右肾2周后随机分为对照组和糖尿病组,用链脲佐菌素复制糖尿病模型。分别于1、2、4、8和12周用免疫组化检测纤维黏连蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)及P-CREB1的表达,Western印迹和RT-PCR检测肾皮质CREB1磷酸化(活性)及mRNA的表达。结果糖尿病组FN与LN在4周时开始升高,并持续到12周。CREB1的活性及其mRNA在2、4和8周增高,在12周时降至正常。结论CREB1可能在糖尿病肾病细胞外基质积聚中发挥一定作用。     

糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡与Bax和Bcl-2基因表达

目的　观察糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡、Bax和 Bcl- 2表达及二者的相关性。　方法　单侧肾切除大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病 ,采用原位末端标记法检测肾脏细胞凋亡 ;流式细胞术和免疫组化检测肾皮质 Bax和 Bcl- 2表达水平 ;原位杂交检测 Bax和 Bcl- 2 m RNA表达 ,并观察尿蛋白、BU N、尿肌酐等反映肾功能的有关指标。　结果　在制模后 2、4、8、12周时 ,糖尿病组大鼠较对照组肾小球、肾小管凋亡细胞数明显增多 ,Bax、Bcl- 2蛋白和 m RNA的表达显著增强 (P<0 .0 5 )。随着大鼠糖尿病病程延长 ,肾功能恶化 ,肾脏凋亡细胞数逐渐增多 ,Bax表达亦逐渐增强 ,Bax/Bcl- 2比增加 ,且肾脏凋亡细胞数与 Bax及 Bax/Bcl- 2比具有相关性 (P<0 .0 5 )。　结论　肾脏凋亡细胞的不断增加可能是糖尿病肾病发生、发展的原因之一 ,Bax和 Bcl- 2可能参与肾脏细胞凋亡的调控。     

敲低Txnip抑制高糖诱导的人肾小管细胞系凋亡

目的观察敲低Txnip对高糖诱导人肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法将体外培养人肾小管上皮细胞分为正常糖组、高糖组、高糖+质粒载体对照组及高糖+shRNA组。采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞ROS水平;Western blot检测caspase-3、cleaved caspase-3、BAX、BCL-2、P38 MAPK、P-P38 MAPK及细胞色素c的表达。结果与正常糖组相比,高糖组肾小管上皮细胞ROS产生和细胞凋亡明显增加(P0.01),cleaved caspase-3和P-P38 MAPK表达增高,BAX/BCL-2比率明显升高以及细胞色素c易位(P0.05)。敲低Txnip能够显著抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡和ROS产生,下调cleaved caspase-3、和P-P38MAPK的表达,减少BAX/BCL-2比率和细胞色素c易位(P0.05)。结论敲低Txnip能够抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞凋亡可能是通过减少ROS产生,保护线粒体功能,抑制P38MAPK信号通路激活而实现的。     

糖尿病大鼠肾脏组织中XBP-1 s和ADRP的表达

目的：探索糖尿病大鼠肾脏拼接型X盒子结合蛋白1(spliced X-box binding protein-1, XBP-1s)和脂肪分化相关蛋白( adipose differentiation related protein, ADRP)在糖尿病大鼠肾脏组织中的表达及二者表达的相关性。方法腹腔注射STZ成功构建糖尿病大鼠模型,正常喂养2个月后,采用免疫组化和Western blot技术检测大鼠肾脏组织中XBP-1s和ADRP的表达。结果 XBP-1s和ADRP表达均定位于肾小管上皮细胞,对照大鼠相比,糖尿病大鼠肾小管上皮细胞中XBP-1s和ADRP表达均显著增高,分别升高2.017倍和1.544倍,差异有统计学意义(t=2．648、2．741,P<0．05)。进一步行相关性分析显示：大鼠肾脏组织中XBP-1s表达增强往往伴随着ADRP的表达增强(相关系数为0．723,P<0．05)。结论 XBP-1s表达升高可能是导致糖尿病大鼠肾脏组织中ADRP上调的因素之一。     

洛沙坦对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及Fas和Fas-L表达的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂（AT1Ra）对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及凋亡相关蛋白的影响。方法：单侧肾切除大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病模型,每日灌胃给予AT1Ra洛沙坦（40mg/kg),共12周。采用原位末端标记法检测肾脏细胞凋亡情况,流式细胞术和免疫组织化学检测肾皮质Fas和Fas-L表达。结果：糖尿病组较对照组肾小球、肾小管凋亡细胞数明显增多,Fas和Fas-L的表达亦显著增强;洛沙坦治疗组糖尿病组凋亡细胞数减少,Fas和Fas-L的表达减弱。结论：洛沙坦可能通过影响凋亡相关蛋白Fas和Fas-L的表达而抑制肾脏细胞凋亡,从而发挥肾脏保护作用。     

氯沙坦降低糖尿病大鼠肾脏肾上腺髓质素和内皮素的表达

目的探讨应用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体1拮抗剂对糖尿病大鼠肾脏肾上腺髓质素(ADM)、内皮素-1(ET-1)及其各自受体表达的影响。方法单侧切除大鼠肾,在其腹腔内注射STZ,诱发实验性糖尿病模型。随机将大鼠分为:右肾切除对照组(A组)、糖尿病组(B组)和氯沙坦治疗组(C组)。采用免疫组化检测ADM和ET-1的表达,W estern b lot检测ADMR和EDNR-A蛋白的表达,原位杂交检测ADM mRNA和RT-PCR检测ET-1 mRNA的表达。结果B组较A组各表达指标均显著增强,C组较B组各表达指标均减低。结论氯沙坦可能通过影响ADM、ET-1及其各自受体的表达,发挥对肾脏的保护作用。