特异性沉默Eca109 细胞系stat hmin 基因siRNA 表达载体的构建

 目的 构建并筛选特异性沉默stathmin基因的pSUPER-S逆转录病毒载体以及稳定表达的细胞克隆。方法 用DNA重组技术,将64nt能转录产生靶向stathmin小发夹RNA（shRNA）的寡核苷酸序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPER-EGFP,应用脂质体将重组逆转录病毒载体pSUPER-S转染细胞系Eca109,G418筛选建立稳定产生逆转录病毒的细胞克隆,RT-PCR检测转染细胞stathminmR-NA的表达。结果 重组逆转录病毒载体经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切,可见4692nt和285nt条带;测序结果表明插入序列正确;重组载体转染Eca109细胞,可表达绿色荧光蛋白（EGFP）,经G418筛选得到抗性细胞克隆,转染细胞stathmin mRNA的表达较对照组明显减弱。结论 特异性沉默stathmin基因的pSUPER-S逆转录病毒载体以及稳定表达的细胞系构建和筛选成功。     

果糖注射液对恶性肿瘤化疗患者血糖、血清胰岛素的影响

目的 观察果糖注射液对恶性肿瘤化疗患者的血糖、血清胰岛素水平的影响,并观察果糖注射液的安全性.方法 采用前瞻性单盲随机对照研究.比较应用5%果糖注射液和5%葡萄糖注射液的两组恶性肿瘤化疗患者血糖、血清胰岛素水平变化情况.结果 两组患者空腹血糖无明显差异,果糖注射液治疗组输液过程中血糖和血清胰岛素波动程度明显小于葡萄糖注射液对照组.绪论果糖注射液对恶性肿瘤化疗患者血糖和血清胰岛素影响较小,可在化疗过程中代替葡萄糖注射液以减少化疗应激引起胰岛素抵抗的发生.     

TUBB3-ASODN对食管鳞癌细胞Ec9706/P-1耐药性的影响及机制探讨

目的观察β-微管蛋白Ⅲ（TUBB3）反义寡核苷酸（ASODN）对食管鳞癌紫杉醇耐药细胞Ec9706/P-1耐药性的影响,并探讨其机制。方法将EC9706/P-1细胞分为A、B、C组,A组不作处理,B、C组分别加入无义寡核苷酸（NSODN）、TUBB3-ASODN转染24 h,加入100、10、1、0.1、0.001μg/ml的紫杉醇培养24 h。采用MTT法测算各组紫杉醇半数抑制浓度（IC50）及细胞耐药指数（RI）,采用流式细胞仪检测细胞周期,采用RT-PCR和免疫组化法检测TUBB3 mRNA及其蛋白。结果C组紫彬醇IC50为（7.78±1.15）μg/ml、RI为3.37,B组分别为（16.56±1.80）μg/ml、7.17,A组分别为（15.40±2.06）μg/ml、6.67,C组与A、B组相比,P均〈0.05。C组G0＋G1期细胞百分比为78.7%±2.3%,S期为14.3%±2.1%,G2＋M期为7.0%±0.9%;B组分别为87.3%±1.2%、6.9%±0.4%、5.8%±0.8%,A组分别为85.9%±1.1%、7.5%±0.5%、6.7%±0.9%,C组G0＋G1期、S期细胞百分比与A、B组比较,P均〈0.05。C组TUBB3蛋白阳性率为33.68%±8.34%、TUBB3 mRNA为1.33±0.08,B组分别为62.96%±10.49%、1.59±0.06,A组分别为64.47%±11.75%、1.60±0.10,C组与A、B组相比,P均〈0.05。结论TUBB3-ASOND可增加Ec9706/P-1对紫杉醇的敏感性,TUBB3升高可能是食管鳞癌对紫杉醇产生耐药的机制之一。     

紫杉醇诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的 观察紫杉醇对胃癌细胞株BGC-823的体外诱导凋亡及对细胞周期的影响，探讨其治疗胃癌的作用机制。方法 利用流式细胞仪观察不同时间细胞的凋亡率以及细胞周期的变化。结果 紫杉醇诱导细胞凋亡，其凋亡率随时间的增加而增加，0，12，24，48小时细胞凋亡率分别为2．8％，6．0％，14．3％，16．0%；细胞周期也随着时间的不同而变化，与对照组相比，S期细胞减少，G2／M期细胞增多。结论 紫杉醇诱导细胞凋亡，有时间依赖性，其诱导凋亡的机制可能是通过G2／M期阻滞实现的。     

冬凌草甲素诱导结肠癌细胞凋亡的实验研究

目的 观察冬凌草甲素体外诱导人结肠癌HCT8细胞凋亡的作用。方法 利用光镜及流式细胞仪观察不同浓度冬凌草甲素诱导结肠癌HCT8细胞凋亡的作用。结果 冬凌草甲素可诱导HCT8细胞凋亡，且凋亡率随着浓度的增加而增加。结论 冬凌草甲素对HCT8细胞株具有体外抗肿瘤作用，其作用机制与诱导凋亡有关。     

胰岛素样生长因子-1受体在乳腺癌组织和正常乳腺组织中的表达

目的　探讨胰岛素样生长因子 1受体 (IGF 1R)在乳腺癌组织和正常乳腺组织中的分布和表达。方法　采用免疫组织化学方法 ,对乳腺癌组织和正常的乳腺组织中IGF 1R的表达情况进行检测分析。结果　乳腺癌组织中IGF 1R的阳性表达率均明显较正常乳腺组织高 (P <0 .0 5 )。结论　由此推断 ,IGF 1R在乳腺癌发生发展过程中发挥着重要作用。IGF 1R有可能成为临床乳腺癌诊断和判断预后的一个重要指标。     

结直肠癌术后辅以放疗、化疗的临床观察

目的探讨结直肠癌术后的有效辅助治疗,以积累临床经验,指导临床工作。方法选取我院诊治的320例患者,依随机的原则分为4组,A组共80例,术后不进行任何治疗;B组共80例,术后辅以放疗,C组共80例,术后辅以化疗,D组共80例,术后辅以放疗及化疗,观察各组的疗效及术后生存率。结果术后1年随访,生存率未见明显差别;术后2年随访,D组的生存率明显高于A、B、C组;术后5年随访,D组的生存率明显高于A、B、C组,B、C组的生存率明显高于A组。结论对结直肠癌患者术后应进行放、化疗,能明显提高临床疗效,临床中可以开展应用。     

全反式维甲酸对人食管癌细胞生长及survivin基因表达的影响

目的观察全反式维甲酸（ATRA）对人食管癌细胞株EC-9706的生长抑制作用以及凋亡抑制基因survivin表达的影响。方法实验组为1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5mol／L的ATRA,空白对照组为等量RPM11640。该剂对照组为同等量RPMll640和无水乙醇。）应用MTT比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT—PCR法测定survivin基因表达。结果ATRA作用后EC-9706细胞增殖受到抑制,呈时间和剂量依赖性,凋亡比例明显增加,survivinmRNA的表达随着作用时间的延长而呈逐渐下降趋势。结论ATRA对人食管癌细胞株EC-9706生长有抑制作用,同时可诱导其凋亡,可能与survivin基因表达下调有关。     

Stathmin基因在食管鳞癌中的表达及生物学意义

目的 探讨Stathmin基因在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其与ESCC发生、发展的关系.方法 应用原位杂交和免疫组织化学法检测3株食管鳞癌细胞EC9706、Eca109和EC-1及75例食管鳞癌组织、25例癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织中Stathmin mRNA和蛋白的表达,并分析Stathmin基因表达与临床病理特征的关系.结果 StathminmRNA和蛋白在3株食管鳞癌细胞EC9706、Eca109和EC-1中均呈高表达,阳性表达率>80%.在75例食管鳞癌组织标本中,Stathmin mRNA和蛋白的阳性表达率分别为82.7%和81.3%,与癌旁不典型增生组织及正常食管黏膜组织比较有显著性差异(χ2=19.204、25.03,均P<0.01).Stathmin mRNA和蛋白在食管鳞癌组织中的表达呈正相关(r=0.413,P=0.000).不同分化程度、有无淋巴结转移、肿瘤浸润深度和TNM分级的食管鳞癌组织之间Stathmin mRNA和蛋白表达差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 食管鳞癌细胞株及组织中Stathmin mRNA及蛋白高表达,与食管鳞癌的分化程度、淋巴结转移、肿瘤浸润深度及TNM分期显著相关,Stathmin可能与食管鳞癌发生发展有关.Stathmin对ESCC的早期诊断及预后判断均有重要意义.Stathmin有望成为理想的生物治疗靶点.     

全反式维甲酸对EC9706细胞体外增殖抑制及诱导凋亡作用

目的:观察全反式维甲酸(ATRA)对食管癌细胞体外增殖抑制及诱导凋亡的作用.方法:应用不同浓度(1×10-6、1×10-5、5×10-5 mol/L)ATRA体外处理人食管癌细胞EC9706(ATRA1、ATRA2、ATRA3组),并设不加ATRA的对照组,倒置显微镜下观察细胞的生长状态,HE染色后光镜下观察细胞结构的改变,应用MTT法测定细胞生长抑制率,免疫组织化学技术检测凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的表达情况.结果:经ATRA处理后,ATRA3组与对照组比较,细胞生长速度减慢,群体倍增时间延长(P均＜0.05);光镜下可见细胞形态趋向良性分化,细胞质内成熟细胞器增多,生长抑制率增加(P＜0.05).与对照组比较,3个ATRA组细胞Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达下降(P<0.01),且以ATRA2、ATRA3组为明显(P<0.05).结论:ATRA能有效抑制EC9706细胞增殖,其机制与Bax及Bcl-2蛋白表达调控有关.