弓形虫抗血清IgG的制备及其检测效果研究

目的比较弓形虫不同免疫原所制备抗血清 IgG 的检测效果,优选高效价的抗体诊断试剂。方法制备弓形虫的细胞质抗原(C)、代谢抗原(S)。用抗原 C、C S、S 及活虫(P)各免疫2只家兔,收集抗血清经纯化而获得 IgG 抗体(多抗)并制备酶标记抗体;用上述4种多抗与对应的多抗-HRP 组合成4种双抗体夹心型 ELISA,检测人血清 CAg 和 C、S 抗原,评价试剂的敏感性;抗血清与疟原虫、隐孢子虫等抗原进行交叉反应性试验,评价试剂的特异性;采用捕获法检测人血清 IgM 抗体,比较4种多抗-HRP 的检测效果。结果各种 ELISA 夹心法同步检测 CAg 阳性标本7例,阴性样本8例,均未出现假阴性和假阳性反应,其 OD 均值的 P/N 比值依次为 C C 组33.5、S S 组27.8、CS CS 组21.2、P P 组13.2;C 和 S 抗原的最低检出量均为0.5μg/ml;与其它寄生虫未出现交叉反应。4种多抗-HRP 同步检测IgM 抗体阳性标本3例,阴性样本7例,均未出现假阴性和假阳性反应,其 OD 均值的 P/N 值最高的是抗 C-HRP。结论 4种抗体用于检测人血清 IgM 抗体、CAg、C 和 S 抗原以及其它抗原的结果表明,各种抗体试剂均具有良好的敏感性和特异性,其中以抗 C 抗体试剂最为满意。(2)4种组合形式的夹心ELISA,检测弓形虫抗原的差异无统计学意义,表明弓形虫 C 和 S 抗原间存在着共同抗原成分。     

浙江省农村卫生适宜技术基层推广模式的探讨

目的:通过对弓形虫检测技术基层推广模式的研究,探讨农村卫生适宜技术推广的推广模式。方法:选取浙江省诸暨市、余杭区、富阳市、长兴县4个地区作为试验推广示范点,分别依社会公益型、技术服务型、技服实体型、纯市场型推广模式进行推广。从推广应用率、受检率、成本核算3个方面进行绩效评估。结果:技服实体型(余杭区)推广应用率达到97.0%,受检率达到38.1%,培训成本和推广成本也为4种模式中最低。结论:技服实体型推广模式在弓形虫检测技术基层推广中的效果最好。     

快速检测血吸虫抗体的乳胶微球层析法(DLIA)的建立和应用

目的建立一种快速、简便、敏感、特异的血吸虫病免疫诊断方法。方法用可溶性血吸虫虫卵抗原作为包被抗原,红色乳胶微球标记鼠抗人单克隆抗体为显色剂,建立一种快速检测血吸虫病患者血清抗体的乳胶微球层析法(DLIA),以该法分别检测血吸虫虫卵阳性者血清69份,健康人血清264份,华支睾吸虫病患者血清15份,广州管圆线虫病患者血清8份,钩虫、蛔虫、鞭虫混合感染者血清11份和卫氏并殖吸虫病患者血清19份,用ELISA平行检测作为对照。结果DLIA和ELISA法检测血吸虫虫卵阳性患者血清的敏感性分别为94.2%(65/69)和95.7%(66/69),检测健康人血清的特异性分别为97.4%(257/264)和94.7%(250/264),差异均无统计学意义(χ2=0.15和2.43,P0.05);两法检测华支睾吸虫病和广州管圆线虫病患者血清,钩虫、蛔虫、鞭虫混合感染者血清,均无交叉反应;两法与卫氏并殖吸虫病患者血清的交叉反应率分别为42.1%(8/19)和47.4%(9/19),差异无统计学意义(χ2=0.11,P0.05)。结论乳胶微球层析法检测血吸虫抗体具有比较敏感、特异、简便、快速和稳定的特点。     

人源弓形虫分离株的生物学鉴定及群体DNA含量分析

通过对不同分离株弓形虫抗原的分析,探讨弓形虫虫株间的差异性。取弓形虫ＣＡｇ阳性血液标本进行小鼠接种,对分离株进行生物学特性鉴定;采用流式细胞仪（ＦＣＭ）对分离株弓形虫速殖子进行群体ＤＮＡ含量分析。结果在５份ＣＡｇ阳性血液样本中分离到４株弓形虫,两者符合率达８０％;经生物学鉴定结果显示,４个分离株的形态大小、毒力及抗原性均与ＲＨ株弓形虫相似。上述５株弓形虫速殖子ＤＮＡ含量分析均呈明显规律性,即均有２     

激光对弓形虫速殖子的作用研究

本实验采用激光致弱弓形虫速殖子接种ICR小鼠腹腔,以期提高小鼠抗弓形虫感染的免疫保护力。结果表明：激光照射能够抑制虫体的繁殖和分裂能力。照射虫体免疫小且能诱导产生持续升高的IgG抗体。免疫民经弓形虫RH株攻击后,其发病和死亡时间延长,表现出部分的保护性免疫力。提示：激光对弓形虫速殖子的作用明显,可望在弓形虫病的治疗和预防中得到应用。     

氯胺酮单克隆抗体的研制及其免疫学特性研究

目的：制备氯胺酮单克隆抗体（McAb）,并对其特性进行分析。方法：采用丁二酸酐偶联法将氯胺酮（Ket）与BSA和OVA偶联合成人工完全抗原Ket—BSA和Ket—OVA,选择Ket—BSA免疫BALB／C小鼠,用Ket—OVA作包被抗原进行间接ELISA和竞争ELISA检测免疫小鼠血清效价,从而选择小鼠脾细胞为融合备用。应用杂交瘤技术制备氯胺酮单克隆抗体（Ket—McAb）,并对其效价、亲和性和特异性等进行鉴定。结果：成功地合成了氯胺酮人工完全抗原,用该抗原免疫小鼠产生高效价抗Ket抗体（1：12800）,并能被Ket单体抑制;建立了一株分泌稳定的单克隆抗体细胞株,细胞培养上清液的抗体效价为1：6400,腹水抗体效价为2×10^6;同种型为IgG2a,50％抑制浓度为80ng／ml,经鉴定能与Ket特异性结合与其它毒品类药物如冰毒、摇头丸,大麻、吗啡等无交叉反应。结论：抗氯胺酮McAb是一种特异的探针,对吸毒和戒毒病例的检测具有潜在的应用价值。     

小儿型骨碱性磷酸酶检测技术培训效果分析

小儿型骨碱性磷酸酶(NBAP)是成骨细胞的表型标志物之一,它可直接反映成骨细胞的活性或功能状况^〔1〕,是近年来主要用于小儿佝偻病早期诊断和亚临床鉴别的特异性参考指标^〔2-4〕,也是目前用于评价人体骨矿化障碍的最佳指标。根据浙江省农村卫生适宜诊断技术需求调查结果,小儿佝偻病早期诊断技术被列为首选需求项目。为确保小儿佝偻病早期诊断应用NBAP检测技术,我们对推广地区乡镇卫生院的卫技人员开展了NBAP检测技术的基层培训,并对培训情况和培训效果进行了分析。现报告如下。     

双抗体夹心ELISA检测循环抗原在血吸虫病控制流行地区应用的研究

对血吸虫病已控制流行地区1099名10岁以上的人群,应用抗血吸虫成虫抗原多克隆抗体(PcAb)为捕捉抗体,抗血吸虫虫卵抗原单克隆抗体(McAb)MG_2-HRP为覆盖抗体的双抗体夹心ELISA,检测血吸虫循环抗原(CAg),并以ELISA检测抗体(CAb)作平行对照.结果CAg和CAb的阳性检出率分别为4.55%和4.64%,两者的差异无显著意义(P>0.05).在50例CAg阳性者中,无血吸虫病治疗史者31例,而51例CAb阳性者中,无血吸虫病治疗史者仅6例.CAg和CAb联合检测能提高检出率.     

用于检测血吸虫的ConA-ELISA的影响因子研究

本文报道了一种经ConA作前处理的间接酶联免疫吸附试验,简称ConA-ELISA。本法可以增强日本血吸虫多糖抗原在聚苯乙烯塑料反应板上的吸附能力。与常规法ELISA相比,ConA-ELISA具有本底值低、效果好、灵敏度高、稳定性较好和节约抗原等特点,初步解决了多糖抗原的包被问题。     

应用单克隆抗体检测血吸虫病人血清特异性循环免疫复合物的初步研究

抗血吸虫ＭｃＡｂ应用于ＥＬＩＳＡ（ＭｃＡｂ一ＥＬＩＳＡ）检测血吸虫病人血清中抗原特异性ＣＩＣ，并与其提取的ＣＩＣ沉淀物为对照，二者结果完全相同。另与“抗原非特异性”ＣＩＣ检测法（ＰＥＧ法）作对照。慢件血吸虫病患者６７例，ＭｃＡｂ一ＥＬＩＳＡ有４６例呈阳性反应（６８．７％），２１例呈阴性反应（３１．３％），对肺吸虫病患者５９例、健康人２３例全部呈阴性反应；而ＰＥＧ法，肺吸虫病患者全部呈假阳性反应，健康人６例呈假阳性反应（２６％）。初步结果表明，ＭｃＡｂ一ＥＬＩＳＡ检测血清ＣＩＣ具有较高的抗原特性。