线粒体在缺血再灌注细胞损伤中的作用

缺血时线粒体氧化磷酸化不能有效进行 ,ATP生成减少而水解增多 ,细胞因能量不足发生功能障碍。随着缺血时间延长 ,线粒体结构和功能受损 ,ATP耗竭 ,细胞功能进一步损害 ,甚至发生细胞凋亡。再灌注时线粒体产生大量氧自由基 ,同时线粒体钙转运紊乱 ,发生永久性通透性转换 ,胞浆钙浓度急剧升高 ,导致细胞坏死。     

NO在外源性高浓度Ca~(2 )损伤心肌线粒体中的作用

目的 :探讨一氧化氮在外源性高浓度Ca2 损伤心肌线粒体中的作用。方法 :正常心肌线粒体分为单纯L -精氨酸 (L -Arg)组、Ca2 损伤组和左旋硝基精氨酸甲酯 (L -NAME)保护组 ,分别于含有 2 0 μmol/LEDTA、10 0 μmol/LCaCl2 以及 1μmol/LL -NAME 10 0 μmol/LCaCl2 的反应介质中孵育 ,然后测定线粒体活力、膜电位以及NO含量。结果 :Ca2 损伤组线粒体活力、膜电位明显下降 ,而NO-2 /NO-3 含量升高 ,且线粒体活力、膜电位与NO-2 /NO-3 含量呈显著负相关 (r=- 0 .5 2 97,P <0 0 1;r=- 0 6 0 41,P <0 0 1) ;L -NAME保护组线粒体活力与膜电位均明显高于Ca2 损伤组 ,但仍低于L -Arg组 ,而NO-2 /NO-3 含量低于Ca2 损伤组 ,且与L -Arg组无明显差异。结论 :外源性Ca2 可激活线粒体一氧化氮合酶 ,使NO生成增多 ,后者在线粒体活力与膜电位降低中起重要作用。     

减压缺氧时大鼠红细胞变形性改变及其机制研究

目的：探讨减压缺氧时大鼠红细胞变形性的改变及其机制。方法：测定平原和减压缺氧条件下大鼠红细胞滤过指数（IF）、红细胞膜ATPase活性、红细胞ATP含量。结果：各缺氧组细胞IF均较平原组升高，缺氧14d组虽有所下降，但仍高于对照组，缺氧21d组与30d组无明显差异；缺氧1d、7d组ATP含量下降，且与同期红细胞IF呈显著负相关，缺氧各组红细胞Na^ -K^ -ATPase、Ca^2 -ATPase活性均有不同程度明显下降，Mg^2 -ATPase活性仅缺氧30d组下降明显。结论：（1）缺氧可致红细胞变形性损害。但其发生并非进行性，大约于缺氧后3-4周达到一个较为稳定的水平；（2）缺氧早期红细胞ATP含量下降，整个缺氧过程中红细胞膜ATPase活性降低在大鼠红细胞变形性损害中起重要作用。     

基于Smad3的抗瘢痕增生药物高通量筛选体系的构建及效果评价

目的:构建Smad3反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白(d2EGFP)报告系统,作为抗瘢痕增生药物高通量筛选体系。方法:分别以EGFP、d2EGFP为报告基因,neor为筛选基因,构建以4×成纤维细胞α2Ⅰ型前胶原(COL1A2)基序为增强子、SV40为启动子的报告基因载体p4COL1A2-EGFP和p4COL1A2-d2EGFP,并分别稳定转染NIH3T3细胞,获得Smad3反应性报告细胞株NIH3T3-d2EGFP和NIH3T3-EGFP。分别向两种细胞株中加入TGF-β1,比较不同时相点d2EGFP和EGFP的表达。应用Smad3“圈套”寡核苷酸(TFD)转染NIH3T3-d2EGFP,加入TGF-β1,观察TFD对TGF-β1诱导d2EGFP表达的拮抗作用。结果:NIH3T3-d2EGFP是较理想的Smad3反应性报告细胞株,Smad3TFD对TGF-β1诱导调控d2EGFP的表达具有明显的拮抗作用。结论:Smad3反应性d2EGFP报告系统可特异、灵敏、动态地反映和监测Smad3的活性变化。     

钌红对严重烧伤早期心肌能量代谢的影响

目的 探讨钌红对严重烧伤早期心肌能量代谢的影响。方法 Wistar大鼠24只,随机分为正常对照组、烧伤组和烧伤钌红治疗组。烧伤组、烧伤钌红治疗组大鼠造成30％总体表面Ⅲ度烧伤,伤后30min经腹腔补液,烧伤治疗组同时于颈外静脉推注钌红(2mg/kg体重）,3h后再推注1次。伤组和烧伤治疗组动物于伤后6h活杀。测定心肌线粒体呼吸功能、Ca^2 浓度（[Ca^2 ]m)及心肌组织ATP、ADP、AMP和乳酸含量。结果 钌红治疗组[Ca^2 ]m较烧伤组显著降低,线粒体呼吸控制率（RCR）、Ⅲ态呼吸速率（ST3）明显升高,Ⅳ态呼吸速率（ST4）降低;钌红治疗组ATP含量较烧伤组升高100.4%,同时ADP、AMP含量明显低于烧伤组,且钌红治疗组乳酸仿较烧伤组降低53.5%。结论 钌红治疗可改善严重烧伤早期线粒体功能和心肌能量代谢。     

Ca2+介导严重烧伤早期心肌线粒体呼吸功能损害

目的 :探讨Ca2 + 在严重烧伤早期心肌线粒体呼吸功能损害中的作用及其机制。方法 :复制 30 %TBSAⅢ度烧伤大鼠模型 ,取正常及伤后 1、3、6、12、2 4h大鼠心肌分离线粒体 ,测其呼吸功能、Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]m)、F0 F1-ATPase和细胞色素c氧化酶活性 ,同时观察心肌线粒体能量代谢变化。结果 :①伤后 1h [Ca2 + ]m 即明显升高 ,同时心肌线粒体呼吸功能加强 ,呼吸控制率(RCR)、Ⅲ态呼吸速率升高 ,且RCR与 [Ca2 + ]m 呈显著正相关 (r=0 .8415 ,P <0 .0 1) ;伤后 3、6、12、2 4h心肌 [Ca2 + ]m 升高更加明显 ,但线粒体呼吸功能反而下降 ,RCR与 [Ca2 + ]m 均呈显著负相关。②F0 F1-ATPase活性于伤后 1h明显降低 ,但 3h显著高于对照组 ,6、12、2 4h再度下降 ;伤后 3、6、12、2 4h线粒体细胞色素c氧化酶活性分别下降 42 .5 %、36 .2 %、32 .3%和 18.9%。③大鼠烧伤后 1h心肌线粒体ATP含量无明显变化 ,但 3、6、12、2 4h线粒体ATP含量均显著降低 ,同时ADP含量升高。结论 :烧伤初始 [Ca2 + ]m 适度升高 ,促进线粒体呼吸功能加强 ;烧伤后续阶段Ca2 + 严重超载在线粒体呼吸功能损害中起重要作用。     

转Endostatin基因角朊细胞移植对烧伤深Ⅱ°创面愈合及瘢痕增生的影响

目的探讨转内皮生长抑制素(ES)基因角朊细胞移植对烧伤深Ⅱ°创面愈合及瘢痕增生的影响。方法将人体皮肤移植于裸鼠并造成深Ⅱ°烧伤创面。实验分为对照组(11只)、单纯角朊细胞移植组及转ES基因角朊细胞移植组(各10只)。对照组不行细胞移植,创面自行愈合;单纯角朊细胞移植组创面移植培养人角朊细胞;转基因移植组移植转ES基因角朊细胞。观察各组裸鼠创面愈合特点、瘢痕增生情况,并对愈合区组织进行病理切片检查、检测愈合区皮肤组织ES 蛋白表达、I、Ⅲ型前胶原含量。结果转基因移植组裸鼠创面愈合时间(13±5)d与单纯移植组 (14±5)d差异无统计学意义(P>0．05),但明显短于对照组[(25±7)d,P<0．01]。对照组裸鼠创面愈合后瘢痕增生明显,伤后100 d厚度≥0．22 cm,单纯移植组瘢痕增生厚度≥0．17 cm,转基因移植组仅有轻度瘢痕增生,愈合区皮肤组织ES蛋白检测阳性。单纯移植组、转基因移植组愈合区组织前胶原I含量(65．3±8．5)μg／g,(61．4±7．0)μg／g、前胶原I／前胶原Ⅲ比例(0．66±0．15,0．57± 0．13)明显低于对照组(1．51±0．37,P<0．01),而前胶原Ⅲ含量显著高于对照组(P<0．01)。结论转ES基因移植既可加速创面封闭,又能抑制愈合后瘢痕形成。     

mtPLA2在严重烧伤早期心肌线粒体损害中的作用

目的：探讨线粒体ＰＬＡ２（ＭｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＰＬＡ２,ｍｔＰＬＡ２）在严重烧伤早期心肌线粒体损害中的作用。方法：取正常及伤后１、３、６、１２、２４ｈ大鼠心肌分离线粒体,测其呼吸功能及Ｃａ＾２＋浓度（「Ｃａ＾２＋」ｍ）、ｍｔＰＬＡ２活性。结果：①心肌线粒体呼吸控制率（ＲＣＲ）伤后１ｈ升高、３、６、１２、２４ｈ明显低于正常组,Ⅲ态呼吸速率（ＳＴ３）变化与ＲＣＲ平行,ＳＴ４公于伤后３ｈ有明显升高     

延迟快速血定安复苏对烫伤犬血液动力学及流变学的影响

目的 探讨延迟快速血定安复苏对烫伤犬血液动力学及流变学的影响。方法 复制40％Ⅲ度犬烫伤延迟快速复苏（伤后6h)模型,实验分为烫伤不补液组（BC）、血浆补液组（DP）、血定安补液组（DG）,观察其股动脉血压（BP）、心输出量（CO）,并检测血液粘度及红细胞聚集指数。结果 （1）烫伤对照组伤后12－36h内动物全部伤亡,DP、DG两组均存活48h以上;（2）伤后各组动物BP、CO均显著下降,DP、DG两组补液后两指标均有明显回升,伤后8、24、36、48h CO与伤前无明显差异,但股动脉血压除伤后8h外其余各时相点均显著低于伤前水平;（3）烫伤后高、低切变率下血液粘度及红细胞聚集指数均显著升高,DP、DG两组补液复苏后都有所恢复,但48h内均不能达到伤前水平;（4）DP、DG两组各相应时相点BP、CO变化无明显差别,伤后8h DG组血液粘度及红细胞聚集指数低于DP组。结论 延迟快速血定安复苏能替代血浆有效改善烫伤犬血液动力学及流变学状况,降低动物死亡率;但烫伤延迟复苏时应加大补液量,并于伤后8－24h内补入。