内皮型一氧化氮合酶基因G894T突变与肝硬化门脉高压的相关性研究

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)基因第7外显子G894T点突变与肝硬化门脉高压症之间的关系.方法采用病例对照和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测106例乙型肝炎后肝硬化患者和108名健康对照者eNOS基因第7外显子G894T点突变频率和外周血NO-2/NO-3含量,比较各组间基因型频率与等位基因频率.结果①中国汉族正常人eNOS基因G894T突变GG、GT和TT基因型频率分别为86.1%、11.1%和2.8%;G、T等位基因频率分别为91.7%和8.3%.②乙型肝炎后肝硬化组GT+TT基因型频率高于对照组(24.5%比3.9%),差异有显著性.③门脉高压症组T等位基因频率明显高于对照组,差异有显著性(17.7%比8.3,P<0.05),相关分析呈正相关(r=0.2).携带T等位基因者发生门脉高压症的危险性高于非T等位基因携带者1.76倍(OR=2.76).结论 eNOS基因第7外显子G894T突变与肝硬化门脉高压症形成相关,T等位基因可能是中国人群门脉高压症的遗传易感基因型.     

人类白细胞抗原DRB1等位基因与乙肝后肝硬化遗传易感性的研究

目的 研究人类白细胞抗原(human leucocyte antigen，HLA)-DRBl等位基因多态性与湖北汉族乙肝后肝硬化遗传异感性的关系，为寻找乙肝后肝硬化的易感基因或抗病基因提供线索。方法 应用聚合酶链反应-序列特异性引物技术对106例湖北汉族乙肝后肝硬化患者和108名正常健康对照者进行了HLA-DRBl等位基因检测，并结合临床资料进行比较分析。结果 乙肝后肝硬化组HLA-DRBl*1201／1202等位基因频率明显升高(20．28％vs6．01％，RR＝4．9878，P＜0．001)，HLA-DRBl*1501／1502等位基因频率明显下降(16．67％vs6．6％，RR＝0．3043，P＜0．05)，其他等位基因在两组之间差异无显著性。结论 HLA-DRBl*1201／1202等位基因可能是湖北地区汉族人群乙肝后肝硬化的易感基因，HLA-DRB1*1501／1502则为抵抗基因。     

一氧化氮合酶2A基因启动子-969(G→C)多态性与肝硬化门静脉高压的相关性

目的探讨一氧化氮合酶2A(nitricoxidesynthase2A,NOS2A)基因启动子-969(G→C)多态性与肝硬化门静脉高压的相关性。方法采用病例对照和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术,检测106例乙肝后肝硬化患者和108名健康对照者NOS2A基因启动子-969(G→C)多态性,比较等位基因及基因型频率;应用逆转录-聚合酶链反应和Western印迹技术,检测肝硬化组织NOS2AmRNA和蛋白表达。构建NOS2A基因启动子-969(G→C)多态性荧光素酶重组质粒,瞬时转染,分析多态性的功能。结果在门静脉高压症组C等位基因和GC基因型频率为16.9%、33.8%,比正常对照组高(8.8%、17.6%),差异有显著性(P<0.05,OR=2.42),相关分析呈正相关(r=0.18)。单纯肝硬化组与对照组的C等位基因和GC基因型频率相比,差异无显著性(P>0.05)。C等位基因携带者比G等位基因携带者肝硬化组织NOS2AmRNA及蛋白表达明显增强,GC基因型启动子的活性显著升高。Logistic多元逻辑回归分析显示这一多态性是形成门静脉高压症新的独立危险因素。结论NOS2A基因启动子-969(G→C)多态性与门静脉高压症相关,导致启动子活性增强,是形成门静脉高压症的新的危险因素。     

HIF-1α 对人肝癌Hep G2细胞生长的影响

 目的 研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人肝癌细胞株HepG₂体内生长的影响，并探讨其可能机制。方法 将HIF-1α转入人肝癌细胞HepG₂中，建立人肝癌裸鼠模型，观察其生长。切除瘤灶、称瘤重。标本用免疫组化和Western-blot检测HIF-1α和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达。结果 HepG₂细胞对HIF-1α敏感，细胞生长速度加快。结论 HIF-1α体内可促进肝癌HepG₂的生长，其机制可能与其促血管生成有关。     

新型核苷类似物β-L-D4A对人DNA聚合酶β和δ的作用及其机制

目的:对人DNA聚合酶δ进行纯化和鉴定,通过检测β-L-D4A对人DNA聚合酶β和δ的作用,观察β-L-D4A的毒副作用.方法:运用多次离子交换层析的方法提取、纯化人Hela细胞的DNA聚合酶δ:检测β-L-D4A对人DNA聚合酶β和δ的酶动力学作用.结果:提纯并鉴定了DNA聚合酶δ,收得率是15%,比活力是1911 Ukat/mg.β-L-D4A为抑制剂时,对人DNA聚合酶β和δ的酶动力学参数分别是Km=1.86 μmol/L,2.45μmol/L,IC50=25.21 μmol/L和150.1μmol/L,Ki=24.03μmol/L和132.7μmol/L,结果均提示β-L-D4A对DNA聚合酶β和δ的抑制作用远小于拉米夫定,结论:β-L-D4A是人DNA聚合酶β和δ的竞争性抑制剂,他对这两种酶的毒副作用远小于拉米夫定,可望成为更高效低毒的抗HBV类药物.     

基因治疗在肝癌中的应用

肝癌是一种高度恶性的肿瘤，目前首选的治疗方法仍然是手术切除，但复发率高。因此，对于肝癌的治疗更多考虑综合治疗。作为第4类新治疗模式的生物治疗显示出较好的前景，为当前肝癌治疗研究热点之一。为此本刊特约请从事相关研究的专家对肝癌生物治疗现状和前景进行笔谈。     

人端粒酶催化亚单位锤头状核酶诱导肝癌细胞凋亡的作用

目的 构建带有U6启动子的人端粒酶催化亚单位锤头状核酶真核表达质粒及其突变体,转染入肝癌细胞株SMMC7721,观察端粒酶活性、细胞增殖和凋亡的情况。 方法 用分子克隆技术构建由U6作为启动子、绿色荧光蛋白基因作为报告基因的核酶真核表达质粒pGTRz-U6及其突变体pGTmRz-U6,并以空质粒pEGFP-C1作为对照。Lipofectamine2000转染人肝癌细胞株SMMC7721,G418筛选阳性克隆。RT-PCR检测核酶及hTERT基因的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)作细胞生长曲线观察其生长情况,TRAP-银染法检测端粒酶活性变化,流式细胞计数(FCM)法检测细胞的凋亡水平。 结果 核酶、突变核酶在SMMC7721中持续表达;凝胶成像系统分析SMMC7721-pEGFP-C1、SMMC7721-mRz、SMMC7721-Rz hTERT基因表达,用SPSS10.0软件对3种细胞进行分析,发现三者hTERT基因表达水平不同(F=47.987,P<0.01);t检验分析得出SMMC7721-Rz hTERT基因表达明显低于SMMC7721-mRz和SMMC7721- pEGFP-C1(t值分别为-7.640和-11.602,P值均<0.01)。SMMC7721-pEGFP-C1和SMMC7721-mRz hTERT表达没有区别(t=-0.178,P>0.05)。TRAP-银染及FCM结果分别显示,随着细胞的分裂,SMMC7721-Rz和SMMC7721-mRz细胞端粒酶活性逐渐降低,凋亡水平逐渐增加,7PDS细胞凋亡率分别是29.86％和9.87％,而对照组SMMC