人肝癌父系表达基因10的遗传印记状态

目的 研究人肝癌组织及肝癌细胞株中父系表达基因10(PEG10)的遗传印记状态.方法 从40例肝癌及其癌旁组织、15例正常肝组织、5株肝癌细胞(PLC/PRF/5、SMMC 7721、HepG2、Hep3B、SK-HEP-1)、2株正常肝细胞(changliver、HL7702)中提取基因组DNA,针对PEG10基因单核苷酸多态性位点设计引物进行PCR,扩增片段经测序分析基因型;从杂合样本中提取总RNA进行RT-PCR,对扩增产物测序以检测等位基因表达状态,同时进行实时荧光定量RT-PCR检测PEG10表达水平.计量资料以均数±标准差(-x±s)表示,组间比较用t检验与方差分析;两组率的比较用x2检验.结果 40例肝癌及其癌旁组织中16例呈杂合状态,15例正常肝组织中3例呈杂合状态,肝癌细胞HepG2扩增片段测序检测到一杂合突变位点,其余组织及细胞株均为纯合状态.杂合样本中,82.4%(14/17)肝癌样本(包括组织及肝癌细胞株)中PEG10基因呈双等位基因表达,发生印记丢失;17.6%(3/17)肝癌样本呈单等位基因表达,提示印记存在.PEG10在癌旁及正常肝组织中几乎不表达.发生印记丢失的肝癌组织与印记存在的肝癌组织相比,PEG10表达水平的差异无统计学意义(t=1.311,P＞0.05).结论 大多数肝癌组织中存在PEG10印记丢失现象,PEG 10印记状态与其在肝癌组织中的表达水平无明确关系.     

小鼠白蛋白基因启动子的克隆及其在不同细胞系中转录活性的检测

目的：对比小鼠白蛋白（mouse albumin promoter, ALB）启动子调控下的增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）在不同细胞系中的转录活性。方法：以小鼠全血基因组DNA为模板,聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）扩增ALB启动子序列,克隆至pEGFP-1中,构建重组体pALB-EGFP;在Lipofectamine介导下将pALB-EGFP、pEGFP-N1转染人胎肝细胞L02、人宫颈癌细胞HeLa、人结肠癌细胞SW480、人胰腺癌细胞Bxpc-3;荧光显微镜和流式细胞仪对各转染细胞中EGFP的表达进行检测。结果：pALB-EGFP构建成功;L02转染pALB-EGFP 72 h后,ALB启动子可起始EGFP的表达,转录活性为人巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV）启动子的1/4,其它转染细胞的ALB不能起始EGFP的转录;稳定筛选后,ALB的转录活性达到与CMV相当的水平。结论：构建的重组载体在肝脏来源细胞中具有较高的转录活性, 为建立肝脏特异性表达目的基因的转基因小鼠模型奠定了基础。     

“热毒清”注射液对家兔内毒素DIC生物效应的拮抗作用

本文通过动物实验,观察了"热毒清"注射液对以大肠杆菌内毒素在家兔体内所制作的 DIC 动物模型病理生理过程的影响。血液学和形态学的结果表明,本制剂对内毒素的 DIC 生物效应具有拮抗作用。文中并就其拮抗机制作了初步探讨。根据体外抗内毒素实验、对枯否氏细胞形态的电镜观察以及其他作者的研究工作,推测可能是通过直接降解内毒素,增强单核—吞噬细胞系统的吞噬功能以及提高 C_8旁路活性而发挥作用的。     

遗传印记基因PEG 10转基因小鼠的建立及其皮下移植瘤生长和转移的变化

目的 建立PEG10转基因小鼠模型,研究PEG10对小鼠皮下移植瘤的生长和转移的影响. 方法 PCR阳性转基因鼠经RT-PCR、Western blot鉴定后,皮下注射H22细胞,连续测量肿瘤体积.12 d后取肿瘤和肝脏组织进行HE染色,肝脏组织进行SP染色,检测PEG10蛋白的表达.计量资料采用独立样本的f检验.结果 阳性首建鼠的肝脏中枪测到目的 基因和蛋白的表达.转皋因小鼠皮卜瘤的体积(4.08、4.23 cm3)及质量(6.89、6.48 g)均显著高于野生昔小鼠(1.61 cm3及1.63 g,P<0.05),均向周围组织侵袭并出现肝转移,肝脏中检测到PEG10蛋白;野生型小鼠的肿瘤组织有包膜,未出现肝转移. 结论构建的PEG10转基因小鼠模型可促进皮卜移植瘤的生长、侵袭和转移.     

遗传印记基因PEG 10转基因小鼠的建立及其皮下移植瘤生长和转移的变化

目的 建立PEG10转基因小鼠模型,研究PEG10对小鼠皮下移植瘤的生长和转移的影响. 方法 PCR阳性转基因鼠经RT-PCR、Western blot鉴定后,皮下注射H22细胞,连续测量肿瘤体积.12 d后取肿瘤和肝脏组织进行HE染色,肝脏组织进行SP染色,检测PEG10蛋白的表达.计量资料采用独立样本的f检验.结果 阳性首建鼠的肝脏中枪测到目的 基因和蛋白的表达.转皋因小鼠皮卜瘤的体积(4.08、4.23 cm3)及质量(6.89、6.48 g)均显著高于野生昔小鼠(1.61 cm3及1.63 g,P<0.05),均向周围组织侵袭并出现肝转移,肝脏中检测到PEG10蛋白;野生型小鼠的肿瘤组织有包膜,未出现肝转移. 结论构建的PEG10转基因小鼠模型可促进皮卜移植瘤的生长、侵袭和转移.     

人遗传印记基因PEG10对L02细胞线粒体膜电位的影响

人遗传印记基因PEG10定位于人7号染色体长臂2区1带,是一个反转座子衍生而来的父系表达的遗传印记基因.PEG10基因高表达于肝癌细胞系HepG2和大多数肝细胞癌组织中,在良性肝病组织及非肝脏来源的肿瘤细胞系中没有检测出该基因的表达.PEG10基因的表达水平与肝细胞癌的转移潜能正相关,并且可以促进正常人肝细胞L02增殖,提示PEGl0基因可能在人肝细胞癌的发生过程中起重要作用.本研究通过检测L02细胞转染前后线粒体膜电位及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的改变,初步探讨PEG10基因促人肝细胞增殖的机制.     

乙型肝炎病毒多聚酶基因在重组杆状病毒系统中的表达

目的利用杆状病毒一昆虫细胞表达系统制备乙型肝炎病毒多聚酶重组蛋白。方法构建含有乙型肝炎病毒多聚酶基因的杆状病毒转移载体pFastbac Dual—polymerase，转化大肠杆菌DH10Bac进行转座，提取重组Bacmid转染昆虫细胞获得含有HBVpol基因的重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染昆虫细胞进行蛋白表达，用SDS—PAGE电泳分析表达情况。结果将所得Bacmid行PCR鉴定，结果表明成功构建了的含乙型肝炎病毒多聚酶基因的重组杆状病毒，SDS-PAGE分析表明该病毒能在昆虫细胞中高效表达重组的多聚酶蛋白。结论利用杆状病毒表达系统，构建的重组杆状病毒在昆虫细胞中高效表达乙型肝炎病毒多聚酶，为进一步的乙型肝炎病毒多聚酶的体外功能研究奠定了基础。     

一氧化氮在肝硬化鼠动脉扩张中的作用 

本实验使用一氧化氮（ＮＯ）合成酶阻滞剂左旋硝基精氨酸（ＬＮＮＡ），研究了ＮＯ在四氯化碳（ＣＣＩ４）致肝硬化鼠动脉扩张中的作用。静注ＬＮＮＡ可部分纠正肝硬化鼠降低了的平均动脉压（ＭＡＰ）、外周血管阻力（ＰＶＲ）、并使高心脏指数（ＣＩ）有所下降，但只能使正常鼠ＭＡＰ升高。说明ＮＯ在肝硬化鼠动脉扩张所表现的高动力循环中起重要作用。