具核梭杆菌来源的外膜囊泡对口腔上皮细胞闭合蛋白Claudin-4表达的影响

目的：探讨具核梭杆菌（Fusobacterium nucleatum, F.n）分泌的外膜囊泡（outer membrane vesicles, OMVs）对人口腔角质形成细胞（human oral keratinocytes,HOK）闭合蛋白Claudin-4表达及其对口腔上皮屏障功能的影响。方法：厌氧条件下培养具核梭杆菌，透析法提取OMVs。采用Nanosight及透射电镜（transmission electron microscopy,TEM）对提取的OMVs进行表征分析。OMVs以不同质量浓度（0～100μg/mL）刺激HOK 12 h，并以100μg/mL OMVs刺激HOK 6、12 h，采用实时转录PCR和蛋白质印迹法分析闭合蛋白Claudin-4在基因和蛋白水平的表达；倒置荧光显微镜观察HOK与OMVs共定位以及Claudin-4蛋白的定位分布。利用Transwell上室体外构建人口腔上皮屏障，采用跨膜电阻测量仪（EVOM2）检测屏障跨上皮电阻（transepithelial electrical resistance, TER）,以异硫氰酸荧光素-右旋糖酐（FD-4...