不同胎龄肝提取物对体外BEL-7402肝癌细胞增殖和分化的影响

4、7月胎肝中制备提取物(E_4、E_7),观察它们对BEL-7402细胞的影响。结果显示:E_4从100mg/L起可明显抑制7402细胞的生长和DNA合成,细胞生长抑制IC_(50)为144.4mg/L,DNA合成抑制IC_(50)为227.9mg/L。在250～1000mg/L时对细胞线粒体脱氢酶活力有明显的抑制作用,IC-(50)为1013.0mg/L。E_7在10～100mg/L对细胞生长和DNA合成具有明显的促进作用,至1000ml/L浓度未发现明显的抑制作用。对细胞生长曲线影响,E_4表现为500mg/L时能明显抑制7402细胞的生长而在50mg/L时影响不明显;E_7表现为500mg/L时影响不明显,而50mg/L时则有明显的促进作用。对细胞形态的影响,100～1000mg/L的E_4作用后可出现与二甲亚砜(DMSO)诱导后相似的分化改变,而不同浓度的E_7作用不明显。结果提示:4月胎肝提取物中含有促肝细胞分化因子,能够抑制肝癌细胞生长和促进分化;而7月胎肝提取物中含较多的促生长因子。     

肝细胞提取物对癌细胞凋亡相关基因表达的影响

研究资料表明,肝细胞提取物(hepatocyteextraction)在诱导BEL-7402细胞凋亡的同时能促进p53和Fas基因表达,而对bcl-2和C-myc表达具有一定的抑制作用.本研究采用免疫组化技术,进一步观察纯化的肝提取肽(S4)对4种肝癌和4种非肝癌细胞凋亡及凋亡相关基因的影响.1 材料与方法1.1 肝细胞提取物和S4(subfraction 4)的制备参见文献[2].1.2 细胞系及培养条件SMMC 7721、QGY-7703人肝癌细胞、HCT-8结肠癌细胞、GLC-82低分化肺腺癌细胞引自中国科学院细胞所.BEL-7402人肝癌细胞引自北京中日友好医院中西医结合研究所.Hepe小鼠肝癌细胞、CNE-2鼻咽癌细胞引自中山医科大学.SGC-7901胃腺癌细胞由第四军医大学生化室惠赠.实验时将对数生长期细胞用0.25%胰酶加0.025?TA消化,配成(2.5～5)×10~4/ml细胞悬液,加入内置盖玻片的24孔Costar培养板中,每孔0,5ml.37℃,5%CO_2条件下孵育24小时后,置4℃水浴1小时后立即升到37℃,将S4以不同浓度加入培养孔,每孔0.5ml,继续孵育.洗涤固定细胞,分别做DNA原位末端标记检测和癌基因免疫组化测定.根据预实验结果,选定S4为5μg/ml,作用48小时为统一条件,以利于结果的可比性及准确性.     

重组pichia pastoris高密度发酵表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的研究

目的优化rhsTRAIL(重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)毕氏酵母工程菌在5升Braun发酵罐中的发酵表达工艺参数。方法研究培养基种类、种细胞密度、甘油含量、pH值、甲醇浓度、甲醇流加速率及诱导时间等参数对酵母菌生长与目的蛋白表达的影响。结果在无机盐培养基中，按10％接种OD600=8-12的种菌后，24h酵母菌增殖至OD600=76；甘油含量为1％时，菌体生长速度快(OD600=160)；培养基pH值=5．0，甲醇终浓度为1％时，诱导96h表达量最高达到120mg／L。结论rhsTRAIL在毕氏酵母中发酵工艺参数为：无机盐培养基，pH值：5．0，接种10％ OD600=8-12的种菌，甘油含量1％，甲醇终浓度1％，诱导96h。     

人肝再生增强因子FAD辅助的巯基氧化酶活性测定及其活性位点研究

目的:建立一种灵敏、简便、有效的判断人肝再生增强因子蛋白(ALRp)巯基氧化酶活性的方法，并分析ALRp的CXXC活性结构域在其发挥酶活性中的作用。方法:通过定点突变将ALRp的CXXC结构中的一个半胱氨酸突变为丙氨酸。巯基氧化酶实验分4组：①ALR组；②ALR-FAD组；③ALR突变体-FAD组；④无蛋白对照组。以还原型谷胱甘肽(GSH)为底物，于不同时点测定每组巯基浓度。结果:ALR-FAD组巯基浓度随时间的推移不断下降；其它3组巯基浓度在整个实验中均无明显变化。结论:建立了一种半定量分析ALRp巯基氧化酶活性的方法；并证明ALRp必须在FAD辅助下发挥酶活性，且ALRp的CXXC结构是ALRp具有该酶活性必不可少的部分。     

重组人肝再生增强因子对大鼠肝部分切除后肝再生的影响

目的观察原核表达的重组人肝再生增强因子（rhALR）对大鼠肝再生的影响。方法按Higgins方法进行大鼠34％肝切除。术后4-6h各实验组大鼠经腹腔注射rhALR剂量分别为50μg、100μg、200μg、400μg、800μg,对照组给生理盐水。术后30h杀鼠取肝,增殖核抗原（PCNA）免疫组化染色和HE染色,进行肝细胞核PCNA阳性细胞计数和有丝分裂计数。结果rhALR能促进肝部分切除后大鼠肝细胞的有丝分裂和细胞核PCNA的表达,并呈现一定的剂量依赖关系。结论rhALR能促进在鼠肝再生和肝细胞增殖。