不同剂量自制表面活性剂类超声造影剂对心肌显像效果的实验研究

目的探讨自制表面活性剂类超声造影剂进行心肌显像的理想剂量.方法用本研究所自行研制的表面活性剂类超声造影剂对7只开胸犬的心肌进行显像观察,将造影剂稀释为10、20、30倍,分别对心肌进行显像,观察其不同的显像效果并对其进行定性和定量分析.结果造影剂的剂量在稀释10倍至30倍之间时,均是在触发间歇为1:8个心动周期时心肌显像效果最佳,此时造影剂在心肌组织内达到饱和状态.随着稀释倍数的增加,心肌显像效果明显减弱,3级显像的比例明显减少,前壁、后壁心肌和心腔内声学密度明显降低.结论不同剂量的超声造影剂对心肌有不同的显像效果,本实验发现稀释20倍时心肌显像的效果较理想.     

一种载基因脂质超声造影剂的制备及特性的实验研究

目的制备一种可作为基因载体的脂质超声造影剂,对其理化性质和兔肾显影效果及载基因的能力进行研究。方法采用机械振荡法制备一种可作为基因载体脂质超声微泡造影剂,观察60Coγ射线灭菌前后造影剂外观、形态、浓度、平均粒径和电位改变,并观察其对正常兔肾显影效果,检测其结合基因的能力。结果自制脂质微泡的平均粒径范围为2.11~6.43μm,平均粒径2.79μm,粒径分布均匀,浓度约为(3.16±0.29)×109/ml;经60Coγ射线灭菌后在显微镜下观察微泡形态,粒径大小无明显变化;体内造影显示该造影剂能够有效增强兔肾实质回声;基因结合量效优化结果显示,造影剂的最大基因结合的效率为22%,最大基因结合量为0.45μg/ml。结论自制脂质超声造影剂符合理想超声造影剂的要求,性质稳定,制备简易,载基因效率高,可望成为一种新型的超声微泡造影剂以及基因或药物治疗的载体。     

小鼠胚胎干细胞体外向血管平滑肌细胞的定向分化

目的:血管重建手术在多数情况下以自体血管作为替代品,但来源有限.胚胎干细胞具有发育全能性,目前其定向诱导机制尚不明确.通过选择适当的诱导剂,探讨胚胎干细胞体外向血管平滑肌细胞分化的趋势.方法:实验于2006-08/2007-02在南昌大学第二附属医院血液病研究所完成.①动物及细胞系:清洁级孕12.5d昆明小白鼠1只,由南昌大学医学院动物中心提供,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.小鼠胚胎干细胞系129X/SvJ编号为SCRC-1018,由American Type Culture Collection提供.②实验方法:取孕12.5 d鼠胚胎,去除头部、内脏及四肢,将组织块剪碎,胰酶消化,分离培养胚胎成纤维细胞,传至3-5代时史换为含体积分数为0.15胎牛血清的DMEM高糖培养基,24 h后收集培养液,加入2.0mmol/L L-谷氨酰胺,1×非必需氨基酸,0.1 mmol/L β-巯基乙醇,1000 U/mL白血病抑制因子,此即为条件培养基.常规复苏小鼠胚胎干细胞系129X/SvJ,以1 × 106密度接种,传代时用差速贴壁法分离去除已分化的胚胎干细胞,加入条件培养基5 mL,经过悬滴一悬浮培养,构建拟胚体分化模型.设立3组,各组均置于明胶包被的T25培养瓶中,每瓶加入50个拟胚体,使其均匀分布于培养瓶底.诱导组7～10 d加入10-9 mol/L全反式维甲酸和3 μ g/L转化生长因子β1,10～21 d加入20μg/L血小板源性生长因子.血清对照组仅加入去生长因子胎牛血清,全反式维甲酸组仅加入全反式维甲酸.诱导21 d的拟胚体,用胰蛋白酶和胶原酶Ⅱ联合消化为单个细胞,再加入20μg/L血小板源性生长因子继续诱导7 d.③实验评估:应用RT-PCR法检测诱导细胞血管平滑肌肌动蛋白、血管平滑肌肌球蛋白重链基因的表达.通过免疫细胞化学技术检测血管平滑肌肌动蛋白的表达来鉴定细胞性质.结果:①胚胎干细胞牛长及拟胚体诱导分化:胚胎干细胞在体外能自发形成拟胚体,经过不同生长因子的分阶段联合诱导,拟胚体贴壁后球体略摊开,周围出现大量的梭形细胞.②RT-PCR检测:拟胚体血管平滑肌肌动蛋白和血管平滑肌肌球蛋白重链基因均呈强阳性表达.③免疫细胞化学检测:荧光显微镜下,罗丹明染色细胞浆呈红色荧光,并可见肌丝结构;DAPI染色细胞核呈蓝色荧光.诱导组血管平滑肌肌动蛋白阳性率明显高于血清对照组、全反式维甲酸组(P＜0.05).结论:胚胎干细胞经维甲酸、转化生长因子β1以及血小板源性生长因子分阶段联合诱导后,可分化为血管平滑肌细胞且纯度较高.随着细胞纯度和活性等问题的进一步解决,胚胎干细胞将有可能成为血管组织工程的种子细胞.     

炎性及肿瘤转移淋巴结的超声造影实验研究

目的 探讨正常、炎性和肿瘤转移淋巴结超声造影前后回声强度的变化和显像效果。方法 15只健康新西兰大白兔随机分为3组：肿瘤淋巴结转移组、炎性淋巴结组和正常淋巴结组。模型成功后，各组分别经足掌垫皮下注入自制表面活性剂类超声微泡造影剂，并按摩足底，用谐波显像方式观察各组胭窝淋巴结造影效果。结果 造影前3组的回声强度值之间均有显著差别（P〈0．05），肿瘤转移组最低，炎性组次之，正常组最高；造影后各组淋巴结回声强度均有不同程度增强，肿瘤转移组的视觉增强效果较其余两组低，其回声强度值低于其余两组，并可见不规则的充盈缺损，炎性组和正常组的回声强度比较无差别。结论 声像图回声强度可在造影前区分肿瘤转移、炎性和正常的淋巴结，微泡造影后能更清楚显示其差别。     

犬缺血再灌注心肌靶向超声造影图像的组织定征量化研究

目的用超声组织定征量化分析白细胞靶向超声造影剂对犬心肌缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I-R)损伤声像图。方法将自制超声微泡造影剂"表活显"(self-madesurfactantfluorocarbon-filledmicrobubbles,SFCMB)与磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)结合,制备成白细胞靶向超声微泡造影剂(SFCMB-PS),在实时心脏超声造影条件下,用SFCMB-PS对9只犬心肌I-R模型进行延迟心肌显像。实验结束后,在心肌I-R损伤处取组织块立即进行髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性测定。超声组织定征定量分析缺血再灌注损伤心肌。结果I-R损伤心肌声像图的回声强度[(22.56±4.62)GS]明显增高,与正常心肌[(16.57±3.82)GS]和缺血心肌[(5.00±2.58)GS]比较,差异均有统计学意义(P<0.01),而且其与MPO活性有良好的相关关系(r=0.776,P<0.05)。结论超声组织定征定量分析缺血再灌注心肌靶向超声显像能够较准确、客观地反映再灌注损伤的严重程度。     

超声造影技术在小儿膀胱输尿管反流诊断中的诊断价值

目的 探讨超声造影技术(contrast-enhanced ultrasonography,CEUS)在小儿膀胱输尿管反流(vesicoureteral reflux,VUR)中的临床诊断价值.方法 本试验选择46例临床可疑VUR患儿,应用对比脉冲序列超声造影技术(contrast pulsed sequence, CPS),经膀胱腔注入SonoVue造影剂后,实时观察造影剂微泡在反流病例中尿路的流动过程,分析评价反流程度,并与排泄性膀胱尿路造影技术(voiding cystoureterogram ,VCUG)进行对照.结果 46例患儿CEUS检出VUR 19例33支输尿管反流,VCUG检出17例30支输尿管反流.CEUS对VUR检出准确率为94.5%,敏感性和特异性分别为96.7%、93.5%.两种检查方法对VUR的分级评价一致性较高(Kappa值=0.83).结论 CEUS对VUR检测的敏感性及特异性均较高,与VCUG方法具有较好的一致性,对小儿VUR的诊断、筛查及随访具有重要临床意义.     

DFY-Ⅱ型超声图像定量分析诊断仪的设计及应用

目的升级更新＂DFY-Ⅰ型超声图像定量分析诊断仪＂,以满足超声图像定量分析需要.方法通过对＂DFY-Ⅰ型超声图像定量分析诊断仪＂存在的不足进行分析后,用Dephi编程语言对新增模块进行设计、调试,并通过实际应用后定型.结果＂DFY-Ⅱ型超声图像定量分析诊断仪＂解决了＂DFY-Ⅰ型超声图像定量分析诊断仪＂存在的一些不足,并新增了许多实用功能.结论＂DFY-Ⅱ型超声图像定量分析诊断仪＂可以满足广大超声工作者进行图像定量分析的需要.     

载血卟啉脂质微泡的制备及一般特性的实验研究

目的 制备一种载声动力药物的脂质超声微泡并测定其包封率、粒径大小、观察其体内超声显像效果.方法 采用机械振荡的方法制备载血卟啉的脂质超声微泡,用荧光分光光度仪测定其包封率,用倒置显微镜及马尔文激光粒径测量仪测量粒径大小、分布和Zeta电位;观察60Co射线灭菌前后造影剂外观、形态、浓度和平均粒径的改变,并观察其在兔肝内的显像效果.结果 载药脂质微泡的浓度为(3.24±0.79)×109/ml,粒径范围为1.5～5.3μm,平均粒径为(2.84±0.4)μm;脂质载血卟啉(1mg)微泡的包封率为(30.25±4.45)%;Zeta电位为-(15.4±2.4)mV.经60℃射线灭菌后观察微泡形态、粒径及包封率无明显变化,其平均粒径大小及包封率分别为(2.24±0.3)μm,(27.39±2.91)%.静脉注射此载药微泡后,小鼠肝脏可见良好、持续的增强显像效果.结论 采用机械振荡法制备的载血卟啉脂质微泡,包封率较高,粒径分布均一,体内显像效果好,有望实现实时监控下的体内定点靶向给药.     

微流控芯片技术的研究进展

近年来,一种新兴的芯片技术——微流控芯片技术以其快速分析、低消耗、微型化和自动化等特点发展非常迅速。该技术是在分析化学领域发展起来的,它以分析化学为基础,以微机电加工技术为依托,以微管道网路为机构特征,以生命科学为主要应用对象,把整个实验室的功能集成到芯片上,而且可以多次使用,其应用前景非常看好。本文介绍了该技术的基本情况、芯片的发展历史、芯片的制作、芯片检测方法和应用。并对该技术今后的发展进行了展望。     

新型载氧超声微泡的制备及其基本特性研究

目的制备一种新型的载氧脂质微泡并考察其基本特性。方法采用机械振荡法制备高效载氧的脂质微泡,考察微泡形态、浓度、平均粒径和zeta电位情况,并观察其随时间变化及经60Co射线灭菌后情况。将微泡加入缺氧溶液,比较超声辐照前后(5 kHz、3.5 W)溶液中溶解氧浓度(dissolved oxygen,DO)的变化,并评价微泡增强兔肝超声显影的效果。结果自制载氧脂质微泡平均粒径约为(959.7±161.2)nm,粒径分布均匀,浓度约为(4.01±0.69)×109/mL,zeta电位为-(12.9±2.4)mV;在观察时间内(7 d)及60Co射线灭菌前后,微泡形态,粒径大小、浓度及zeta电位无明显变化(P>0.05);经超声辐照后,缺氧溶液溶解氧浓度明显升高;载氧脂质微泡可明显增强兔肝实质超声显影。结论自制载氧脂质微泡性能稳定,具有较好的携氧、释氧能力,并可作为一种新型的理想超声造影剂。