调控型表达丙型肝炎病毒NS3／4A蛋白酶转基因小鼠的建立

目的建立调控因素存在下表达丙型肝炎病毒（HCV）NS3/4A丝氨酸蛋白酶的转基因小鼠。方法采用分子克隆技术构建可受Tet-On调控系统和Cre-LoxP基因敲除系统双重调控表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的真核表达质粒PBI-Ⅲ/LoxP-Luc-PolyA-LoxP-NS3/4A。该重组质粒线性化后,经显微注射制备转基因小鼠。首建鼠及经PCR检测阳性的子代鼠与C57BL/6小鼠交配传代。选择部分F2鼠与已经稳定建系的转基因小鼠Lap杂交,利用在体生物发光成像系统（BLI）检测肝脏稳定表达荧光素酶（Luc）报告基因的经盐酸强力霉素（Dox）诱导的双转基因子代鼠,并选择性针对稳定表达系传代扩群。结果酶切鉴定和测序分析显示重组载体构建成功。经PCR检测得到6只转基因首建鼠,其中3只可繁殖传代并持续检测到阳性子代鼠。BLI结果显示,由其中1只首建鼠传代而来的不同F2鼠与Lap鼠杂交得到的部分双转基因鼠肝脏部位发光信号强烈,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达。结论建立了转基因小鼠NS3/4A,并筛选到调控因素存在时转入外源基因特异稳定表达的转基因小鼠,为进一步建立严格调控型表达NS3/4A蛋白酶的小鼠模型奠定基础。     

Tet-on和Cre／loxP双调控肝靶向表达Cre重组酶转基因小鼠的制备和功能评价

目的制备Tet-on和Cre/loxP系统双重调控下肝靶向性表达Cre重组酶的转基因小鼠rtTALAP-1/LC-1并评价其功能,为最终建立可突破胚胎期免疫耐受的双调控型HCV转基因小鼠模型奠定基础。方法选取适龄rtTALAP-1转基因小鼠与LC-1转基因小鼠交配,PCR法检测子代rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠基因组中是否插入了rtTA元件和Cre基因片段。双阳性rtTALAP-1/LC-1小鼠dox诱导1周后,以小动物活体成像系统检测小鼠肝脏的Luc萤光素酶信号,免疫组化检测Cre重组酶在小鼠肝脏等组织中的表达状况。结果 rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠在dox诱导后,仅在其肝脏检测到清晰的Luc萤光素酶信号,而其他脏器均未检测到萤光信号;免疫组化法也仅在小鼠肝细胞核中检测到Cre重组酶的表达,心脏、肾脏和骨骼肌等其他组织均未检测到Cre重组酶的表达。结论成功制备了rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠,其靶基因表达的诱导反应性和肝靶向性均良好,为最终制备双调控型丙型肝炎病毒（HCV）转基因小鼠模型奠定了良好的基础。     

大鼠胰岛细胞转染Wee1Hu基因延长异种胰岛细胞移植后存活时间

目的 探讨大鼠胰岛细胞转染Wee1Hu基因对异种胰岛细胞移植后存活时间的影响。方法 以Wistar大鼠为供者，Balb／c糖尿病小鼠为受者，进行异种胰岛细胞移植。实验分为2组，每组20只。实验组：将转染Wee1Hu基因的1×10^6个供者胰岛细胞悬于0．5ml无菌生理盐水中，注射至受者的腹腔；空白对照组：将1×10^6个空载体胰岛细胞用与实验组相同的方法注射至受者腹腔。实验组和空白对照组的部分受者在移植前1周腹腔注射降植烷0．5ml，并于胰岛细胞移植后开始口服环孢素A30mg／kg，直至实验结束。监测2组胰岛细胞移植后的胰岛素释放功能及存活时间。结果 胰岛细胞移植后，空白对照组的受者均维持高血糖，且体重持续下降，平均生存时间为（18±2．5）d；实验组的受者血糖在2d内均降至正常，且体重增加，生存时间延长（38±3．5）d；两组相比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。空白对照组维持正常血糖时间为（8±2．3）d，而实验组为（10±2．5）d。实验组中采用免疫抑制剂治疗的受者，长期维持正常血糖，平均维持时间超过30d，与空白对照组中采用免疫抑制剂治疗的受者比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 大鼠胰岛细胞转染Wee1Hu基因可延长异种胰岛细胞移植后的存活时间，与免疫抑制剂协同作用时效果更佳。     

环孢霉素A对白介素2受体表达的影响

近年来,有关环孢菌素(GsA)对白介素2受体(Tac)表达影响的研究较为活跃,其结论尚不完全一致。为此,我们对健康成人及肾移植病人外周血单个核细胞(PBMC)IL-2R进行检测,初步分析了CsA体内外作用后对Tac表达的影响。1 材料与方法 1.1病例:①14例正常人PBMC取自同济医院健康献血员;②13例肾移植病人PBMC均系同济医院器官移植病房肾移植患者。 1.2试剂:CsA:瑞士Sandoz公司;抗TacMCAb-A-E:武汉生物制品研究所;RPM1-1640     

耳部春季疹1例

耳部春季疹１例杨敬，李东宁（北宁市第二医院）本病主要见于青少年男性，现将临床遇到的１例女性患者报告如下患者女，２３岁，双侧耳朵起红斑水疱伴烧灼感３－４天。４天前自觉两侧耳朵瘙痒，继之两侧耳轮上缘出现红、肿，起水疱小的似米粒，大的似黄豆，成堆分布，有烧...     

胰岛素样生长因子、瘦素与胎儿生长受限的相关性研究

目的探讨胰岛素样生长因子一1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)、瘦素与胎儿生长发育的关系,分析小于胎龄儿及宫内发育迟缓儿的原因。方法血清及脐血瘦素水平测定采用放射免疫法(RIA),血清及脐血IGF-1水平测定采用免疫放射法(IRMA),比较两组孕妇血清及脐血中IGF-1、瘦素水平。结果 FGR组孕妇血清瘦素为(24.56±2.37)ng/L,IGF-1为(136.45±10.46)ng/L;脐血瘦素为(5.68±0.34)ng/L,IGF-1为(66.37±3.42)ng/L,与对照组[(25.01±1.96)ng/L]比较两组孕妇血清瘦素比较无统计学意义(P>0.05)。FGR组脐血瘦素水平明显低于对照组[(9.25±1.22)ng/L],差异有统计学意义(P<0.05)。FGR组血清及脐血IGF-I水平低于对照组,两组比较有统计学意义(P<0.01)。结论瘦素与IGF一1在胎儿宫内生长和发育过程中起重要的调节作用,可评价胎儿的生长发育及营养状态。     

慢性盆腔炎的治疗进展

慢性盆腔炎是指女性内生殖器及其周围结缔组织、盆腔腹膜发生的炎症,经久不愈反复发作.现代医学认为盆腔炎是因产后或流产后感染、宫腔内手术操作后感染、经期卫生不良、感染性传播性疾病、邻近器官炎症蔓延、宫内节育器等原因所致.由于本病是妇科常见病、多发病,好发于育龄期妇女,且病程长、治愈率低,近年来发病率逐渐上升.目前无确切有效的治疗方法,因而就目前的治疗进展概述如下.     

零距离接触 让我感受到了农民对健康的真实期盼

本想在全省深化拓展“树新形象、创新业绩”主题实践活动电视电话会议的第二天开展下村蹲点调研,突发的公共卫生事件却延缓了我的行程。4月5日,我带领3名同志,自带铺盖等生活用品,到磐安县玉山镇马塘村开展蹲点调研。农民健康体检和新型农村合作医疗制度是这次调研的主题。     

双靶向组织特异性HSV-tk/GCV抗瘤系统的构建及体外效应研究

目的：构建高靶向性基因转移及表达系统，并研究其介导HSVtk/GCV自杀基因系统对肝癌细胞的体外杀伤作用。方法： 通过重组技术分别构建antiTfR ScFvGAL4融合蛋白表达载体ScFvGAL4pET28a及含AFP启动子、GAL4特异性识别序列（GAL4rec）的HSVtk真核表达载体pEBAF/tkGAL4rec。IPTG诱导后，利用受体介导内吞作用介导pEBAF/tkGAL4rec质粒转染表面均高表达TfR的人肿瘤细胞株HepG2，SMMC7721及A549。潮霉素筛选后，MTT法检测GCV对它们的杀伤作用。结果：双酶切鉴定、SDSPAGE电泳及测序分别证明antiTfR ScFvGAL4融合蛋白及重组pEBAF/tkGAL4rec真核表达质粒构建成功。体外杀伤实验中，高分泌AFP(845 ng/ml) 的HepG2/tk细胞对GCV很敏感，且抑制率与GCV浓度及作用时间呈正相关；而低分泌AFP(2 ng/ml)的SMMC7721/tk细胞对GCV低度敏感；不分泌AFP 的A549/tk细胞则不敏感。结论：双靶向组织特异性HSVtk/GCV抗瘤系统构建成功，并显示出很好的靶向性。     

实验动物微生物、寄生虫抽样调查及分析

目的 监控实验动物微生物、寄生虫质量.方法 细菌检测:常规培养、生化鉴定,免疫荧光试验(IFA)查抗体.病毒检测:酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫酶试验(IEA)、免疫荧光试验(IFA)、血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HAI)方法检测抗体.真菌检测:常规培养、镜检.寄生虫检测:涂片镜检、间接血凝试验(IHA)方法查抗体.结果 五年来,SPF级动物检出了绿脓杆菌、嗜肺巴斯德菌、金黄色葡萄球菌、鞭毛虫,另外,泰泽病原体、小鼠细小病毒(MVM),小鼠仙台病毒(M-SC)抗体阳性.清洁级动物检出了蠕虫,且泰泽病原体、大鼠仙台病毒(R-SC)、小鼠仙台病毒(M-SV)、小鼠肝炎病毒(MHV)抗体阳性.普通级动物检出了志贺菌、皮肤病原真菌、体外寄生虫、弓形虫,同时检出兔出血症病毒(RHDV)、犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬肝炎病毒(ICHV)未达抗体保护效价,犬布鲁杆菌、猕猴疱疹病毒Ⅰ型(BV)抗体阳性.不同生产企业动物质量差异很大,有的动物合格率达100%,有的则同一动物有多种病原感染.结论 实验动物微生物、寄生虫质量控制有待加强.