靶向克隆法构建pET15b-VP3原核表达载体

目的 探索利用PCR产物靶向克隆法构建能够表达凋亡素的pET15b-VP3原核表达载体.方法 以PGEX-6P-1/TAT-VP3质粒为模板,PCR扩增VP3基因的366 bp片段,应用靶向克隆酶,将VP3基因插入到线性pET15b,得到重组表达载体pET15b-VP3,经过筛选,挑选出阳性克隆进行Xho Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切,图谱分析和重组质粒核苷酸序列分析以鉴定所构建的原核表达载体.结果 PCR产物经过电泳鉴定可见366 bp特征性的VP3片段,重组质粒经双酶切电泳获得了一个大小为366 bp的VP3片段,重组质粒测序证实VP3 cDNA编码区成功地插入了pET15b,且其序列与Gene     

硒化壳聚糖诱导NB4细胞凋亡过程中下调了survivin的表达

目的:研究硒化壳聚糖对NB4细胞凋亡及周期阻断作用,探讨这种作用与survivin蛋白表达的关系。方法:细胞分为三个浓度组(空白对照组、50mg/L组、100mg/L组),激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察药物对细胞凋亡及周期阻断作用;Western blot法检测survivin蛋白含量的变化。结果:硒化壳聚糖可诱导NB4细胞凋亡并阻断细胞于G0G1期,还可降低细胞survivin蛋白含量。结论:硒化壳聚糖可通过下调NB4细胞survivin蛋白含量,进而诱导细胞发生凋亡。     

蛋白酶激活受体在心搏骤停后综合征兔肾组织的表达

目的:探讨蛋白酶激活受体(protease-activated receptor,PAR)在心搏骤停后综合征(post-cardiac arrest syndrome,PCAS)兔肾组织的表达及其意义。方法:采用窒息性心搏骤停制备兔心搏骤停后综合征模型(PCAS组),取股静脉血监测器官功能,心肺复苏后48 h,取肾脏组织,采用免疫组织化学技术分别测定兔肾组织PAR-1、PAR-2蛋白表达情况。同时,以假手术组作为对照组。结果:免疫组化结果显示PCAS组、假手术组肾组织PAR-1平均光密度值分别为(1047.67±186.04)、(2278.79±285.77);PCAS组、假手术组肾组织PAR-2平均光密度值分别为(1495.99±133.26)、(2020.85±419.02),PCAS组兔肾脏组织PAR-1、PAR-2蛋白含量均显著减少,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PAR-1、PAR-2蛋白表达减少可能与PAR激活有关,并可能与心搏骤停后综合征的多器官功能障碍发生发展相关。     

硒化壳聚糖对NB4细胞的生长抑制作用与Ras信号通路的关系(英文)

目的研究硒化壳聚糖(Sc)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4增殖的影响,探讨这种影响与PML-RARα融合蛋白及其激活的Ras信号途径的关系。方法 NB4为表达PML-RARα融合蛋白阳性的细胞株,K562为表达PML-RARα融合蛋白阴性的细胞株,应用MTT法检测Sc对两种细胞株增殖的影响,应用流式细胞术和Western blot的方法检测两种细胞株相关蛋白含量的变化。结果 Sc对两种细胞株均可产生剂量和时间依赖性的抑制作用,相比之下,对K562细胞的抑制作用明显较弱(P<0.05)。Sc处理后,NB4细胞内PML-RARα融合蛋白和c-Jun信号蛋白含量明显减少,而K562细胞内c-Jun信号蛋白含量则轻微减少。结论 Sc可特异性地减少PML-RARα融合蛋白的含量从而下调其激活的Ras信号途径,最终抑制NB4细胞增殖。     

UBIO加路路通注射液对急性脑梗塞患者血液流变学的影响

近年来 ,紫外线照射充氧自血回输疗法 (Ｕｌｔｒａｖｉ ｏｌｅｔｂｌｏｏｄｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎａｎｄｏｘｙｇｅｎｔｉｏｎ ,ＵＢＩＯ)在临床治疗领域的发展引人注目 ,尤其对急性脑血管病的疗效更为显著。脑梗塞的发生发展与血液粘滞度 ,红细胞压积 ,血浆粘滞度等有着密切的联系。本文观察了 4 1例ＵＢＩＯ加路路通注射液及 30例单用路路通注射液治疗急性脑梗塞时的血液流变学变化。现将结果分析如下 :1　资料与方法1.1　临床资料选择经头颅ＣＴ检查证实的急性脑梗塞患者 71例 ,随机分为二组。ＵＢＩＯ加路路通组 4 1例 ,男 2 9例 ,女 1…     

硒化壳聚糖促进体外培养皮肤成纤维细胞增殖

目的研究硒化壳聚糖对体外培养的皮肤成纤维细胞增殖的影响。方法用不同剂量（25、50、100、200、400mg/L）硒化壳聚糖作用于成纤维细胞,光镜下观察药物对细胞形态的影响;MTT法、3H-TdR掺入法、细胞生长动力学研究用于检测药物对细胞增殖影响,LDH漏出率检测药物对细胞增殖及损伤的影响,并以等体积细胞培养液处理为对照组。结果各药物浓度组处理细胞后,细胞形态未见明显改变,均可使细胞吸光度值增加,细胞倍增时间缩短,促进表皮细胞对3H-TdR的掺入（P〈0.05）,降低LDH漏出率（P〈0.05）。结论硒化壳聚糖对体外培养皮肤成纤维细胞增殖具有促进作用。     

大承气汤降低心脏骤停后综合征兔血清类胰蛋白酶及炎性细胞因子的水平

目的观察大承气汤对心脏骤停后综合征(PCAS)兔血清肥大细胞类胰蛋白酶和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素8(IL-8)水平的影响。方法大耳白兔30只,随机分为假手术组、模型组、大承气汤组。采用窒息性心脏骤停制备兔PCAS模型。大承气汤组在自主循环恢复后15 min给予大承气汤每日15 g/kg灌胃(分2次使用)。分别在0、24、48、72 h观察反映器官功能的检测指标,采用ELISA测定兔血清类胰蛋白酶、MCP-1、IL-8的水平。结果大承气汤可明显减轻心、脑、肝、肾功能障碍。PCAS模型组血清类胰蛋白酶、MCP-1和IL-8含量均明显高于假手术组(P0.01)。大承气汤组血清类胰蛋白酶含量(6 h)、MCP-1含量(6、24、48 h)和IL-8含量(6、24 h)均明显低于PCAS模型组(P0.05或P0.01)。结论大承气汤可降低PCAS兔血清类胰蛋白酶、MCP-1、IL-8的水平。     

卵裂球细胞乙型肝炎病毒FISH检测法的建立

目的:建立一种灵敏、特异的卵裂球细胞乙型肝炎病毒(HBV)感染的检测方法。方法:根据HBV基因上的保守序列设计并合成引物,应用PCR技术制备探针并进行生物素标记。废弃的胚胎卵裂球经激光打孔,活检2~4个卵裂球细胞,利用生物素标记的探针,应用荧光原位杂交技术(FISH)检测HBV感染情况。结果:在HBV的感染者的38例子代胚胎卵裂球细胞,11例呈现阳性信号,健康对照组未检测到阳性信号。结论:荧光原位杂交技术(FISH)可用于卵裂球细胞HBV感染的检测,在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)实践中对降低HBV垂直传播有重要意义。     

大鼠树突状细胞的体外扩增与初步鉴定

目的建立体外诱导和扩增大鼠骨髓树突状细胞(DCs)的方法，并进行生物学鉴定。方法大鼠骨髓细胞经贴壁去除悬浮细胞，加入细胞因子(IL-4和GM—CSF)培养2周。经过先镜，透射电镜观察培养DCs的形态学特征；通过同种T细胞混合培养，采用MTT比色分析法测定不同浓度的DCs发同种T细胞增殖的能力。结果培养的DC胞浆突起大而长，呈树突状，具有DCs的典型形态，并且具有强烈的激发同种异体T细胞增殖的能力。结论采用大鼠骨髓细胞经贴壁去除悬浮细胞，加入细胞因子(IL-4和GM—CSF)序贯培养，能获得大量、较高纯度的DCs。