抗人VEGF发卡状核酶基因的构建及其对肝癌细胞VEGF蛋白表达的影响

利用计算机辅助设计合成针对人VEGF的发卡状核酶（RZ）,定向亚克隆于真核表达载体pcDNA3．1^＋中,转染肝癌细胞SMMC-7721,RT—PCR鉴定。ELISA法和MTT法检测SMMC-7721细胞对照组、SMMC-7721／pcDNA3．1^＋空载体对照组和SMMC-7721／RZ基因转染组细胞VEGF表达和增殖情况,流式细胞术检测各组细胞周期和凋亡情况。结果为SMMC-7721／RZ基因转染组细胞VEGF表达水平和细胞增殖速率显著低于SMMC-7721细胞对照组和SMMC-7721／pcDNA3．1’空载体对照组。MC-7721／RZ基因转染组细胞出现凋亡峰,其凋亡率达11．O％,而细胞对照和空载体细胞对照均末出现。认为SMMC-7721／RZ转基因细胞株的成功构建和生物学特性的初步研究为进-步建立裸鼠人肝癌模型及评价RZ对体内肝癌生长的抑制作用奠定了-定的基础。     

重组人白细胞介素24对肺癌A549细胞生长和肿瘤血管生成影响的实验研究

白细胞介素24（IL-24）即黑色素瘤分化相关基因7（mda-7），除具有免疫刺激应答功能外，还有抑制肿瘤细胞生长、促进其凋亡和抑制肿瘤血管生成的作用，被认为是一种新的抑癌基因。本研究观察了pET-21a-IL-24重组质粒表达系统的表达产物——部分纯化人重组IL-24（rhlL-24）蛋白，在体内外对肺癌A549细胞、瘤体生长的抑制作用和抗肿瘤血管生成作用。     

肿瘤坏死因子与恶性疾病

自从Garswell等首次发现肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)以来,TNF与临床恶性疾病的关系越来越受到人们重视。TNF分为α和β两亚型,TNF_a主要由激活的单核巨噬细胞产生,TNF9主要由T细胞和B细胞产生,前者曾称为恶液质素,后者为淋巴毒素;在氨基酸水平上,两者有30％同源的,可以与相同的TNF受体结合。TNF除了具有杀伤肿瘤细胞效应外,也是机体炎症和免疫应答的重要介质。另外,TNF能诱生其它细胞因子,间接调节免疫活性细胞而增加机体免疫防护能力,也能为其它细胞因子所诱生。TNF具有多种生物学活性,它与恶性疾病发病的关系以及临床应用愈来愈受到重视,本文就这两方面研究现状作一综述。     

羧甲基茯苓多糖对人外周血淋巴细胞分泌IFN-α和IFN-γ的调节作用及中间体制备

用羧甲基茯苓多糖（CMP）预处理人外周血淋巴细胞（HPBL），经200IU／mlIFN－α启动后，加NDV的促诱生组的α-干扰素（IFN－α）效价比无CMP的常规诱生组高1．2倍；经PHA和／或ConA促诱生组的γ-干扰素（IFN－γ）效价比无CMP的PHA和／或ConA刺激常规诱生组高0．5倍（P＜0.01），尤以CMP＋PHA＋ConA促诱生的IFN－γ效果最佳。说明CMP具有IFN－α和IFN－γ促诱生效应（P＜0．01）。用CMP促诱生的IFN－α和IFN－γ中间体经各项指标检测不仅IFN－α和IFN－γ效价高，而且可达到生物制剂药用标准，经临床试验证明安全有效。     

沙苑子黄酮抗裸鼠人肝癌移植瘤的实验研究

目的观察沙苑子黄酮(ACF)对人肝癌细胞SMMC7721裸鼠移植瘤生长的影响。方法30只裸小鼠建立人肝癌SMMC7721细胞皮下移植瘤模型后随机分为模型组、环磷酰胺(CTX,25mg·kg-1)组、ACF-1(400mg·kg-1)、ACF-2(200mg·kg-1)和ACF-3(100mg·kg-1)5组,给予相应药物,观察肿瘤生长曲线和移植瘤重量,计算肿瘤抑制率;免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(proliferationcellnuclearantigen,PCNA)在肿瘤组织中的表达;光镜和电镜观察肿瘤组织病理变化。结果ACF-1组和ACF-2组裸鼠肿瘤体积和重量明显降低,ACF各给药组平均抑瘤率分别为68.20%、41.19%、26.79%;ACF-1组和ACF-2组肿瘤组织PCNA表达率明显减少(P<0.01,P<0.05);病理学观察结果,ACF可引起SMMC7721细胞坏死,诱导SMMC7721细胞凋亡。结论ACF可抑制SMMC7721裸鼠移植瘤的生长,其作用可能与下调肿瘤组织PCNA表达和诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

造血生长因子联合应用对骨髓粒-单系造血祖细胞体外增殖的影响

目的：研究不同造血生长因子联合应用对骨髓粒－单系造血祖细胞体外增殖的调节作用。方法：应用甲基纤维素体外半固体培养法，检测各种生长因子联合应用组，ＣＦＵ－ＧＭ集落的生长情况。结果：造血生长因子的联合应用不仅可增加ＣＦＵ－ＧＭ集落数，促进ＣＦＵ－ＧＭ集落的体外形成，而且，也能明显地增加ＣＦＵ－ＧＭ集落的体积，大型ＣＦＵ－ＧＭ集落数的比例在各联合应用组增加显著，其中以ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳＦ联合应用组作用最强。同时，结果还显示，造血生长因子的联合应用可加速ＣＦＵ－ＧＭ集落的形成。结论：造血生长因子的联合应用能够协同地促进骨髓粒－单系造血祖细胞的体外增殖，从而为联合应用造血生长因子来扩增少量骨髓，外周血或脐血中造血干／祖细胞进行移植治疗白血病或实体瘤提供了实验依据。     

剌五加多糖对S_(801)和S_(7811)白血病细胞系干扰素促诱生作用

刺五加是五加科植物,是祖国医学中常用的“补中”、“益精”、“补气”的中草药。我们用自建的S_(801)细胞系(来自急淋白血病女婴)和S_(7811)细胞系(来自急粒-单型白血病男性老人)经刺五加多糖预处理进行了促诱生试验。其方法和结果结下: 收获S_(801)或S_(7811)细胞,用1640培养基调整活细胞浓度为500-1000万/ml,分成三组试验。 1.常规诱生对照组:只加新城鸡瘟病毒(NDV-F系)进行常规诱生。 2.干忧素起动对照组:在加NDV-F系诱生前先经150单位/ml干扰素37℃下起动2小时。     

hOSM在COS-7细胞中表达及对人A375黑色素瘤细胞的生长抑制作用

目的:克隆人抑瘤素(hOSM)基因并构建真核表达载体,在COS-7细胞中表达具有抑制人A375黑色素瘤细胞生长的基因重组蛋白。方法:用PMA刺激U937细胞,抽提总RNA,经RT-PCR获得cDNA,与pUCmT载体连接,经PCR获得全长hOSM基因,再与pcDNA3·1/myc-his(-)A真核表达载体连接,构建真核表达重组质粒pcDNA3·1A-hOSM,经PCR和限制性酶切及DNA测序鉴定后,在COS-7细胞中进行瞬时表达,采用RT-PCR鉴定hOSM基因的转录,MTT法检测表达产物抑制A375细胞生长的活性。结果:重组入载体中的基因片段不仅方向正确,而且所克隆的hOSM基因,与GeneBank报告序列完全一致,并成功地在COS-7细胞中瞬时表达了具有抑制A375细胞生长的rhOSM蛋白。结论:本研究成功地克隆出hOSM基因并在COS-7细胞中获得瞬时表达,证明了表达的基因重组蛋白具有抑制人A375黑色素瘤细胞生长的活性,为在真核细胞中进行稳定表达,深入研究rhOSM的生物学功能创造了条件。     

抗VEGF发卡状核酶抑制肝癌VEGF表达和移植瘤生长

目的:采用抗人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)发卡状核酶基因转染肝癌细胞,观察核酶对VEGF表达及肿瘤生长的影响。方法:采用脂质体介导的方法,将人工合成的抗VEGF发卡状核酶基因转染肝癌细胞SMMC-7721,同时制备空载体和细胞对照,经G418筛选获得阳性克隆,基因组水平鉴定核酶在细胞中的表达,半定量RT-PCR法和免疫组化法观察核酶对SMMC-7721细胞VEGF表达的影响。接种各组细胞于裸鼠皮下,观察瘤体体积大小和质量,免疫组化法观测各组肿瘤微血管变化和VEGF的表达。结果:核酶基因成功导入到肿瘤细胞中,转基因细胞的增殖速率明显下降(P<0.01),转染核酶组细胞VEGF水平明显下降(P<0.01)。移植瘤成瘤率和生长速度减慢(P<0.01),肿瘤组织VEGF表达和血管形成减少(P<0.01)。结论:抗人VEGF发卡状核酶基因在体内、体外均可抑制肝癌VEGF表达,通过减少血管形成抑制肿瘤生长,为进一步开展肝癌血管靶向基因治疗提供实验依据。     

Ａｄ-ＩＮＧ４抑制裸鼠人肝癌移植瘤生长的体内实验研究

目的　研究携带ＩＮＧ４基因的重组腺病毒（Ａｄ-ＩＮＧ４）对人肝癌细胞株ＳＭＭＣ-７７２１移植瘤生长的抑制作用及其潜在的分子机制。方法　将扩增的Ａｄ-ＩＮＧ４感染ＳＭＭＣ-７７２１细胞,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测Ａｄ-ＩＮＧ４在ＳＭＭＣ-７７２１细胞中的转录。用ＳＭＭＣ-７７２１细胞建立裸鼠人肝癌移植瘤模型,予Ａｄ-ＩＮＧ４（１×１０^９ｐｆｕ／ｍｌ）５０μｌ对移植瘤瘤体注射治疗,观察肿瘤生长变化;３周后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重;免疫组化法检测ｐ２１、ＣＯＸ-２、Ｆａｓ、Ｂｃｌ-２、Ｂａx、Ｃａｓｐａｓｅ-３、ＶＥＧＦ、ＣＤ３４等因子的表达。结果　Ａｄ-ＩＮＧ４在ＳＭＭＣ-７７２１细胞中成功表达;Ａｄ-ＩＮＧ４对裸鼠人肝癌移植瘤有明显的生长抑制作用,Ａｄ-ＩＮＧ４组瘤体显著减小（Ｐ＜０.０１）,抑瘤率达４１.６４％;免疫组化检测显示,Ａｄ-ＩＮＧ４抑癌的分子机制可能与上调ｐ２１、Ｆａｓ、Ｂａｘ和Ｃａｓｐａｓｅ-３的表达及下调ＣＯＸ-２、Ｂｃｌ-２、ＶＥＧＦ和ＣＤ３４的表达有关。结论　Ａｄ-ＩＮＧ４能有效抑制ＳＭＭＣ-７７２１裸鼠人肝癌移植瘤的生长,其机制可能通过抑制肿瘤细胞生长、血管形成和激活细胞凋亡等多个途径共同发挥抑癌效应。