人PPARδ受体cDNA全长序列的克隆及测序

目的:对人过氧化物酶体增殖物激活受体δ(hPPAR δ)全长cDNA序列进行克隆并测序,为构建含hPPAR δ基因真核表达载体及其受体功能研究奠定基础.方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从HepG2细胞总RNA克隆hPPAR δ全长cDNA序列,胶回收目的条带后与pMD19-T载体连接并转化DH5α感受态菌,用BamH Ⅰ、Sal Ⅰ双酶切及基因测序筛选、鉴定阳性克隆pMD19-hPPARδ-T载体中hPPARa基因的完整性和忠实性.结果:经酶切和测序证实pMD19-hPPARδ-T载体中插入的hPPARδ基因序列与GeneBank中提交的序列(AY919140)一致.结论:成功克隆了hPPARδ基因,构建了pMD19-hPPARδ-T中间载体,为含hPPARδ基因真核表达载体的构建和受体功能研究打下了良好的基础.     

种属差异对实验性高脂血症的影响

目的观察动物种属差异对实验性高脂血症的影响.方法分别用老年小鼠、正常大鼠和正常家兔建立动物高脂血症模型,以动物血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)为指标,研究不同动物种属建立的高脂模型中,上述指标变化是否存在差异.结果实验发现老年小鼠血清LDL和TC升高,HDL变化不明显,而TG则下降;大鼠血清TC和LDL显著升高,HDL明显下降,而TG未见显著升高;家兔血清TG、TC和LDL显著升高,而HDL也明显升高.结论动物种属差异对实验性高脂血症存在显著影响.     

环氧化酶-2与急性脑损伤关系研究进展

环氧酶(cyclooxygenase,COX)是前列腺素(prostaglandins,PG)合成过程中一个重要的限速酶,可将花生四烯酸(arachidonicacid,AA)代谢成各种前列腺素产物,从而维持机体的各种病理生理过程,其中诱导型环氧酶,亦称COX-2,除在外周炎症组织内表达外,在中枢神经系统(central nervous system,CNS)也有表达。COX-2与急慢性的脑损伤发生、发展密切相关,其机制可能涉增加前列腺素释放、增加氧化应激损伤、增强神经炎性反应、加重兴奋性氨基酸毒性,从而促进细胞凋亡。对其拮抗剂的研究有望为脑损伤治疗找到新的途径和保护剂。     

人PPARγ1受体cDNA全长序列的克隆及测序

目的对人过氧化物酶体增殖物激活受体γ1（hPPARγ1）全长cDNA序列进行克隆并测序，为构建含hPPARγ1基因真核表达载体奠定基础。方法通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）从HepG2细胞总RNA克隆hPPARγ1全长cDNA序列，胶回收目的条带后与pMD19-T载体连接并转化DH5α感受态菌，用XhoⅠ、SmaⅠ双酶切及基因测序筛选鉴定阳性克隆pMD19-hPPARγ1-T载体中hPPARγ1基因的完整性和忠实性。结果经酶切和测序证实，pMD19-hPPARγ1-T载体中插入的hPPARγ1基因序列与GeneBank中提交的序列一致。结论成功克隆了hPPARγ1基因，构建了pMD19-hPPARγ1-T中间载体。     

短期跑步训练对中老年及老年大鼠空间学习能力的作用

目的:探讨跑步训练对中老年及老年雌、雄性大鼠空间学习能力的作用.方法:将14 mo龄和24 mo龄的雌、雄性SD大鼠随机分为跑步训练组与空白对照组,前者进行跑步训练4 mo,后者在普通环境中饲养4 mo后,测试其在Morris水迷宫中的表现.结果:跑步训练至18 mo龄的雌性大鼠空间学习能力显著强于同月龄的空白对照组,但跑步训练至18mo龄的雄性大鼠空间学习能力与空白对照组相比并无显著性的差异.跑步训练至28 mo龄的雌、雄性大鼠空间学习能力与空白对照组相比均不存在显著性的差异.结论:短期跑步训练可使中老年雌性大鼠的空间学习能力显著提高,这一结论为今后运用跑步锻炼等手段来延缓老年人大脑功能下降的进程提供了重要的理论依据.     

美洛昔康对慢性铝超负荷致神经元退变大鼠海马环氧化酶2表达的影响

目的探讨环氧化酶2(COX-2)抑制剂对神经元退变大鼠海马COX-2表达的影响。方法大鼠分为正常对照、慢性铝超负荷模型、美洛昔康1和3mg·kg-1组。除正常对照组外,大鼠ig给予葡萄糖酸铝(Al3+200mg·kg-1·d-1),每周5d,连续20周。给药组大鼠在每次给予铝盐后30min分别ig美洛昔康。Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,HE染色观察大鼠海马神经元形态,RT-PCR检测大鼠海马COX-2 mRNA表达,Western蛋白印迹法检测海马COX-2蛋白表达。结果与正常对照组比较,慢性铝超负荷模型组大鼠空间学习记忆能力明显下降,海马神经元核固缩,海马COX-2 mRNA和蛋白表达均明显增加。同时给予美洛昔康可明显改善慢性铝超负荷导致的大鼠学习记忆能力降低和海马神经元损伤,并明显抑制慢性铝超负荷导致的海马COX-2 mRNA和蛋白表达的增加。结论美洛昔康对慢性铝超负荷导致的神经元退变大鼠海马COX-2表达具有抑制作用,提示COX-2抑制剂对神经元退变具有一定的防治作用。     

非诺贝特对全脑缺血/再灌注损伤大鼠的保护作用

目的探讨非诺贝特对大鼠全脑缺血/再灌注损伤(I/R)的保护作用及机制。方法采用双侧颈总动脉夹闭合并低血压方法建立全脑缺血/再灌注大鼠模型。药物非诺贝特(fenofibrate,FF;33、100、300mg.kg-1)在缺血前30min灌胃给药,PPARα受体拮抗剂MK886(6mg.kg-1)在给予非诺贝特300mg.kg-1前腹腔注射。Morris水迷宫测定大鼠空间学习能力变化,病理切片HE染色观察海马神经元形态结构变化,免疫组化染色检测海马组织核转录因子NF-κBp65蛋白的表达,生化酶学方法观察超氧歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量变化,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α含量变化。结果非诺贝特能明显缩短全脑缺血/再灌注大鼠的寻台潜伏期,减轻全脑缺血/再灌注大鼠海马神经元损伤,降低海马神经元NF-κB p65蛋白表达,明显阻遏缺血/再灌注大鼠海马IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA含量的升高和IL-10含量及SOD活性的降低;预先给予MK886能取消非诺贝特的作用。结论非诺贝特对缺血/再灌注脑损伤有明显保护作用,其机制与激活PPARα,抑制NF-κB活性,抑制CNS炎症反应和氧化应激有关。     

美洛昔康对全脑缺血/再灌注大鼠脑损伤的作用观察

目的探讨美洛昔康对大鼠全脑缺血/再灌注损伤的保护作用。方法采用双侧颈总动脉夹闭合并低血压方法建立全脑缺血/再灌注大鼠模型。美洛昔康(1、3和5mg·kg-1)在缺血前30min腹腔注射给药。Morris水迷宫测定大鼠空间学习能力,病理切片HE染色观察海马神经元形态结构,免疫组化检测海马组织核转录因子NF-κB p65蛋白表达,生物酶学方法观察超氧歧化酶活性和丙二醛含量。结果美洛昔康能明显缩短全脑缺血/再灌注大鼠的寻台潜伏期,减轻全脑缺血/再灌注大鼠海马神经元损伤,降低海马神经元NF-κB p65蛋白表达,明显阻遏全脑缺血/再灌注大鼠海马MDA含量的升高和SOD活性的降低。结论美洛昔康对全脑缺血/再灌注致大鼠脑损伤有明显的保护作用,其机制可能与其抑制COX-2活性,减少PGs等代谢产物的产生,抑制NF-κB活性,从而抑制炎症反应和氧化应激功能有关。