重组质粒phPPARγ1-IRES2-EGFP高效体外转染表达体系的建立

目的:建立含人PPARγ1受体基因phPPARγ1-IRES2-EGFP重组质粒高效体外转染表达体系.方法:采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000将phPPARγ1-IRES2-EGFP转染入293细胞,荧光显微镜观察转染细胞绿色荧光蛋白(GFP)报告基因表达强度及其转染效率,并对转染细胞hPPARγ1表达进行荧光定量PCR和Western Blot分析.结果:荧光显微镜下可见转染phPPARγ1-IRES2-EGFP质粒的293细胞GFP报告基因高表达,转染效率为(83±11)%;荧光定量PCR和Western Blot检测结果表明,转染细胞hPPARγ1表达水平高于空载体对照组3个数量级,说明导入的重组质粒能够高效表达hPPARγ1.结论:成功建立phPPARγ1-IRES2-EGFP重组质粒高效体外转染表达体系,为hPPARγ1受体功能研究和基于hPPARγ1为靶标的药物筛选平台建立打下了良好的基础.     

Cu-Zn SOD活力变化与铝致小鼠神经元退行性变关系

目的观察在铝染毒致小鼠脑神经元退行性变过程中铜锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn SOD)活力变化的规律,以分析两者的关系。方法葡萄糖酸铝溶液(按Al3 400 mg/kg剂量)灌胃给予小鼠,1次/d,每周5 d,连续12周。观察小鼠被动回避性学习记忆能力和空间识别能力的改变、脑组织Cu-Zn SOD活力、脑组织丙二醛(MDA)和总蛋白含量的变化,以及海马神经元的病理形态学变化。结果与对照组比较,铝染毒小鼠第6周后跳台潜伏期呈时间依赖性进行性缩短,而水迷宫寻台时间显著延长,大脑皮层和海马Cu-Zn SOD活力呈明显先升高后下降趋势,MDA和蛋白水平持续升高,海马出现进行性神经元核固缩加重和神经元丢失。结论铝染毒导致代表小鼠脑氧化应激的MDA含量增加和代表抗氧化应激反应的Cu-Zn SOD活力增强;两者反应失衡可能与铝染毒致神经元退行性变有关。     

酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4、1A2活性的作用

目的 观察酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4、1A2活性的作用,为临床上安全有效地联合用药提供实验依据.方法 采用健康成人肝细胞微粒体,分为对照组和处理组.酮康唑处理组分别加入不同浓度的酮康唑1 ml,对照组仅加入培养液,孵育15 min后再加入CYP450同工酶3A4和1A2的相应底物(分别为睾酮和非那西丁)再孵育20 min.反应终止后用高效液相色谱仪测量代谢产物(分别为6β-羟基睾酮与对乙酰氨基酚)的生成量,分别代表3A4和1A2的活性.结果 细胞色素P450同工酶3A4的相对活性百分比减小到对照组50%时(IC50)酮康唑的质量浓度为0.16mg/L.而同工酶3A4的相对活性百分比随质量浓度酮康唑增加逐渐减小,各处理组与对照组比较差异均有显著性意义(P＜0.05).低剂量细胞色素P450同工酶1A2的相对活性百分比处理组与对照组比较明显降低(P＜0.05),高剂量细胞色素P450同工酶1A2的相对活性百分比处理组与对照组比较则明显升高(P＜0.05).结论 酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4的活性有抑制作用.然而对细胞色素P450同工酶1A2的活性则是低剂量有抑制作用,衙高剂量有诱导作用.     

环氧化酶2在铝负荷致大鼠海马神经元损伤中的作用

目的:研究环氧化酶2(COX-2)在铝盐致大鼠海马神经元损伤中的作用。方法:原代海马神经元培养7 d,予以铝盐负荷(终浓度200 μmol·L^-1)建立大鼠海马神经元损伤模型,以COX-2特异性干扰腺病毒(MOI=100)转染神经元,Western blotting检测COX-2蛋白表达水平,酶化学法检测海马神经元超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率及MTT值,倒置荧光显微镜观察海马神经元病理形态变化。结果:COX-2特异性干扰腺病毒转染的神经元COX-2蛋白表达下降,SOD活性、MDA含量、LDH漏出率、MTT值以及大鼠海马神经元的形态和结构未见明显异常变化,但其明显提高了铝盐负荷基础上的海马神经元存活率和SOD活性,显著降低了LDH漏出率和MDA含量,并改善了铝盐负荷后神经元的病理学形态。结论:海马神经元COX-2表达的适度沉默,不会影响海马神经元的形态和功能,但对于铝负荷导致的神经元损伤有保护作用。     

脑缺血再灌注致小鼠神经元退行性变进程中自由基水平和SOD-1表达的变化

目的探讨脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)致神经元退行性变自由基和SOD-1表达的时程变化。方法 NIH小鼠160只,分为I/R组和假手术组,每组80只。抽取并回输约40%总血量加双侧颈总动脉夹闭20 min建立I/R损伤模型。分别于术后5、15、30、60 d以光学显微镜观察神经元损伤;Morris水迷宫评价学习记忆能力;分光光度计法检测SOD-1活性和丙二醛(MDA)含量;RT-PCR和Western blot分别检测海马SOD-1 mRNA和蛋白表达。结果假手术组脑组织MDA含量、SOD-1活性及蛋白、mRNA表达分别为(0.549±0.049)nmol/mg、(55.134±4.076)U/mg、30.413±2.962和104.541±18.825。与假手术组比较,I/R组小鼠学习记忆能力显著降低,术后5、15、30、60 d脑组织MDA含量[(0.673±0.087)、(0.782±0.101)、(0.719±0.094)、(1.084±0.140)nmol/mg]进行性显著升高(P<0.05);术后5 d和15 d I/R组SOD-1活性[(42.522±3.701)、(37.011±4.843)U/mg]和蛋白表达(23.145±3.476、15.746±2.344)显著降低(P<0.05);术后30 d和60 d I/R组SOD-1活性[(51.801±6.706)、(50.202±6.488)U/mg]与假手术组间差异无显著性(P>0.05),但SOD-1蛋白表达(40.587±6.154、44.263±6.597)较假手术组显著升高(P<0.05);各组SOD-1 mRNA表达水平无显著差异(P>0.05);组织学检测显示I/R组海马出现进行性神经元核固缩加重和神经元丢失。结论 I/R致小鼠神经元退行性变与SOD-1表达和功能异常和氧化应激进行性增强有关。     

咖啡酸对慢性应激大鼠的抗抑郁作用

目的探讨咖啡酸对慢性应激大鼠的抗抑郁作用。方法采用各种慢性不可预见轻微刺激建立大鼠抑郁模型。21 d后,ig给予大鼠咖啡酸10,30和50 mg.kg-1,连续21 d。通过旷场实验检测中央格停留时间、水平活动和垂直活动情况,通过强迫游泳实验检测大鼠静止不动行为百分比(PI);检测海马超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量。结果与正常对照组相比,模型组大鼠在旷场实验中央格停留时间增长,水平活动和垂直活动减少,强迫游泳静止不动状态增加,SOD活性显著降低,MDA含量显著升高(P<0.01)。与模型组相比,咖啡酸10～50 mg.kg-1组能够显著缩短停留时间(P<0.05)、增加垂直活动(P<0.01),但对水平活动无明显影响。模型组PI为(79.69±15.84)%,咖啡酸10～50 mg.kg-1组PI显著降低,分别为(16.00±2.11)%,(10.33±2.92)%和(7.33±2.63)%。与正常对照组相比,模型组SOD酶活性显著降低,MDA含量显著增加(P<0.01),与模型组相比,咖啡酸10～50 mg.kg-1能够显著增加SOD酶活性,分别为模型组的1.50,2.46和2.59倍(r=0.915,P<0.01);MDA含量显著降低,分别为模型组的18.64%,11.37%和6.35%(P<0.01),且呈剂量依赖性(r=0.982,P<0.01)。咖啡酸与舍曲林5 mg.kg-1的作用相似。结论咖啡酸对慢性应激大鼠有一定的抗抑郁作用。     

消郁安神胶囊对慢性轻度不可预见应激大鼠抑郁模型的影响

目的:观察消郁安神胶囊对慢性轻度不可预见应激抑郁大鼠模型的影响。方法:以慢性轻度不可预见应激建立大鼠抑郁模型,灌胃给予消郁安神胶囊(3.3,10,30 mg.kg-1)和舍曲林(5 mg.kg-1)。通过旷场实验、强迫游泳实验测定大鼠行为学变化情况。生化酶学方法测定大鼠海马中超氧化物歧化酶(SOD)与丙二醛(MDA)的含量变化。结果:旷场实验结果显示慢性轻度不可预见应激抑郁大鼠在中央格停留时间明显延长、垂直运动次数明显减少;抑郁大鼠在强迫游泳实验中静止时间所占百分比明显超过正常组;抑郁大鼠海马MDA含量明显升高,SOD活性明显降低。消郁安神胶囊给予能剂量依赖性缩短抑郁大鼠在中央格停留时间、增加垂直运动次数,并能明显减少大鼠在强迫游泳实验中静止时间。消郁安神胶囊能明显下调抑郁大鼠海马MDA含量并提高SOD活性。结论:消郁安神胶囊能明显改善慢性轻度不可预见应激大鼠的抑郁行为,其机制可能与抗氧化应激、减少炎症反应有关。     

尼莫地平减轻铝过负荷所致的小鼠神经元退行性变

目的: 探讨尼莫地平对铝过负荷致神经元退行性变的影响。方法: 105只小鼠随机分为对照组、铝过负荷组和尼莫地平治疗组。铝过负荷组和尼莫地平治疗组以0.25%氯化铝脑室内注射2 μL qd×5 d,建立铝过负荷致神经元退行性变小鼠模型;对照组注射等体积人工脑脊液。尼莫地平治疗组以尼莫地平80 mg/kg灌胃bid×30 d,对照组和铝过负荷组以等体积生理盐水灌胃bid×30 d。组织学观察神经元损伤;跳台实验检测学习记忆能力;分光光度计法检测血红素加氧酶(HO)活性;Western blotting和免疫组织化学法检测HO-1蛋白表达水平;电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)检测铝离子和铁离子水平。结果: 与对照组相比,铝过负荷组学习记忆能力显著降低(P<0.05),神经元损伤严重,HO-1蛋白表达水平、HO活性和铁离子浓度显著升高(P<0.05);与铝过负荷组相比,尼莫地平治疗组学习记忆能力显著提高(P<0.05),神经元损伤减轻,HO-1蛋白表达水平、HO活性和铁离子浓度显著降低(P<0.05)。结论: 尼莫地平可能通过抑制HO-1表达、维持铁离子稳态,减轻铝过负荷所致的神经元退行性变。     

短期丰富生存环境对中老年大鼠空间学习能力的作用及性别差异

目的:探讨短期丰富生存环境对中老年大鼠空间学习能力的作用及性别差异.方法:将14月龄的Sprague-Dawley(SD)大鼠分雌、雄性后再随机分为丰富生存环境组与空白对照组,前者在丰富生存环境条件下饲养,后者在普通环境下饲养,4个月后分别测试在Morris水迷宫中的成绩.结果:短期丰富生存环境下,雌性大鼠的空间学习能力显著强于空白对照组,而同样条件干预的雄性大鼠空间学习能力与空白对照组相比无显著性差异.另外,在普通环境中饲养4个月的雄性大鼠空间学习能力明显强于雌性大鼠,而丰富生存环境条件下雌、雄性大鼠空间学习能力相比无显著性差异.结论:中老年雄性大鼠空间学习能力强于雌性大鼠,但中老年雌性大鼠大脑功能的可塑性可能要强于雄性大鼠,短期丰富生存环境的干预对于中老年雌性大鼠空间学习能力有显著性影响.本研究结果为将来寻找延缓大脑衰老过程的行为学手段提供了重要的理论依据.     

大鼠脑桥呼吸调整中枢神经元对低氧呼吸反应的调节作用

目的探讨大鼠脑桥呼吸调整中枢神经元N-甲基-D-天氡氨酸(NMDA)受体及γ-氨基丁酸(GABA)受体对低氧呼吸反应的调节作用。方法通过显微注射技术向大鼠脑桥呼吸调整中枢内微量注射NMDA受体阻断剂D-2-氨基-5-磷酸基戊酸(D-AP5)和GABA受体阻断剂荷包牡丹碱(BIC),观察其对低氧呼吸反应膈神经放电的影响。结果脑桥微量注射D-AP5后,急性低氧反应膈神经放电无显著性改变,但低氧后呼气时间延长的幅度及呼吸频率下降的幅度均减小(P均<0.05),低氧后呼吸频率下降(PHFD)被削弱;脑桥微量注射BIC后,急性低氧反应膈神经放电频率升高的幅度及呼吸时间缩短的幅度均增大(P均<0.05),PHFD无显著性改变。结论大鼠脑桥呼吸调整中枢神经元NMDA受体介导的突触传递主要影响PHFD,GABA受体介导的突触传递主要影响急性低氧反应。