重组人PPARα基因载体phPPARα-IRES2-EGFP高效体外转染表达体系的建立

目的 建立体外phPPARα-IRES2-EGFP质粒高效转染并获得重组基因hPPARα高效表达的体系.方法 采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000将phPPARα-IRES2-EGFP转染入293细胞,荧光显微镜观察质粒转染的293细胞绿色荧光蛋白(GFP)报告基因表达强度及转染效率,并对转染细胞hPPARα的表达进行荧光定量PCR和Western Blot检测.结果 荧光显微镜下可见转染phPPARα-IRES2-EGFP的293细胞GFP报告基因高表达,转染效率高达(83±9)%;并且,其hPPARα mRNA表达水平高于空载体转染对照组3个数量级,hPPARα蛋白表达也远高于对照组(P＜0.01),说明导入的重组质粒能够高效表达bPPARα.结论 成功建立重组质粒phPPARα-IRES2-EGFP高效体外转染表达体系,为hPPARα受体功能的研究及基于hPPARα为靶标的药物筛选平台的建立奠定了基础.     

尼莫地平对急性一氧化碳中毒小鼠脑损伤的治疗作用

目的 研究尼莫地平对急性一氧化碳（CO）中毒致小鼠脑损伤的治疗作用。方法 小鼠单次腹腔注射CO170ml/kg，以CO中毒小鼠死亡率，被动回避性记忆能力，脑细胞膜和线粒体膜Ca^2 -Mg^2 ATP酶（Ca^2 -Mg^2 ATPase)活性和脑组织单腔氧化酶-B（MAO-B）活性的改变以及海马神经元细胞病理改变为指标，研究尼莫地平对急性CO中毒致小鼠脑损伤的治疗作用。结果 尼莫地平以剂量依赖性的方式变为指标。研究尼莫地平对急性CO中毒致小鼠脑损伤的治疗作用。结果 尼莫地平以剂量依赖性的方式降低CO中毒小鼠的死亡率，明显改善CO中毒小鼠下降的记忆能力。显著阻遏CO中毒小鼠脑细胞膜和线粒体膜Ca^2 -Mg^2 ATPase活性的病理性降低以及脑组织MAO-B活性的病理性升高，明显减轻海马神经元的迟发性坏死；此治疗作用以尼莫地平15min内给予较为明显。结论 在急性CO中毒早期给予足量尼莫地平对急性CO中毒所致脑损伤有显著的治疗作用。     

小鼠亚急性一氧化碳中毒的性别差异研究

目的 研究亚急性一氧化碳（CO）中毒致小鼠致小鼠损伤是否存在性别差异。方法 用小鼠跳台法被动回避试验,游泳试验、生化酶学试验及放射免疫等实验方法。观察亚急性CO中毒后,雌、雄小鼠在死亡率,学习记忆功能,体能、脑组织单胺氧化酶-B（MAO-B）活性以及血皮质醇含量的变化。结果 亚急性CO中毒后,雌性小鼠的死亡率,学习能力的损害和地塞米松对皮质醇分泌的抑制作用的下降明显低于雄性小鼠;记忆功能、MAO-B活性在雌,雄小鼠之间差异无显著性,而对于体能的损害。雌性小鼠则重于雄性小鼠。结论 雌、雄小鼠在亚急性CO中毒及其预后存在性别差异。     

黄连总生物碱对乙醇致大鼠胃黏膜损伤的保护作用及其机制探讨

目的:研究黄连总生物碱对乙醇致大鼠胃黏膜损伤的保护作用,并对其机制进行探讨。方法:观察预先应用黄连总生物碱对乙醇所致的胃黏膜损伤的影响;分析幽门结扎5 h大鼠胃液、胃壁结合黏液和胃腔游离黏液;检测胃黏膜一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和.OH的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果:黄连总生物碱呈剂量依赖性显著抑制乙醇性胃黏膜损伤(P<0.001),其损伤抑制率大于临床常用量的西米替丁,亦大于等量的小檗碱;黄连总生物碱亦显著阻遏乙醇性胃酸分泌,而对胃液量和胃黏液的分泌无明显影响;黄连总生物碱可显著阻遏乙醇性大鼠胃损伤胃黏膜组织内NO含量和SOD活力下降,明显抑制损伤胃黏膜MDA和.OH含量升高。结论:黄连总生物碱有明显抗乙醇性胃黏膜损伤作用。其机制可能与抑制胃酸过度分泌,抑制胃黏膜NO含量下降,阻遏胃黏膜.OH,MDA含量升高以及恢复SOD活力有关,而与胃黏液分泌无关。     

苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的观察苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。方法以终质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6 mg/mL的苦参碱作用肺腺癌A549细胞48 h后,通过台盼蓝拒染法计数细胞的生长抑制率;以终质量浓度为0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48、72、96 h后,经透射电镜和DNA Ladder实验了解到细胞凋亡的发生,PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT的mRNA表达水平。结果各种质量浓度的苦参碱作用A549细胞48 h后,均显著抑制细胞的增殖且呈浓度依赖性;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞不同时间后,经透射电镜形态学检测和DNA Ladder实验,均显示A549细胞发生了凋亡改变;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48 h后,端粒酶活性明显受抑,hTERT mRNA表达显著降低。结论苦参碱能抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。     

基于“导师+团队”制培养药学研究生创新能力的实践与思考

为提高药学研究生的创新能力,尝试引入“导师+团队”制。并从学术团队的组建与运行、“导师+团队”制的保障性措施、培养药学研究生的监控机制、药学研究生创新能力的评价指标体系,还有“导师+团队”制的和谐发展等方面探讨该制度的实施措施。从药学研究生的科研培养过程和师生反馈结果可见,“导师+团队”制在培养药学研究生的创新能力等方面表现出了较大的优势,但仍需要继续总结与完善。     

中国西部健康人群口服替诺福韦富马酸酯片的药动学研究

目的:研究口服替诺福韦富马酸酯片在中国西部健康人群的药动学特征。方法:24名健康志愿者随机分为3组,每组8人,分别给予替诺福韦富马酸酯片300mg、恩曲他滨胶囊200mg+替诺福韦富马酸酯片300mg、脂肪食物(食物中脂肪比例50%)+替诺福韦富马酸酯片300mg,分别在服药前0h及服药后0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24、36、48、72h时取静脉血2mL,分离血浆,采用固相萃取,以高效液相色谱-紫外(HPLC-UV)法测定替诺福韦血药浓度,以DAS(Ver2.1.1)软件计算药动学参数。结果:3组药动学参数分别为:t1/(218.78±3.28)、(12.72±2.83)、(13.08±1.47)h,tma(x1.05±0.16)、(1.28±0.30)、(1.55±0.37)h,cma(x290.71±63.21)、(420.84±96.71)、(429.06±174.81)ng·mL-1,AUC0～7(21871.60±377.00)、(3869.42±962.85)、(3569.47±633.47)μg·h·L-1,AUC0～∞(2284.16±373.54)、(4107.09±974.82)、(3856.00±618.39)μg·h·L-1,CL/F(2.25±0.39)、(1.28±0.28)、(1.33±0.20)L·h-1·kg-1。与替诺福韦富马酸酯组比较,恩曲他滨+替诺福韦富马酸酯组、脂肪食物+替诺福韦富马酸酯组的t1/2降低,cmax、AUC0～72、AUC0～∞、tmax均明显增加。结论:中国西部人群单独给予替诺福韦富马酸酯的药动学特征与国外人群相似,高脂肪饮食以及合用恩曲他滨可改变替诺福韦的药动学特征。     

咖啡酸对大鼠海马神经元铝盐损伤的保护作用

目的建立氯化铝致原代培养大鼠海马神经元损伤模型,观察咖啡酸对神经元铝盐损伤的保护作用。方法新生24h内SD大鼠海马神经元原代培养,7d后用免疫组化鉴定纯度;并分成空白对照组(NaCl200μmol.L-1)、铝负荷模型组(AlCl3200μmol.L-1)、铝和不同浓度的5-LO抑制剂咖啡酸(10-6、10-7、10-8mol.L-1)混合处理组。以HE染色,MTT测定,LDH漏出率,SOD活性和MDA含量为观测指标。结果神经元纯度超过95%。铝负荷致神经细胞数目明显减少,神经元突起减少变短,原代培养海马神经元活力降低,LDH漏出明显增多,SOD活性降低,MDA含量升高。咖啡酸能剂量依赖性地减轻铝盐所致的原代培养的海马神经元损伤,提高神经细胞的活力,减少LDH漏出,明显阻遏铝负荷所致的神经元SOD活性的降低和MDA含量的升高。结论咖啡酸对铝负荷所致的原代培养大鼠海马神经元损伤有一定的保护作用,其机制可能与其抑制5-LO活性,进而抑制炎症反应和氧化应激有关。     

尼莫地平对神经元退行性变模型小鼠脑组织中铁离子的影响研究

目的:探讨尼莫地平对神经元退行性变模型小鼠脑组织中铁离子的影响。方法:取小鼠随机分为假手术组(生理盐水)、模型组(生理盐水)和尼莫地平高、中、低(80、40、20mg.kg-1)剂量组,每组35只,后4组脑室内注射0.25氯化铝2μL,每天1次,连续5d,建立神经元退行性变小鼠模型,假手术组注射等体积人工脑脊液;5d后各组灌胃给予相应药物,每天2次,连续30d,末次灌胃24h后观察其脑组织的病理学变化,考察海马组织中丙二醛(MDA)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白、铝离子和铁离子水平变化。结果:与模型组比较,尼莫地平高剂量组神经元损伤明显减轻,其中MDA、HO-1蛋白和铁离子水平明显降低(P<0.05);其余指标及尼莫地平中、低剂量组各项指标均无明显变化。结论:尼莫地平可能通过抑制HO-1蛋白表达维持铁离子代谢平衡,发挥缓解神经元退行性变的作用。