不同途径吸入脂多糖致大鼠急性肺炎模型的优选

目的:平行比较气管滴入、口咽吸入、经鼻滴入与雾化吸入脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肺炎模型的病理变化,筛选最佳诱导大鼠急性肺炎的造模方法,并对其进行多指标验证。方法:气管滴入LPS组、口咽吸入LPS组、经鼻滴入LPS组、雾化吸入LPS组大鼠造模24 h后,通过病理学观察各组肺组织炎症程度;雾化吸入LPS-1组,LPS-2组,LPS-3组依次造模24,16,8 h后,采用无创气道动力学研究系统检测大鼠的肺功能,全自动血液分析仪对支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞进行分类和计数;通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测BALF及肺组织中的白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;病理学观察各组大鼠肺组织的炎症程度。结果:与气管滴入、口咽吸入、经鼻滴入相比,雾化吸入LPS组大鼠肺部损伤程度一致,病理变化表现稳定,组内差异小。雾化吸入LPS多指标检测显示,与阴性组比较,造模后大鼠的呼吸频率(F),潮气量(TV),特殊气道阻力(sRaw)发生显著变化(P0.01,P0.05);大鼠雾化LPS后8 h时白细胞计数(WBC)增加;16 h时WBC明显增加(P0.05),嗜中性粒细胞比例也开始增加(P0.01);24 h时WBC数目显著升高(P0.01),淋巴细胞所占比例开始显著升高(P0.05);雾化吸入LPS后8 h开始,BALF和组织中炎症因子TNF-α及IL-6的含量均显著升高(P0.05,P0.01)。结论:雾化吸入LPS所致的大鼠肺部损伤程度一致,病理变化表现稳定,接近于临床急性肺炎的发展情况,有利于筛选治疗急性肺炎的药物。     

三七总皂苷通过调节蛋白酶激活受体-1抗肺纤维化的作用机制研究

目的 考察三七总皂苷（PNS）的体内外抗肺纤维化作用,并探讨其作用机制。方法 将60只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、吡非尼酮（阳性药,50 mg·kg^-1）组和PNS低、中、高剂量（50、100、200 mg·kg^-1）组,采用气管内注入博来霉素（5 mg·kg^-1）建立肺纤维化大鼠模型,假手术组注入生理盐水;造模24 h后给药,持续28 d;检测大鼠肺脏系数,利用BUXCO系统检测大鼠气道阻力与肺顺应性变化,HE染色后观察大鼠肺组织病理结构损伤,免疫荧光法检测大鼠肺组织E-钙黏蛋白（E-cad）、N-钙黏蛋白（N-cad）表达,免疫组化法检测大鼠肺组织蛋白酶激活受体-1（PAR-1）蛋白表达;体外培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,设对照组、模型组（凝血酶2 U·mL^-1建立体外肺纤维化模型）和PNS 5、10、20 μg·mL^-1组,体外划痕实验检测细胞迁移率,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、Western blotting实验检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vim）和PAR-1基因和蛋白表达水平;随后使用PAR-1 si RNA抑制PAR-1表达后,进一步采用qRT-PCR和Western blotting检测α-SMA与Vim基因与蛋白表达。结果 体内实验中,与模型组相比,PNS各剂量组肺脏系数显著降低（P＜0.001）、肺顺应性显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,100、200 mg·kg^-1 PNS组大鼠气道阻力显著降低（P＜0.05、0.01）,同时PNS能够改善大鼠肺组织的病理结构损伤,在下调N-cad的蛋白表达同时上调E-cad的蛋白表达,且100、200 mg·kg^-1 PNS组PAR-1蛋白表达显著下调（P＜0.01、0.001）。体外实验中,与模型组相比,10、20 μg·mL^-1 PNS组细胞的迁移率显著降低（P＜0.01、0.001）,20 μg·mL^-1 PNS组α-SMA与Vim mRNA水平下调（P＜0.05、0.01）,20 μg·mL^-1 PNS组α-SMA蛋白表达水平显著下调（P＜0.05） ,10、20 μg·mL^-1 PNS组Vim蛋白表达水平显著下调（P＜0.05、0.01）,PAR-1 siRNA组α-SMA mRNA水平和α-SMA、Vim蛋白表达水平显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）。结论 PNS具有抗肺纤维化的作用,其机制可能与调控PAR-1的异常有关。     

人参四逆汤及其有效成分对戊巴比妥钠所致心肌细胞损伤模型的保护作用

目的:探讨人参四逆汤及其有效成分对戊巴比妥钠所致心肌细胞损伤的保护作用及其机制。方法:H9C2细胞经传代培养后,分别给予人参皂苷Rb20. 01,0. 1,1μmol·L~(-1),Re 0. 01,0. 1,1μmol·L~(-1),异甘草素(isoliquiritigenin,ISL) 20,40,80μmol·L~(-1),甘草次酸(glycyrrhetinic acid,GA) 10,20,40μmol·L~(-1),人参四逆汤10,100,400 mg·L~(-1),作用4 h,经0. 1%的戊巴比妥钠作用30 min后,检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH),脂质过氧化物丙二醛(malondialdehyde,MDA),Na+-K+-三磷酸腺苷(ATP)酶,Ca~(2+)-ATP酶活性,同时采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测过氧化物酶体增殖活化受体共激活因子~(-1)α(peroxisome proliferative activated receptor,PGC~(-1)α),B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3) mRNA的表达情况。结果:人参四逆汤及其有效成分对心衰细胞模型有保护作用,与正常组比较,模型组细胞存活率显著下降,LDH,MDA含量显著升高,Na+-K+-ATP酶活性升高,Ca~(2+)-ATP酶活性显著降低,PGC~(-1)αmRNA表达下调,Bax,Caspase-3 mRNA表达(P 0. 01),证明模型成立。与模型组比较,各给药组显著升高细胞存活率,降低LDH,MDA含量,抑制Na+-K+-ATP酶活性,提高Ca~(2+)-ATP酶活性,上调PGC~(-1)αmRNA表达,抑制Bax,Caspase-3 mRNA表达(P 0. 05,P 0. 01)。结论:人参四逆汤及其有效成分对心衰细胞模型有显著保护作用,且其作用机制与抗氧化,改善线粒体能量代谢,抑制线粒体凋亡途径有关。     

尪痹片对骨性关节炎模型动物膝关节组织形态学的影响

目的:观察尪痹片对骨性关节炎模型动物膝关节组织病理损伤的影响。方法:家兔和大鼠模型动物均随机分为6组(假手术组,模型组,阳性药盐酸氨基葡萄糖组和尪痹片高、中、低剂量组)。除假手术组外,其余各组均造模,兔注射木瓜蛋白酶造模方式为尪痹片高、中、低剂量组(10.0,5.0,2.5 g·kg~(-1))和盐酸氨基葡萄糖组(0.26 g·kg~(-1)),给药体积均选择为4 m L·kg~(-1),造模40 d后连续灌胃给药33 d;大鼠切除前交叉韧带造模方式为尪痹片高、中、低剂量组(14.0,7.0,3.5 g·kg~(-1))和盐酸氨基葡萄糖组(0.36 g·kg~(-1)),给药体积均为10 m L·kg~(-1),造模60 d后连续灌胃给药31 d。每天给药1次,假手术组和模型组给予等体积水。给药结束后,观察动物膝关节活动度和膝关节周长,分别取膝关节进行病理检查,按照半定量分级标准进行综合评分和统计。结果:与模型组比较,尪痹片不同剂量组均可明显改善模型家兔膝关节的活动度,显著减少膝关节周长;可明显改善模型大鼠的活动状态;均可明显抑制2种模型动物膝关节滑膜细胞增生和炎性细胞浸润的程度。结论:尪痹片对木瓜蛋白酶注射诱导家兔和前交叉韧带切除诱导大鼠骨关节炎动物膝关节的软骨、滑膜损伤均具有明显改善作用,提示该制剂对骨关节炎具有一定的治疗作用。     

心脏药代酶的附子-甘草配伍减毒机制

目的:基于心脏细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)系统考察附子与甘草配伍后对正常大鼠心脏的减毒机制研究。方法:雄性SD大鼠,随机分为空白组、诱导剂苯巴比妥组(0.08 g·kg^-1·d^-1),附子组(0.5 g·kg^-1·d^-1),甘草组(0.5 g·kg^-1·d^-1)和附子-甘草组(0.5 g·kg^-1·d^-1)。检测大鼠心肌酶天冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST),肌酸激酶(creatine kinase,CK)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量变化,同时观察大鼠心脏组织的病理学改变,并观察各组对药物代谢酶CYP2B1,CYP2C11,CYP2E1,CYP2J3,CYP4A1,CYP4A3,CYP4F1,CYP4F5,CYP4F6 mRNA表达水平的变化。结果:与空白组比较,附子组中大鼠血清AST,CK和LDH含量升高(P<0.05),配伍后AST,CK和LDH心肌酶的含量较附子组降低,但未出现统计学差异;同时病理学结果显示附子组大鼠出现心脏损伤,配伍后甘草可减轻由附子产生的心脏损伤作用;在基因转录水平,甘草组能不同程度地上调CYP2C11和CYP2J3 mRNA表达(P<0.05),甘草与附子配伍后能上调CYP2B1,CYP2C11和CYP2J3家族mRNA表达(P<0.05),推测配伍可促进花生四烯酸(arachidonic acid,AA)代谢生成环氧二十碳三烯酸(expxyeicosatrienoic acid,EETs),附子能上调CYP4家族中CYP4A1,CYP4A3,CYP4F1,CYP4F5和CYP4F6 mRNA表达(P<0.05),其能促进20-羟-二十烷四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoicacid,20-HETE)的生成,附子-甘草配伍后能削弱附子下调CYP4A3,CYP4F1,CYP4F5和CYP4F6家族mRNA表达的能力(P<0.05),抑制20-HETE的生成,减轻由附子产生的心脏毒性。结论:附子-甘草配伍后可调控心脏CYP450酶的表达,使EETs生成量增加,20-HETE含量减少,起到减毒的作用。     

苏龙嘎-4颗粒抗炎镇痛止泻的药效学实验研究

目的:验证苏龙嘎-4颗粒涩肠、止泻、抗炎及镇痛功效。方法:小鼠按体质量随机分组,灌胃给予苏龙嘎-4颗粒,剂量(以生药计)分别为:0.16、0.33、0.65、1.30 g·kg~(-1)。采用炭末推进实验对苏龙嘎-4颗粒进行涩肠作用研究;以粪便观察法对苏龙嘎-4颗粒进行止泻作用研究;以二甲苯致小鼠耳肿胀实验对苏龙嘎-4颗粒进行抗炎作用研究;以醋酸扭体实验对苏龙嘎-4颗粒进行镇痛作用研究。结果:与空白组比较,苏龙嘎-4颗粒能缩短炭末在正常小鼠肠道内的推进距离(P0.01),降低炭末推进率(P0.05,P0.01);与模型组比较,苏龙嘎-4颗粒能缩短炭末在蓖麻油所致腹泻小鼠肠道内的推进距离(P0.001),降低炭末推进率(P0.01,P0.001);能减少蓖麻油致小鼠腹泻的稀便数(P0.05,P0.01);对硫酸镁致小鼠腹泻无显著抑制作用(P0.05);能减少番泻叶致小鼠腹泻的稀便数(P0.01);能减少扭体次数(P0.05,P0.01,P0.001),提高扭体抑制率;能明显降低小鼠耳肿胀率(P0.01,P0.001)。结论:苏龙嘎-4颗粒具有明显的涩肠、止泻、抗炎及镇痛作用,值得进一步研发和推广。     

蒲地蓝消炎口服液对免疫低下小鼠免疫功能的影响

目的:研究清热解毒类复方制剂蒲地蓝消炎口服液对免疫功能的调节作用。方法:运用小鼠脾淋巴细胞转化实验、溶血素测定实验、碳廓清实验来研究蒲地蓝消炎口服液对免疫低下小鼠细胞免疫、体液免疫、非特异性免疫的调节作用。结果:在刀豆蛋白A(conA)诱导小鼠脾淋巴细胞增殖实验中,口服20g、10g、5g生药/kg/d的蒲地蓝消炎口服液可显著增加免疫低下小鼠脾脏淋巴细胞转化能力,且小鼠脾体比和胸腺体比显著升高;在溶血素测定实验中口服20g、10g、5g生药/kg/d的蒲地蓝消炎口服液可升高免疫低下小鼠抗体生成能力;在碳廓清实验中,口服5g生药/kg/d的蒲地蓝消炎口服液可提高巨噬细胞吞噬指数。结论:蒲地蓝消炎口服液可在一定程度上提高免疫低下小鼠的细胞免疫、体液免疫能力及非特异性免疫能力。     

双黄调脂方及其有效成分发挥降脂作用的探讨

目的:通过体内外实验研究双黄调脂方的降脂作用,探讨其降脂机制。方法:昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组(血脂康,0.6 g·kg~(-1))和双黄调脂高、低剂量组(22.5,7.5 g·kg~(-1)),观察双黄调脂方对Trtion-WR1339诱导的高血脂模型的影响。基于整体实验,体外实验观察了双黄调脂主要有效成分姜黄素、黄连素、葛根素对油酸(oleic acid,OA)诱导的HepG2细胞模型胆固醇(CHO),甘油三酯(TG),3-羟基-3-甲基戊二酰CoA(HMG-CoA)还原酶,高密度脂蛋白胆固醇(HDLC),低密度脂蛋白受体(LDL-R),胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)和脂蛋白脂酶(LPL)含量的影响,探讨其可能降脂途径。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清CHO和TG含量显著升高(P0.01);与模型组比较,双黄调脂方高剂量组能显著降低模型小鼠血清的CHO,TG水平(P0.05,P0.01)。体外实验中,与空白组比较,模型组细胞CHO,TG和HMG-CoA还原酶含量显著升高(P0.05,P0.01),HDL-C,LDL-R,CYP7A1和LPL含量显著降低(P0.05);与模型组比较,姜黄素高剂量组(10 mg·L~(-1))能显著升高模型细胞HDL-C,LDL-R和LPL含量(P0.05,P0.01),降低TG和HMG-CoA含量(P0.05,P0.01);黄连素高剂量组(40 mg·L~(-1))能显著升高模型细胞CHO,HDL-C,LDL-R和CYP7A1含量(P0.05,P0.01);葛根素高剂量组(300 mg·L~(-1))能显著升高模型细胞HDL-C,LDL-R,CYP7A1和LPL含量(P0.05,P0.01),降低CHO,TG和HMG-CoA含量(P0.05,P0.01)。结论:双黄调脂方可通过抑制内源性胆固醇合成、促进胆固醇逆转运(RCT)途径和低密度脂蛋白(LDL)受体途径、促进胆固醇转化以及促进甘油三酯降解等多个途径来发挥降脂作用。     

盐酸常山碱的理化性质及其脂质体包封率的测定方法考察

目的:研究盐酸常山碱的理化性质并考察其脂质体包封率的测定方法。方法:采用HPLC测定盐酸常山碱的含量,流动相乙睛-水-三乙胺-冰乙酸(9∶91∶0. 35∶0. 75),检测波长265 nm;通过摇瓶法测定其在不同p H范围内的油水分配系数,并考察在125℃,30 min灭菌后盐酸常山碱在不同p H磷酸盐缓冲液中的稳定性,利用硫酸铵梯度法制备盐酸常山碱脂质体,分别用葡聚糖凝胶和阳离子交换树脂制备微柱,采用离心法使游离药物和脂质体分离,测定药物含量,计算包封率。运用SPSS 20. 0软件进行t检验,比较上述2种方法测定结果的差异。结果:在pH 6~9时,盐酸常山碱的油水分配系数随着p H的升高而增大,油水分配系数处于0. 016~1. 44,盐酸常山碱灭菌后回收率在37. 16%~57. 91%,葡聚糖凝胶微柱离心法和阳离子交换树脂微柱离心法测得脂质体的包封率结果无显著性差异。结论:盐酸常山碱适合制成脂质体,但其稳定性并不理想,故在制备工艺中应严格控制实验温度。葡聚糖凝胶微柱离心法和阳离子交换树脂微柱离心法均可以较好地测定盐酸常山碱脂质体的包封率,但比较后建议选择阳离子交换树脂微柱离心法。     

蒲地蓝消炎口服液对脂多糖致大鼠急性肺损伤的影响

目的:探讨蒲地蓝消炎口服液(PDL)对脂多糖(LPS)导致的大鼠急性肺损伤的影响及作用机制。方法:72只Wistar大鼠,按体质量随机分为空白组,模型组,地塞米松组,PDL 7,3. 5,1. 75 g·kg~(-1)·d~(-1)组。模型组,地塞米松组,PDL 7,3. 5,1. 75 g·kg~(-1)·d~(-1)组雾化吸入LPS制备大鼠急性肺损伤模型。检测各组大鼠肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肺组织中核转录因子-κB(NF-κB),白细胞介素-10(IL-10)的含量,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织形态学改变,探讨不同剂量PDL对急性肺损伤大鼠的影响。结果:与模型组比较,PDL 7,3. 5 g·kg~(-1)·d~(-1)组BALF中白细胞总数明显降低(P 0. 05); PDL 7,3. 5,1. 75 g·kg~(-1)·d~(-1)组NF-κB表达量明显降低(P 0. 05); PDL 3. 5 g·kg~(-1)·d~(-1)组IL-10表达量明显升高(P 0. 05); PDL 7 g·kg~(-1)·d~(-1)组肺组织中炎症反应减轻,水肿、瘀血等病理改变明显缓解(P 0. 05)。结论:PDL对急性肺损伤模型具有保护作用,可减轻大鼠急性肺损伤模型中肺组织的炎症反应,其机制与NF-κB,IL-10的表达相关,对肺组织的病理损伤有修复作用。