平均分布细胞进行鼠疫杂交瘤株克隆化的实验研究

目的 探讨在建立了分泌抗鼠疫F1抗原的单克隆抗体杂交瘤株后,对其进行克隆化的实验方法. 方法 对我课题组融合成功的5株杂交瘤株,采用初步计数后取约100个细胞,平均分布于96孔细胞培养板进行克隆化,用间接ELISA法检测培养孔上清的抗体.结果 用该方法进行克隆化,在96孔板中单克隆生长孔平均为26孔、多克隆为15孔,在1～2次克隆后,上清抗体检测均达到100%,与有限稀释法无差异. 结论 采用计数100个细胞进行克隆化的方法是可行的.     

从表达菌培养液中提取鼠疫菌重组F1抗原

目的从表达鼠疫耶尔森氏菌F1蛋白的诱导培养液中提取纯化重组F1并检测其免疫反应性。方法收集诱导培养后离心去除菌体的培养液,采用硫酸铵沉淀法和PEG浓缩法提取F1蛋白,产物经镍离子金属螯合亲和层析纯化,免疫印迹(Western blot)鉴定其免疫反应性。结果硫酸铵沉淀法和PEG浓缩法均能从培养液中提取到重组F1蛋白,产物经纯化后可与鼠疫疫苗株免疫兔血清和既往鼠疫患者血清发生特异性结合反应。结论该表达菌表达效能较高,在诱导培养液中存在大量具有免疫学活性的重组F1蛋白。     

无血清培养液在分泌鼠疫F1McAb杂交瘤细胞中的初步应用

目的应用ADCF无血清细胞培养液对分泌鼠疫F1McAb的杂交瘤细胞进行静止培养,初步了解该瘤株在ADCF中的生长情况,为今后采用无血清培养液体外培养法生产单克隆抗体提供依据。方法通过将杂交瘤细胞直接转入ADCF培养液培养、驯化培养和优化条件后培养,观察细胞在各种培养条件下的生长情况,进行活细胞计数和抗体效价检测。结果用ADCF培养鼠疫F1杂交瘤细胞,细胞直接转入不能较好的生长;通过驯化、在放过含血清培养液的原瓶中能较好的贴壁生长,在新瓶中不能稳定地贴壁生长和增殖;在经含血清的培养液优化后的培养瓶中,细胞能贴壁生长和增殖。结论ADCF培养液可用于分泌鼠疫F1McAb的杂交瘤细胞的培养。     

云南省血吸虫病流行区一种拟钉螺及其寄生吸虫尾蚴的分子鉴定

目的对云南省血吸虫病流行区的一种拟钉螺及其寄生吸虫进行分子生物学鉴定,了解其种属分类地位。方法采集云南省祥云县拟钉螺和钉螺,压碎镜检采集螺软体腹足部组织,并观察其体内尾拗寄生情况。采用逸拗法采集拟钉螺寄生的不同形态尾拗,螺体组织和尾拗样本分别提取基因组DNA,采用PCR法扩增螺体内16S核糖体RNA(16S rRNA)、细胞色素c氧化酶I(COI)、28S核糖体DNA(28S rDNA)基因及其体内寄生吸虫尾拗的NADH脱氢酶亚基1(ND1)、28S rfNA基因,对扩增产物进行测序,并通过序列比对及系统进化分析鉴定样本螺和寄生吸虫种属。结果共检测拟钉螺样本382只,发现无叉形、双叉形、燕子形等3种形态吸虫尾拗,阳性率分别为20.94%(80/382)、3.40%(13/382)、7.07%(27/382)。基于16S rRNA、COI、28S rDNA基因的分子进化分析显示,该拟钉螺与滇池德拉维螺(Delavaya dianchiensis)同源性较高、聚在同一个分支。基于ND1、28S rDNA4基因的序列分析显示,无叉形尾拗吸虫属侧殖吸虫科,燕子形尾拗吸虫属孔肠科,双叉形尾拗吸虫可能为不同于中华血吸虫(Schistosoma sinensium)和勾形卵血吸虫(Schistosoma ovuncatum)的另一种血吸虫。结论初步了解了云南省血吸虫病流行区拟钉螺及其寄生吸虫种属分类,但更明确的分类关系和危害性等尚有待深入研究。     

单克隆抗体大量生产技术及研究进展

随着单克隆抗体在医学基础、临床诊断、治疗及其他领域的广泛应用,生产技术也随着现代科技的进展而迅速发展。单克隆抗体生产技术的提高解决了单抗应用中存在的一些问题,拓展了单抗的应用空间。现就单克隆抗体大量生产技术作一综述。     

现代管理理论在精神科护理过程中的应用

现代管理理论主张采取综合的管理理论观点、管理方法和管理技术,使现代管理理论向着统一的系统理论发展,而管理的基本原理是对管理工作的实质内容进行科学分析,总结出具有普遍意义的规律,从而指导管理工作,以提高工作效率与效果.护理过程就是把管理理论和原理运用于实践的过程,精神科护理过程是精神科护士为精神病患者服务的过程,在精神科护理过程中,可运用科学的管理方法为患者服务.本文运用现代管理理论的特点来探讨在精神科护理过程中应注重的方法.     

鼠疫F1单克隆抗体杂交瘤株建立过程中几个重要因素的探讨

自1975年Koehler及Milstein创建杂交瘤技术以来，使用该技术制备出抗各种抗原的单克隆抗体，品种不下万种，其中数百种已在医学和生物学各个领域得到广泛的应用。尽管杂交瘤技术是一门成熟的技术，但由于涉及细胞培养，其影响因素非常多。课题组就建立分泌抗鼠疫F1抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株过程进行了分析和探讨。总结如下。     

检测鼠疫抗体胶体金免疫层析试纸条的研制

目的建立快速、简易的检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析法(G ICA)。方法(1)采用胶体金颗粒标记纯化F1抗原,并将标记物喷于玻璃纤维;同时将纯化F1抗原喷线固定于硝酸纤维素膜上,用于F1抗体的捕捉;按常规组装成检测鼠疫抗体免疫层析试纸条。(2)采用该试纸条与血凝法对同一份兔抗F1抗体进行检测,以评价该试纸条的敏感性。(3)采用该试纸条对44株非鼠疫菌的免疫鼠血清进行检测,以评价该试纸条的特异性。(4)采用该试纸条、血凝法及ELISA对607份血清标本进行检测,以评价该试纸条对现场材料的检测效果。结果(1)该试纸条可在15 m in之内完成检测;(2)在敏感性上,该试纸条对同一份免疫兔血清的检测较血凝法高一个滴度;(3)对被试的44株所选菌株的免疫鼠血清的检测均为阴性;(4)在对607份血清标本的检测中,免疫层析试纸条、血凝及ELISA三种方法的符合率中度,而免疫层析试纸条的敏感性分别比血凝与ELISA高111%和90%。结论以纯化的鼠疫F1抗原为基础建立的G ICA检测鼠疫F1抗体的方法特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有较大的推广应用价值。     

水盘法捕获地面游离蚤的效果评估

目的分析和评估水盘法捕获地面游离蚤的效果。方法选择云南省10个县(市、区)40个自然村的800户家庭作为研究对象。每个家庭放置10个加水的水盘于卧室、客厅、厨房等房间的地面,连续放置3个夜晚,每天早晨收集跳蚤。计算跳蚤捕获率并与先前使用粘蚤纸法捕获地面游离蚤的结果进行比较。结果在800个家庭放置8 000个水盘,有效收回7 974个水盘,3个夜晚实际放置23 922个水盘,捕获地面游离蚤2 420只,捕获率为10.12%。先前使用粘蚤纸法,地面游离蚤的捕获率为2.45%~4.93%。水盘法捕获地面游离蚤是粘蚤纸法的2.05~4.13倍。结论水盘法捕获地面游离蚤的效率优于粘蚤纸法,而且经济方便、易于操作,适于基层推广使用。