大鼠肌源性干细胞的培养与鉴定

背景：肌源性干细胞是一种成体多能干细胞，已成为基因治疗和细胞介导的组织工程领域内的研究热点，临床应用自体肌源性干细胞注射治疗压力性尿失禁具有广泛前景。目的：探讨大鼠肌源性干细胞体外原代培养的方法，为临床应用自体肌源性干细胞注射治疗压力性尿失禁提供实验依据。设计：重复观察测量。单位：武汉大学人民医院生殖中心与泌尿外科。材料：实验于2003-12／2004-05在武汉大学人民医院泌尿外科实验室完成。选取4～6周龄雌性SD大鼠20只，XI型胶原酶、胰酶、多聚赖氨酸（Sigma公司），dispase酶（Gibco公司），鸡胚提取液（自制）。方法：①将大鼠以质量浓度为10异／L的戊巴比妥钠30s／ks腹腔麻醉后，无菌条件下取腓肠肌，置人冷DMEM培养基中，D—Hank’s液洗涤组织块，除去筋膜、肌腱、神经和血管。剪成1．0-3．0mm^3小块，移入离心管。向组织中加入0．2％XI型胶原酶及0．1％的胰酶。采用胶原酶分离大鼠骨骼肌细胞。②应用差速贴壁法大鼠骨骼肌细胞进行纯化。细胞筛网过滤后接种至多聚赖氨酸包被的培养瓶中，37℃、体积分数为0．05的CO2培养箱中孵育1h，未贴壁细胞移人新的培养瓶中，加入新的培养基37℃培养1h后，未贴壁细胞再次转瓶换液，37℃培养过夜，如此反复，每次间隔24h转瓶换液，培养第5-6天贴壁的细胞即肌源性干细胞。③细胞生长到70％融合后，胰蛋白酶消化，以1：2的比例进行传代。传代细胞消化后接种于放有盖玻片的6孔培养板中，加入生长培养基，24h后制备细胞爬片，采用免疫组织化学方法鉴定所培养细胞上特异性结蛋白抗原和干细胞抗原-1的表达。主要观察指标：肌源性干细胞的形态及其鉴定结果。结果：①肌源性干细胞的形态观察：从骨骼肌组织中分离出来的肌源性干细胞呈球形，折光性强。培养12h后开始贴壁仍为圆形，48h后贴壁完全并开始增生，细胞逐渐延展成梭形或纺锤形，有两极，体积小。随培养时间的延长，细胞相互融合形成成熟的多核肌管。②肌源性干细胞的鉴定结果：细胞特异性结蛋白抗原和干细胞抗原-1染色呈阳性，荧光显微镜可见细胞浆发出红色荧光。阳性率达90％。结论：肌原性干细胞属于成体干细胞，具有取材方便、免疫原性低、移植后存活时间长等优点O高纯度的肌原性干细胞可通过体外原代培养获取．免疫组化技术可鉴定其肌源性和干细胞特性，在组织工程和基因治疗中具有广泛的应用前景。     

电极温度对极低出生体重儿经皮二氧化碳分压和氧分压监测的影响

目的 评估在低于临床常用的电极温度下进行经皮二氧化碳分压(transcutaneous carbon dioxide partial pressure,TcPCO2)和经皮氧分压(transcutaneous oxygen partial pressure,TcPO2)监测在极低出生体重儿应用中的准确性和安全性.方法 ...     

综合护理干预对缓解住院新生儿家长焦虑的效果研究

目的探讨综合护理干预对减轻住院新生儿家长焦虑的效果。方法对120名住院新生儿家长进行心理反应和应激因素研究,并随机分组进行综合护理干预,在干预后1周和2周釆用焦虑自评量表(SAS)分别测量患儿家长的焦虑状况。结果住院新生儿家长明显存在焦虑情绪;与无综合护理干预组比较,综合护理干预组住院新生儿家长焦虑程度显著减轻(P0.01)。结论护理人员应高度重视住院新生儿家长焦虑情绪,综合护理措施能有效减轻其焦虑情绪。     

不同剂量地塞米松混合湿敷液预防儿童静脉炎的疗效

目的选择静脉炎预防药物的最佳浓度匹配,来降低静脉炎的发生,为长期需要化疗的患儿减轻痛苦。方法选择2％利多卡因5mL＋25％硫酸镁15mL＋地塞米松2.5mg同步化疗前静脉湿敷为实验组①,2％利多卡因5mL＋25％硫酸镁15mL＋地塞米松5mg同步化疗前静脉湿敷为实验组②,常规化疗不使用同步化疗前药物湿敷静脉为观察组。结果实验组①与观察组比较和实验组②与观察组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）;实验组①湿敷疗效高于实验组②,P〈0.05。结论用2％利多卡因及25％硫酸镁联合地塞米松可以很好地预防静脉炎发生;2％利多卡因5mL＋25％硫酸镁15mL＋地塞米松2.5mg比2％利多卡因5mL＋25％硫酸镁15mL＋地塞米松5mg湿敷预防静脉炎效果更显著;有利于患儿化疗的顺利进行并有效减轻了痛苦。     

经食管超声心动图在房颤患者左心耳封堵Watchman植入术中的初步应用

目的初步探讨经食管超声引导下封堵左心耳对预防房颤患者中风的临床意义。方法利用经食管超声观察左心耳形态、功能、测量左心耳大小。在TEE引导下经皮左心耳封堵,选用美国波士顿Watchman封堵伞。结果 2例住院心房颤动患者,成功植入Watchman封堵伞,分别选用的直径为24、27mm封堵器至左心耳根部,其位置正常,无残余分流。结论超声引导下经皮左心耳封堵术将成为预防房颤患者卒中治疗的新趋势。     

芪龙风湿丸治疗肝肾不足型膝骨关节炎的疗效及对IL-1β、TNF-α、MMP-13的影响

目的 探究吴门医派“益气补肾,养阴通络”治痹经典方剂芪龙风湿丸治疗肝肾不足型膝骨关节炎(KOA)的临床疗效。方法 选取2019年1月—2021年6月在苏州市中医医院就诊的60例肝肾不足型KOA患者,按照随机数字表法分为2组,每组各30例。治疗组予芪龙风湿丸联合盐酸氨基葡萄糖治疗,对照组予盐酸氨基葡萄糖治疗,2组均治疗3个月。比较2组治疗效果及治疗前后美国西部安大略和麦克马斯特大学膝骨关节炎指数(WOMAC)、疼痛视觉模拟评分(VAS)、健康评估问卷(HAQ)评分和血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)水平。结果 治疗后治疗组总有效率为86.7%(26/30),明显高于对照组的70.0%(21/30)(P<0.05);2组治疗后WOMAC评分、VAS评分、HAQ评分及血清IL-1β、TNF-α、MMP-13水平均较治疗前明显下降(P均<0.05),且治疗组治疗后WOMAC评分、VAS评分、HAQ评分及血清IL-1β、TNF-α水平均明显低于对照组(P均<0.05),2组治疗后MMP-13水平比较差异无统计...     

壮医药线点灸联合佩药疗法治疗流行性感冒48例疗效观察

目的：观察壮医药线点灸联合佩药疗法治疗流行性感冒的临床疗效。方法：将95例患者随机分为2组。治疗组48例采用壮医药线点灸联合佩药疗法治疗;对照组47例予达菲胶囊治疗,2组均连续治疗5天。观察2组症状改善情况,评价临床疗效。结果：临床疗效总：有效率治疗组为91．7％,对照组为87．2％,2组总有效率比较,差异无显著性意义（P〉0．05）;2组咽痛疗效比较,差异有非常显著性意义（P〈0．01）;2组头痛、鼻塞疗效分别比较,差异均有显著性意义（P〈0．05）;2组发热、肌肉酸痛、咳嗽、乏力疗效：分别比较,差异均无显著性意义（P〉0．05）。结论：壮医药线点灸联合佩药疗法治疗流感是有效的,可改善流感患者的临床症状。     

高效毛细管电泳法同时分离检测肝素钠杂质

 目的 建立用高效毛细管电泳法同时分离检测肝素钠杂质的方法。方法 采用高效毛细管电泳法,通过选择电极缓冲液的种类、浓度、pH值、检测波长等最佳实验条件,确定了一种检测肝素钠杂质的优化方法：800 mmol·L-1磷酸-锂盐为运行缓冲液(pH 3.5),熔融石英毛细管(25 μm×60 cm,有效长度50 cm),分离电压-30 kV,进样量：14 kPa×50 s,分离温度：20 ℃,检测波长200 nm。结果 此方法实现了肝素钠与各个杂质的分离,多硫酸软骨素(oversulfated chondroitin sulfate, OSCS)峰和肝素峰的分离度可达1.5,且线性、重复性良好,OSCS峰检测限为0.2 mg·mL-1,相当于肝素钠质量的0.4%（Woscs/Wheparin）。结论 此方法准确、简便,优于美国药典(USP 32)收载的方法,利于肝素钠的质量控制。     

实时三维超声与门控心肌灌注显像对心衰患者CRT术前心功能的评价

目的 应用实时三维超声与门控心肌灌注显像评价慢性心力衰竭患者CRT术前心功能.方法 选择心力衰竭患者58例,其中扩张性心肌病31例、陈旧前壁心梗27例,正常对照组为健康者30例,分别进行实时三维超声心动图(RT-3DE)与门控心肌灌注显像检查(GSPECT MPI)),两种检查间隔1～2 d,测定左室整体舒张末期容积(EDV)、左室收缩末期容积(ESV)、射血分数(EF);应用RT-3DE测定心衰患者的局部舒张末期容积(rEDV)、局部左室收缩末期容积(rESV)、局部射血分数(rEF);应用GSPECT MPI评价心衰患者的心肌灌注情况.结果 RT-3DE与GSPECT MPI测定各组患者CRT术前整体心功能相关性良好;RT-3DE可以准确评价心衰患者的局部心功能;GSPECT MPI能够有效地反映心衰患者的心肌灌注情况.结论 RT-3DE与GSPECT MPI在评价心衰患者心功能及心肌灌注情况各有优势,将两者结合对于综合评价心衰患者CRT术前的心功能具有互补作用.     

产前超声观测胎儿主动脉瓣下圆锥连接在筛查胎儿完全型大动脉转位中的应用价值

目的 探讨产前超声观测胎儿主动脉瓣下圆锥连接对诊断胎儿完全型大动脉转位的临床价值.方法 回顾分析22例经引产后尸检证实的完全型大动脉转位胎儿的超声心动图资料,总结其异常声像图特点.结果 22例中二维超声心动图均显示主动脉瓣下圆锥连接声像图特征,其中18例在左室长轴观显示两条大动脉前后平行走行,17例心底短轴观显示右室流出道包绕主动脉根部形态消失,9例显示室间隔完整,13例合并室间隔缺损,2例合并左室流出道狭窄.22例中20例主动脉与肺动脉呈右前左后排列,2例呈正前正后排列.结论 产前超声观测主动脉瓣下圆锥连接对诊断胎儿完全型大动脉转位具有重要临床价值.

Abstract：

Objective To investigate the value of prenatal ultrasound observation of subaortic conical connection in the diagnosis of complete transposition of great arteries(TGA).Methods Echocardiography findings of 22 cases with complete TGA confirmed by autopsy were retrospectively analyzed and summarized.Results All cases were shown subaortic conical connection on two-dimensional echocardiography,the two great arteries were parallel in 18 cases on left ventricular long-axis view,the character of normal right ventricular outflow tract surrounding the aortic root disappeared in 17 cases.There were 13 cases with ventricular septal defect and 2 cases with left ventricular outflow tract obstruction.Aorta and pulmonary artery were shown in right anterior and left posterior position among 20 cases,and in anterior and posterior position in 2 cases.Conclusions Prenatal ultrasound observation of subaortic conical connection is of great value in the diagnosis of complete TGA.